土壤过氧化氢酶（Solid-CatalaseS-CAT）试剂盒说明书_第1页
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第第页土壤过氧化氢酶（Solid-Catalase，S-CAT）试剂盒说明书土壤过氧化氢酶（SolidCatalase，SCAT）试剂盒说明书微量法100管/48样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做预测定测定意义：SCAT是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2清除系统中具有重要作用。测定原理：H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应SCAT活性的高低。需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水试剂组成和配制：试剂一：液体300μL×1瓶，4℃保存；临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存（如出现结晶析出，60℃90℃水浴溶解后使用）；试剂三：液体3mL×1瓶，4℃保存。样品处理：新鲜土样自然风干或37度烘箱风干，过30~50目筛。测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。2、测定前务必准备96孔UV板一块（UV板不是普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，检测波长小于340nm务必使用UV板）。3、加样表试剂名称测定管无基质管无土管风干土样（g）0.030.03试剂一（μL）260260蒸馏水（μL）26025℃振荡培养20min试剂二（μL）101010混匀8000g，25℃离心5min，取180uL上清试剂三（μL）202020混匀，240nm处记录各管吸光值A。注意：每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。SCAT活性计算：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下单位的定义：每天每g风干土样催化1μmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。计算公式：SCAT（μmol/d/g）＝[(A无土管A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=16.5×（A无土管A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，3×104L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；T：反应时间，20min=1/72d；W：样本质量，0.03g。b.用96孔板测定的计算公式如下单位的定义：每天每g风干土样催化1μmolH2O2降解定义为一个酶活力单位。计算公式：SCAT（μmol/d/g）＝[(A无土管A测定管+A无基质管)×V反总÷（ε×d）×106]÷W÷T=33×（A无土管－A测定管+A无基质管）V反总：反应体系总体积，3×104L；ε：过氧化氢摩尔消光系数，4.36×104L

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