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转基因植物及其产品成分检测抗虫水稻科丰2号及其衍生品种定性PCR方法2013-12-04发布2013-12-04实施I农业部2031号公告—7—20131农业部2031号公告—7—2013抗虫水稻科丰2号及其衍生品种定性PCR方法本标准规定了转基因抗虫水稻科丰2号转化体特异性的定性PCR检测方法。本标准适用于转基因抗虫水稻科丰2号及其衍生品种以及制品中科丰2号转化体成分的定性PCRGB/T6682分析实验室用水NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品检测抽样农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化科丰2号外源插入片段3'端与水稻基因组的连接区序列，包括整合序列3'端部分序列和水稻基因4原理根据转基因抗虫水稻科丰2号转化体特异性序列设计特异性引物，对试样DNA进行PCR扩增检测。依据是否扩增获得预期的DNA片段，判断样品中是否含有科丰225.4500mmol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0):称取SPS-F:5'-ATCTGTTTACTPEPC-F:5'-TCCCTCCAGAAGGTCTTTPEPC-R:5'-GCTGGCAACTGGTTGGKF2-F:5'-TAGAGCAGCTTGAGCTTGKF2-R:5'-GCACGGACTATACAAGTTGT37.5.1试样PCR反应以非转基因水稻基因组DNA作为阴性对照；以转基因水稻科丰2号质量分数为0.1%～1.0%的水稻基因组DNA,或采用科丰2号转化体特异性序列与非转基因水稻基因组相比的拷贝数分数为水10×PCR缓冲液XdNTPs混合溶液(各2.5mmol/L)总体积“—”表示体积不确定。如果PCR缓冲液中含有氯化镁，则不加氯化镁溶液，根据TaqDNA聚合酶的浓度确定其体积，注：水稻内标准基因PCR检测反应体系中，上、下游引物分别为SPS-F和SPS-R或PEPC-F和PEPC-体特异性PCR检测反应体系中，上、下游引物分别为KF2-F和KF2-R。451TAGAGCAGCTTGAGCTTGGATCAGATTGTTTGCTCT

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