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农业部2122号公告一16—2014转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米MON810及其衍生品种定性PCR方法I农业部2122号公告—16—2014本标准代替农业部869号公告—9—2007《转基因植物及其产品成分检测抗虫玉米MON810及——修改了原理中关于预期扩增产物的表述(见4,2007年版的4);——-修改了定性PCR方法的引物序列(见5.12～5.13,2007年版的5.12);——修改了定性PCR方法的反应体系(见表1,2007年版的表1);——增加了资料性附录(见附录A)。-—农业部869号公告—9—2007。1抗虫玉米MON810及其衍生品种定性PCR方法农业部1861号公告—3—2012转基因植物及其产品成分检测玉米农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品成分检测抽样zSSIIb基因zSSIbgene25.12zSSIIb基因PCR引物：zSSIIb-F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGMON810-F:5'-ACCTCGAGATTTACCMON810-R:5'-TGCTGCAGGTGGTCT5.17定性PCR反应试剂盒37.5.1.2.1每个试样PCR反应设置3次平行。终浓度水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)25mg/LDNA模板总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液。根据TaqDNA聚合酶的浓度确定其体积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。分数为0.1%～1.0%的玉米基因组DNA,或采用MON810转化体特异性序列与非转基因玉米基因组4农业部2122号公告—16—2014增片段是否为目的DNA片段，按照7.8和7.9的规定执行。将回收的PCR产物克隆测序，与转基因抗虫玉米MON810转化体特异性序列(参见附录A)进行阳性对照PCR反应中，zSSIb内标准基因和MON810转化体特异性序列得到扩增，且扩增片段8.2.2zSSIIb内标准基因片段得到扩增本标准PCR方法的检出限为1g/kg。5农业部2122号公告—16—20141ACCTCGAGATTTACCTGATCCGCTACAACGCCAAGC71CTGGCCGCTGAGCGCCCCCAGCCC141GATGTGGGCTGCACCGACCTGAACGAGGACTTTCGG2

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