【单因素实验和正交实验验证提取条件影响多糖提取率实证7700字（论文）】

提取时间2.5h补气和血。95%乙醇乙醚浓硫酸丙酮苯酚标准葡萄糖溶液干银耳实体干品福建省古田闽越食品有限公司干银耳浸泡处理球磨机破壁处理超声波银耳细胞破壁热水提取离心去残渣粗多糖干品干燥洗涤沉淀物质收集离心醇析浓缩上清液称取银耳10g，放入烧杯中加入一定量蒸馏水浸泡100min，取浸泡水后的银耳经机械破碎一定时间，本实验采用湿法机械粉碎，将复水完全后的原料进行湿法粉碎，使饱胀吸水的银耳细胞在机械力的作用下破裂，更有利于内容物的析出，更好的提高提取效率。在一定的时间、温度条件下，经超声波细胞破壁银耳多糖热水提取法处理后，趁热过滤，滤液合并80℃水浴锅中搅拌浓缩至透明浆状，，弃去残渣，上清液加4倍量无水乙醇，沉淀，离心抽滤，收集沉淀，然后用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，收集沉淀物洗涤抽滤，而后干燥的粗多糖干品。分别将料液的加水量比、提取温度、提取时间、破壁时间作为提取条件为横坐标，提取后的多糖得率作为纵坐标。见图1图2图3图4。选择料液的加水量比、提取温度、提取时间、破壁时间作为水平条件。详见表6。精确称量110℃干燥恒重的无水葡萄糖10mg，加入一定量的蒸馏水溶解，定容，摇匀，即得葡萄糖对照品溶液。苯酚溶液：称取5g苯酚，用一定量的蒸馏水溶解，定容至100ml，得5%苯酚溶液。苯酚-硫酸取粗多糖干品2.0mg，用蒸馏水溶解，转移至50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，从中吸取2ml，然后加入5%的苯酚溶液1.0ml及浓硫酸5.0ml充分摇匀，室温放置30min分钟，测定在490nm处的吸光度REF_Ref5069\r\h[12]，代入用标准葡萄糖溶液计算得到的方程计算多糖含量，然后根据下列公式计算多糖的提取率：提取率(%)=(CV×稀释倍数)×0.9/M×100%（C为测得吸光度对应的质量浓度，V为提取液的体积，0.9为葡萄糖换算成多糖的正交系数，M为银耳碎粉质量）分别用移液管量取葡萄糖标准溶液于试管中，并按顺序编号1、2、3、4、5，分别加蒸馏，各精密加入5%苯酚溶液1.0ml，震荡后，准确加入浓硫酸5.0ml，充分摇匀，见表3。室温放置15min，后置40℃水浴保温15min，取出后冷却至室温，在490nm测定吸光度A。表3含量测定标准曲线制作管号12345标准糖溶液/ml0.81.0蒸馏水/ml1.21.0苯酚试剂/ml1.01.01.01.01.0浓硫酸/ml5.05.05.05.05.0

表4正交试验因素水平因素ABCD水平料液加水量比提取温度提取时间破壁时间单位g/ml℃/h/min11：50801.5621：55852.0731：60902.58由表5可见，极差B>A>C>D，即提取条件对银耳多糖提取率的影响：提取温度>料液加水量比>提取时间>破壁时间。不同水平情况中，料液加水量比K3>K2>K1，则最佳水平为A3；提取温度K3>K2>K1，则最佳水平为B3；提取时间K3>K1>K2，则最佳水平为C3；破壁时间K1>K2>K3，则最佳水平为D1。最佳工艺是A3B3C3D1，即提取料液加水量比为1：60（g/ml），提取时间为2.5h，提取温度为90℃，破壁时间为6min。由图表3可知，B的F值最大，其次是A，再次是C、D，即对银耳多糖提取率的影响提取温度>料液加水量比>提取时间>破壁时间。关于粗多糖提取时温度条件对实验的影响展开分析。表6提取多糖的料液在不同提取温度下的颜色序号提取温度℃提取多糖的料液120颜色无明显变化260颜色呈透明有光泽370颜色呈透明有光泽480颜色呈透明有光泽5110颜色呈浅透明有光泽6120颜色变成浅棕色取浸泡后破壁称取银耳共6份，放入烧杯中加水混合，将浸泡100min的银耳经机械破碎，再经超声波细胞破碎热水提取法处理后，浸提银耳多糖物质，实验结果是在不同温度下提取多糖料液颜色变化。如果提取中温度过高超过120℃，银耳多糖的颜色变成浅棕色，温度过低低于20℃，多糖物质的颜色无明显变化。注意为了防止提取料液颜色变棕色，料液机械破壁后银耳重量控制在0.150.25克，若银耳子过大或过小对后面使用超声波细胞破壁热水提取率有影响使银耳细胞的多糖分子破壁不均匀，可以通过来调整机器螺丝松紧程度及观察超声波机器按符合要求的运转一周转盘，提高银耳多糖提取率。等待提取银耳多糖含量达到要求后再进行鉴定多糖，需要转到周转盘，温度需要控制在20.526.5℃，相对湿度应控制在45﹪65﹪，观察监控温湿度高低变化情况。从表6可以得出结论：提取的温度在60110℃，料液颜色透明有光泽，符合要求。表7不同温度下浸泡前后的重量编号温度（℃）时间（min）未浸泡重量(g)浸泡后重量（g）1201001013.482401001013.933601001014.604801001015.6251001001013.95由表7可知，在浸泡时间相同的条件下，当温度超过80℃是，浸泡后的重量在减少，说明温度会影响浸泡银耳多糖的重量，可能是由温度升高导致细胞膜通透性升高，内容物渗出造成的，当温度在20℃80℃时，浸泡后的重量随着温度升高而增加。提取时间为2.5h陈丽娟,杨继国,宁正祥.银耳多糖湿法打浆快速提取工艺的研究[J].中国食品添加剂,2017(01):156-160.钟咏汕,陈晓宁,林程,魏奇,林俊毅,江玉姬,刘斌,陈炳智.不同浸泡时间对银耳营养物质损失的影响[J].福建农业学报,2017,32(12):1370-1374.徐灿,刁嘉茵,王淑美.银耳多糖的药理研究进展[J].今日药学,2018,28(03):207-210.刘光荣,马诗经,韩萍,车飙,林丽,杜志云.银耳多糖提取工艺优化及其对SDS诱导HaCaT细胞损伤的保护作用[J].中国食用菌,2021,40(01):97-102.商佳琦,邹丹阳,滕翔宇,范荣,付玲,李雪晴,刘宁,邵美丽.5种食用菌多糖的结构特征及抗氧化活性对比[J].食品工业科技,2020,41(15):77-83+89.刘蔷,刘磊,康传利,杜帅.银耳多糖的制备工艺及研究进展[J].生物产业技术,2019(05):58-63.SHIGEOUKAI,KAZUOHIROSE,TADASHIKIHO,etal.AntitumorActivityonSarcoma180ofthePolysaccharidesfromTremellafuciformisBERK[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin,1972,20(10):2293-2294.高磊,张帆,王毅飞,叶景润,王致鹏,马岩,陈伟.银耳多糖研究进展[J].安徽农业科学,2020,48(24):13-16+19.靳胜英,李久长.银耳多糖提取工艺的研究[J].山西食品工业,1995(03):23-25+36.邓家诚,刘永靖,张磊,杜娟,李贵文.微波辅助提取银耳多糖的工艺优化研究[J].江苏科技信息,2016(12):79-80.孙东.银耳多糖提取工艺优化及其性质的研究[D].天津科技大学,2015.张泽庆.防风多糖的提纯、结构分析及生物活性研究[D].陕西师范大学,2008.吴依娜.银耳多糖的提取及其在洗发水中的应用研究[D].浙江大学,2019.陈岗.银耳多糖的功能特性及其应用[J].中国食品添加剂,2011(04):144-148.韩英,徐文清,杨福军,沈秀,洪阁,黄洁,周则卫.银耳多糖的抗肿瘤作用及其机制[J].医药导报,2011,30(07):849-852.田春雨,薄海美,李继安.银耳多糖对实验性2型糖尿病大鼠血糖及血脂的影响[J].辽宁中医杂志,2011,38(05):986-987.张闪闪,杨嘉丹,赵文婷,刘鸿铖,刘婷婷.加压热水浸提银耳多糖的工艺优化、结构鉴定及抗氧化活性分析[J/OL].吉林农业大学学报:1-11[2021-04-21]./10.13327/j.jjlau.2020.5105张智,焦春伟,胡惠萍,潘鸿辉.食用菌抗衰老研究进展[J].微生物学杂志,2010,30(03):78-81.申建和,陈琼华.木耳多糖、银耳多糖和银耳孢子多糖对实验性血栓形成的影响[J].中国药科大学学报,1990(01):39-42.吴子健,陈庆森,闫亚丽,马芳,李荣华,郑俊清.银耳多糖对嗜酸乳杆菌L101发酵生长影响的研究[J].食品研究与开发,