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农业部2122号公告—15—2014转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt176及其衍生品种定性PCR方法I农业部2122号公告—15—2014本标准代替农业部869号公告—8—2007《转基因植物及其产品成分检测抗虫和耐除草剂玉米Bt176及其衍生品种定性PCR方法》。本标准与农业部869号公告—8—2007相比，除编辑性修改外，——修改并增加了规范性引用文件(见2,2007年版的2);——修改了PCR检测反应体系(见表1,2007年版的表1);——修改了PCR检测实验操作的技术细节(见7,2007年版的7);——修改了样品检测结果分析和表述(见8.2,2007年版的8.2);—增加了检出限(见9)——增加了资料性附录(见附录A)。1农业部1861号公告-3—2012转基因植物及其产品成分2zSSIIb-1F:5'-CTCCCAATCCTTTGAzSSIIb-1R:5'-TCGATTTCTCTCTTGGBt176-F1:5'-TTCAAGCACGGGAABt176-R1:5'-GAGCGAGAACACGAGAA37.5.1.2.1每个试样PCR反应设置3次平行。水10×PCR缓冲液dNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液。根据Taq酶的浓度确定其体积，并相应调整水的体积，使反应体系总体积达到25.0μL。7.5.2对照PCR反应米基因组DNA,或采用Bt176转化体特异性序列与非转基因玉米基因组相比的拷贝数分数为0.1%~农业部2122号公告—15—20148的规定对PCR扩增结果进行分析。如需通过序列分析确认PCR扩增片段是否为目的DNA片段，按照7.8和7.9的规定执行。将回收的PCR产物克隆测序，与转基因抗虫和耐除草剂玉米Bt176转化体特异性序列(参见附录阳性对照PCR反应中，玉米内标准基因和Bt176转化体特异性序列得到扩增，且扩8.2.1玉米内标准基因和Bt176转化体特异性序列均得到扩增，且扩增片段大小与预期片段大小一551CCTGCCGGTACTGCCCCGTCCGGTCCTGCCC201AGTCGATA

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