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文档简介

尿蛋白的定量测定

（双缩脲法）

学习尿蛋白的测定方法加深对尿蛋白的认识及其测试的意义掌握尿蛋白指标在运动训练中的应用一、实验目的

蛋白质分子中含有许多肽键，在碱性溶液中能与Cu2+作用产生紫红色络合物，与双缩脲分子结构相似，故称双缩脲反应。其紫红色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可用比色法测定其含量。二、实验原理

三、试剂

15N硫酸溶液。1.5%钨酸钠溶液双缩脲试剂用一次性尿杯留取尿液（如测24h尿蛋白，则需将24h尿液混匀后留样）。用pH试纸测试尿液酸碱度，若pH超过8.0，用少量30%乙酸调节至中性偏酸，用尿蛋白试纸做定性测试，若尿蛋白在“+++”至“++++”之间，则需将尿液稀释5倍。取1支大离心管，标号，按表1操：四、实验操作

离心管尿液或稀释尿液（ml）5%硫酸溶液（ml）1.5钨酸钠溶液（ml）5.02.52.5充分混匀后，静置10分钟，离心5分钟(3000转/分)，倾去上清液,将试管倒置沥干，保留沉淀表1尿蛋白的提取另取6支大试管，分别作为空白管及标准管1~5，上述含沉淀物的离心管为测定管，标号后按表2操作：四、实验操作

空白管标准管测定管12345生理盐水1.00.80.60.40.2—1.0标准蛋白液—0.20.40.60.81.0—双缩脲试剂4.04.04.04.04.04.04.0充分混匀后，置37℃水浴15分钟，以空白管调零，540nm比色表2尿蛋白定量测定计算公式：（1）标准管法尿蛋白（mg%）=OD测/OD标×Cs

×尿液稀释倍数（2）绘制标准曲线，查出测定管结果。五、实验结果

尿液较浑浊时，应先加热清除无机盐结晶。六、注意事项

正常成年人尿中蛋白质含量很少，其浓度在10mg%以下，日排出总量不超过150mg。运动员安静状态下尿蛋白质含量与一般人没有差异。尿蛋白排出量随强度的增大而增加。采样时间：运动后15分钟，因为这时尿蛋白达最高值，20分钟尿蛋白开始下降，4小时内基本恢复，时间延长说明机能下降。结果大于零而小于10mg%，说明生理条件正常，或运动量合适。测定结果大于10mg%，分析近期运动强度和负荷量的情况七、指标应用

结果为零可能有如下因素：离心之后不小心将蛋白质沉淀倒掉；操作过程中没有及时摇匀，蛋白质沉淀没有溶解；加入生理盐水等过多，将蛋白质稀释；加钨酸钠溶液后静置时间不够，蛋白质没有充分沉淀下来；加双缩脲试剂后

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