SNT 1961.6-2013 出口食品过敏原成分检测 第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分_第1页
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出口食品过敏原成分检测第6部分：实时荧光PCR方法I 第6部分：实时荧光PCR方法SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原胡桃成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品原料或加工食品中过敏原胡桃成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为0.01%(质量分数)。GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测也称核桃属胡桃科的胡桃属，共包括12个种。这1p个种又被分为4大类，包括英国胡/核桃2均用无DNA酶污染的容器分装。名称序列内参照探针5'-CCTGAGAAACGGCTACCAT-3’5'-CGTGTCAGGATTGGGTAAT-3’5'-(FAM)-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-(TAMRA)-3’真核生物.18SrRNA基因胡桃5’端引物胡桃3’端引物胡桃探针5'-CGCGCAGAGAAAGCAGAG-3’5'-GACTCATGTCTCGACCTAATGCT-3’5'-FAM-TTGTGCCTCTGTTGCTCCTC5.2十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium5.3三羟甲基氨基甲烷(tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris)。5.4乙二胺四乙酸二钠(disodiumethylenediaminetetraaceticacid,Na5.1070%乙醇。5.13蛋白酶K溶液(20mg/mL)。5.141.2mol/LNaCl溶液。5.150.1×TE缓冲液(pH8.0):1mmol/LTris,0.1mm6.3实时荧光PCR仪。36.9pH计。7.1.1将样品用组织研磨器研碎后称取1g~2g样品于15mL离心管中，加入5mLCTAB提取缓冲7.1.2以2000g离心10min或更长时间直至悬浮部分几近澄清，小心转移上清液1mL至新的空白颠倒混匀，室温20℃~25℃,孵育60min。异丙醇，颠倒混匀，室温20℃~25℃,孵育至少20min,以14500g离心至少10min。c=A₂6o×N×50当浓度为10μg/mL～100pg/mL,Az₆0～A2g。比值在1.7～1.9之间时，适宜于实时荧光PCR7.3实时荧光PCR检测7.3.1实时荧光PCR反应体系7.3.2实时荧光PCR反应参数4c)如35.0<Ct值<40.0,则重复一次。如再次扩增后Ct值仍为<40.0,则判定被检样品阳性；5(资料性附录)过敏原胡桃成分的基因扩增靶标参考序列cgcgcagagaagcagaggccggg

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