GB∕T 40903-2021 纺织品 DNA分析法鉴别某些特种动物纤维 山羊绒、绵羊毛、牦牛绒及其混合物

纺织品DNA分析法鉴别某些特种动物纤维Textiles—IdentificationofsomeanCashmere,wool,yakandthei 国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会 I 1 2 26设备和仪器 2 3 4 410验证 711结果判定 812精密度 913试验报告 9 附录B(资料性)额外的DNA纯化 附录C(资料性)等效的DNA抽提方法 附录D(资料性)各类纺织产品的应用实例 附录E(资料性)方法重复性和再现性 I——第3章对应ISO——第4章对应ISO——第5章对应ISO18074:2015中的第3章；18074:2015中的第4章；18074:2015中的第5章；18074:2015中的第2章；●用修改采用国际标准的GB/T6682代替了ISO36Ⅱ12PCR扩增DNA聚合酶DNApolymeraseforPCRmethod与山羊绒线粒体DNA序列一致的引物。与绵羊毛线粒体DNA序列一致的引物。与牦牛绒线粒体DNA序列一致的引物。4原理通过化学和酶的处理抽提出动物纤维中的DNA,经离心沉淀对DNA进行纯化。分别使用山羊5注意DNA分析的鉴别结果在样品染色处理程度较轻或是浅色染色的情况下有着很高的准确性。当纺织产品经过深度加工或高温处理时，线粒体DNA可能遭到破坏。在此情况下，由于PCR扩增受到抑制，使鉴别产生一定的困难。纺织产品如受别的物种污染，比如绵6.1微量移液器及吸头：能够准确移取(0～20)μL(±0.20μL),(20～200)μL(±1.60μL),(200~3——500mmol/LEDTA(7.5),2mL; NaCl,170mg; 459.4DNA纯化9.4.7将超滤离心装置于4℃,14000g离心12min。6引物名称引物序列山羊绒下游下游下游通用下游 ——MgCl₂,1.5mmol。7温度/时间1扩增最后的延伸11将凝胶置于可密封塑料盒(6.12)中。加入含有EB的溶液100mL,将凝胶在溶液中浸染8在9.3描述的DNA抽提过程不投入动物纤维，即DNA反应溶液中无样品DNA。每批试验均需性对照。每次试验均需完成一次添加动物纤维的抽提扩增。该验证可观察到PCR扩增。当10.3所述阳性对照未出现扩增片段时，进行本操作。在PCR反应体系中加入指定的单个阳性当10.2所述阴性对照出现了阳性条带时，进行本操作。PCR反应液中不加DNA,应观察不到若动物纤维的试验结果为阴性，则将DNA标准引物及相应的DNA加入反应体系中进行PCR扩PCR反应溶液样品DNA加入反应DNA加入反应纤维制样否是否否否是是否否否是是否否否扩增是是是是是检测是是是是是——当反应体系不含DNA(10.2和10.5)发生了扩增时，此次试验不可信；当验证试验中有加入特定片段应通过与其参照迁移DNAmarker的信号强度比较来判定。9——当验证试验完全正常时，可通过特定动物引物是否引起DNA扩增产物来确定动物纤维的DNA不提取，DNA提取，纤维样品扩增不扩增扩增扩增不扩增扩增不扩增不扩增扩增扩增不扩增扩增者未扩增的扩增可信不扩增不扩增 扩增—不扩增a)采用的文件编号；c)聚合酶及PCR的反应条件；d)产品组分的测定结果；e)其他偏离所述操作的详细说明。DNA扩增经历以下步骤。每经过一个完整的PCR循环DNA片段就会倍增。如图A.1的图文表A.2.1第0步：加热使DNA螺旋双链打开成为两条单链。反应中起到引发和有选择性地引导单核苷酸复制成为新的DNA链。DNA片段的长度由这一步骤A.2.3第2步：两种扩增同时在这一步发生：1)第1步的扩增；2)另一种扩增。另一种扩增是以第1步A.2.4第3步：第1步和第2步的扩增继续进行。扩增产生了大量长度由两端引物决定的新的DNAA.2.5第4步：第1步、第2步、第3步继续重复进行。最主要的扩增发生在两端由引物决定长度的图A.1DNA片段的PCR扩增过程B.2DNA纯化方法C.3.1蛋白酶K溶液：称取180mg蛋白酶(>30单位/mg),溶于10mL水中，分装后置于-20℃——CTAB(C.3.3),2g;———0.5mol/LEDTA(C.3.4),40mL;C.4.2将离心管置于56℃振荡搅拌器(C.2.3),以500r/min的速度振荡过夜(至少8h)。标签标有山羊绒的染色产品购自市场。这些样品同时进行了显微镜检测和DNA分析，O表示检出。结果见表D.1。表D.1实际样品的DNA分析结果显微镜观察山羊绒山羊绒1O2OO3紫色针织OO4OO5OOOOO6OOOOOO7黑色针织OOO8OOO9OOOOOOOOO黑色毛毡OOOOOOOOOOOOOO黑色针织OO(弱)OO(弱)OOOOO黑色针织OO黑色针织OOOOOOOO黑灰针织OOOOE.1重复性E.1.1.1样品E.1.2.2聚合酶及PCR条件MM阳性对照E.1.3.2聚合酶及PCR条件MM阴性对照特异性条带一E.3再现性E.3.1试验样品所用的样品即为E.1中使用的100%样品。E.3.2实验室E.3.3试验结果使用每种动物纤维的引物分别对4个样品及1个阴性对照进行测试。表E.1显示与期待的试验结引物样品山羊绒绵羊毛阴性对照山羊绒绵羊毛织物A为一块黑色50%山羊绒/50%绵[1]GB/T6529纺织品调湿和试验用标准大气(GB/T6529—2008,ISO139:2005,MOD)[2]GB/T11951天然纤维术语(GB/T11951—2018,ISO6938:2012,MOD)[3]GB/T36433纺织品山羊绒和绵羊毛的混合物DNA定量分析荧光PCR法[5]Ausubel,F.M.;Brent,R.;Kingston,R.E.;Moore,E.E.;SeidmaK.CurrentProtocolsinM