《仪器分析》课件-高效液相色法

高效液相色谱法（一）2高效液相色谱仪概述一高效液相色谱仪结构二高效液相色谱仪使用三高效液相色谱仪数据分析四3以气相色谱为基础，在经典液相色谱（LC）实验和技术基础上建立的一种液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）一离心与离心机的概念4HPLC的特点高压压力可达150～300kg/m2高效柱效高，在一根柱中同时分离成分可达100种高灵敏度紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg高速流速为0.1～10.0mL/min一离心与离心机的概念5通常15-30min一个样，某些样品5min可完成速度快可选择固定相和流动相达到最佳分离效果分辨率高用一根色谱柱可分离不同的化合物反复使用紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg灵敏度高样品经过色谱柱后不被破坏容易回收与经典LC相比HPLC的优点6HPLC的适用范围适合分析高沸点、热不稳定、离子型的样品应用范围广泛，适用于医药、环保、石化、生命科学、食品工业、农业等多个领域在已知的化合物中能用液相色谱分析的可占70～80%7一二高效液相色谱仪结构812345高压输液系统色谱柱系统（数据记录处理系统）工作站进样系统

检测系统工作流程9

高压输液系统

高压输液系统贮液器、过滤器、高压输液泵、梯度淋洗装置主要部件：工作系统10进样系统流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置色谱柱系统柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm检测器系统紫外检测器、荧光检测器、示差折光检测器、光电二极管阵列检测器色谱工作站可同时采集一到两个独立检测器信号工作系统11操作步骤冲洗柱子冲洗管路关主机关电脑关电源准备

清洗、关机开机、进样流动相标液样液柱子选择仪器检查开电脑、主机、工作站、参数设置，方法建立、进样三高效液相色谱仪使用12谱图判断对照与样品的主成分保留时间应大致一致保留时间0.95＜T＜1.05拖尾因子两次谱图的峰面积应相差不超过1%重复性一般应≥1.5分离度应≥规定的理论塔板数目理论塔板数四高效液相色谱仪数据分析131、定性方法

利用已知标准品定性利用检测器的选择性定性利用紫外检测器全波长扫描功能定性2、定量方法归一化法外标法内标法结果分析四高效液相色谱仪数据分析高效液相色谱法（二）目录HPLC的主要类型及选择01高效液相色谱仪02高效液相色谱的基本理论和实验技术032、主要部件3、高效液相色谱仪的使用1、仪器工作流程010203高效液相色谱仪高效液相色谱仪高压输液系统进样系统色谱柱系统检测系统工作站1、仪器工作流程贮液器高压输液泵过滤器梯度淋洗装置作用：提供足够数量的符合要求的流动相以完成分析工作要求：①必须有足够的容积；②脱气方便；③能耐一定压力；④所用的材质对所使用的溶剂都是惰性的作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱分离系统要求：①泵体材料能耐化学腐蚀；②能在高压下连续工作；③输出流量稳定；④适用于梯度洗脱作用：除杂质类型：溶剂过滤器、管道过滤器作用：缩短时间，使各组分完全分离类型：①高压梯度②低压梯度（一）高压输液系统2、主要部件流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置2、主要部件（二）进样系统色谱柱柱体为直型不锈钢管，内径1～6mm，柱长5～40cm发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效2、主要部件（三）色谱柱系统应用最广，对大部分有机化合物有响应适于：吸收紫外光的物质特点：灵敏度高；线形范围高紫外检测器紫外检测器的重要进展；，计算机快速处理，三维立体谱图光电二极管阵列检测器除紫外检测器之外应用最多的检测器特点：灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；偏转式、反射式和干涉型三种示差折光检测器适于：只能分析自身发光的物质特点：高灵敏度、高选择性荧光检测器2、主要部件（四）检测器系统记录数据