国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法 第15部分：沙门氏菌_第1页
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1国境口岸环介导恒温扩增(LAMP)检测方法第15部分：沙门氏菌SN/T3306的本部分规定了国境口岸检测疑似样本、食品等样品中沙门氏菌的环介导恒温扩增本部分适用于国境口岸沙门氏菌的筛选检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6628分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCH)技术的应用3缩略语下列缩略语适用于本文件dNTP:脱氧核苷三磷酸(deoxyribomucleosidktriphosphate)LAMP:环介导恒温扩hop-mediatradisnthernlamplification)4生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应由通过生物安全培训并具备分子生物学检测相关资质的工作人员检测沙门氏菌。所有培养物和废弃物应参照GB19489中的有关规定执行。5防污染措施防止污染措施应符合WST230的规定。6技术概要根据沙门氏菌的特异性序列基因设计特异性内引物、外引物各一对，或再增加环状引物一对，2特异性识别靶序列上的独立区域。利用Bs7酶启动循环链置换反应，在特异性基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg“结合，产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀，可观察判断结果；另加入核酸显色液，可观察颜色变化判定结果。7试剂和材料7.1引物：根据沙门氏菌属特有的肥序列ctA基因设计一套特异性引物，引物如下：7.2DNA提取液：含20mmol/LTris-HCI(pH8.0)、2mmolLEDTA和1.2%TnionX-100。7.3dNTPS:每种核苷酸浓度10mmolL。7.510×ThermoPol缓冲液：含200mmol/LTris-HCI(pH8.8)、100mmol/LKCI、100mmolL7.7甜菜碱：5molL。7.9乙醇：75%。7.10阳性对照：可溯源的标准菌株，或含目的片段的DNA亦可。7.11耗材：0.2mL和15mL塑料离心管，吸头。7.12实验用水符合GB/T6628中一级水的要求。8仪器和设备8.1移液器：量程0.5pL~10μL,量程10pL~100pL,量程100pL~1000μL。8.2高速台式离心机：≥70

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