常用pGEX载体图谱

/Rosetta系列的表达菌株可以提供T7RNA聚合酶，它能表达PET系列载体上的外源基因。。。pGEX系列载体上的外源基因不需要T7RNA聚合酶，普通的大肠杆菌经IPTG诱导即可表达Tac启动子是一组由Lac和trp启动子人工构建的杂合启动子，受Lac阻遏蛋白的负调节，它的启动能力比Lac和trp都强。其中Tac1是由Trp启动子的－35区加上一个合成的46bpDNA片段(包括Pribnow盒)和Lac操纵基因构成，Tac12是由Trp的启动子-35区和Lac启动子的-10区，加上Lac操纵子中的操纵基因部分和SD序列融合而成蛋白标签：Amyctagisapolypeptide

\o"Proteintag"proteintag

derivedfromthe

\o"C-myc"c-myc

geneproductthatcanbeaddedtoaproteinusing

\o"RecombinantDNA"recombinantDNA

technology.Itcanbeusedfor

\o"Affinitychromatography"affinitychromatography,thenusedtoseparaterecombinant,overexpressedproteinfromwildtypeproteinexpressedbythehostorganism.Itcanalsobeusedintheisolationofproteincomplexeswithmultiplesubunits.Amyctagcanbeusedinmanydifferentassaysthatrequirerecognitionbyan

\o"Antibody"antibody.Ifthereisnoantibodyagainstthestudiedprotein,addingamyc-tagallowsonetofollowtheproteinwithanantibodyagainsttheMycepitope.Examplesarecellularlocalizationstudiesbyimmunofluorescenceordetectionby

\o"Westernblotting"Westernblotting.Thepeptidesequenceofthemyc-tagis(in1-and3-lettercodes,respectively):N-EQKLISEEDL-C,N-Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-C,whereNstandsfor

\o"Amino-terminus"Amino-terminus

andCstandsfor

\o"Carboxyterminus"Carboxyterminus.Thetagisapproximately1202

\o"Dalton(unit)"Daltons

inatomicmassandhas10aminoacids.Itcanbefusedtothe

\o"C-terminus"C-terminus

andthe

\o"N-terminus"N-terminus

ofaprotein.Itisadvisablenottofusethetagdirectlybehindthesignalpeptideofasecretoryprotein,sinceitcaninterferewithtranslocationintothe

\o"Secretorypathway"secretorypathway.Amonoclonalantibodyagainstthemyc

\o"Epitope"epitope,named9E10,isavailablefromthenon-commercial

\o"DevelopmentalStudiesHybridomaBank"DevelopmentalStudiesHybridomaBankpGEX4T1载体基本信息出品公司:GE别名:pGEX-4T-1,pGEX4T1,pGEX4T1质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4969bp5'测序引物与序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'测序引物与序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4580-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX4T1载体质粒图谱和多克隆位点信息原核生物DNA复制起始点，是DNA链上独特的具有起始DNA复制功能的碱基序列。大肠杆菌的复制起点包括OriC和OriHThrombin凝血酶pGEX4T1载体简介pGEX4T1载体序列LOCUSpGEX-4T-1 4969bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4969/organism="pGEX-4T-1"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..977/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..977/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1019..1041)/label="pGEX_3_primer"promoter1307..1335/label="AmpR_promoter"gene1377..2237/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1377..2237/label="ORFframe3"rep_origin2392..3011/label="pBR322_origin"misc_feature3309..4400/label="lacI"CDS3441..4400/label="ORFframe3"promoter4449..4478/label="lac_promoter"misc_feature4492..4514/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4513..4531/label="M13_reverse_primer"CDS4523..81/label="ORFframe2"misc_feature4540..4695/label="lacZ_a"promotercomplement(4543..4559)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4552..4574)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX4T2载体基本信息出品公司:GE别名:pGEX-4T-2,pGEX4T2,pGEX4T2质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4970bp5'测序引物与序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'测序引物与序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4581-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX4T2载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX4T2载体简介pGEX4T2载体序列LOCUSpGEX-4T-2 4970bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-2ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4970/organism="pGEX-4T-2"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..978/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..974/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1020..1042)/label="pGEX_3_primer"promoter1308..1336/label="AmpR_promoter"gene1378..2238/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1378..2238/label="ORFframe1"rep_origin2393..3012/label="pBR322_origin"misc_feature3310..4401/label="lacI"CDS3442..4401/label="ORFframe1"promoter4450..4479/label="lac_promoter"misc_feature4493..4515/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4514..4532/label="M13_reverse_primer"CDS4524..81/label="ORFframe3"misc_feature4541..4696/label="lacZ_a"promotercomplement(4544..4560)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4553..4575)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX4T3载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX4T3载体简介pGEX4T3载体序列LOCUSpGEX-4T-3 4968bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-4T-3ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENTThiscreatedbyVectorNTICOMMENTVNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4968/organism="pGEX-4T-3"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..976/label="GST(variant)"/gene="GST(variant)"CDS258..980/label="ORFframe3"misc_featurecomplement(1018..1040)/label="pGEX_3_primer"promoter1306..1334/label="AmpR_promoter"gene1376..2236/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1376..2236/label="ORFframe2"rep_origin2391..3010/label="pBR322_origin"misc_feature3308..4399/label="lacI"CDS3440..4399/label="ORFframe2"promoter4448..4477/label="lac_promoter"misc_feature4491..4513/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4512..4530/label="M13_reverse_primer"CDS4522..81/label="ORFframe1"misc_feature4539..4694/label="lacZ_a"promotercomplement(4542..4558)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4551..4573)/label="M13_pUC_fwd_primer"pGEX6P1载体基本信息出品公司:GE别名:pGEX-6P-1,pGEX6P1,pGEX6P1质粒类型:大肠杆菌蛋白表达载体表达水平:高拷贝启动子:Tac克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:4984bp5'测序引物与序列:pGEX5':

GGGCTGGCAAGCCACGTTTGGTG3'测序引物与序列:pGEX3':CCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGG载体标签:N-GST载体抗性:Ampicillin氨苄备注:复制子是pMB1产品目录号:27-4597-01稳定性:瞬时表达Transient组成型:诱导表达病毒/非病毒:非病毒pGEX6P1载体质粒图谱和多克隆位点信息pGEX6P1载体简介pGEX6P1载体序列LOCUSpGEX-6P-1 4984bp DNAcircular SYNDEFINITIONpGEX-6P-1ACCESSIONKEYWORDSSOURCEORGANISMothersequences;artificialsequences;vectors.COMMENT

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VNTAUTHORNAME||FEATURESLocation/Qualifierssource1..4984/organism="pGEX-6P-1"/mol_type="otherDNA"promoter184..212/label="tac_promoter"misc_feature224..246/label="M13_pUC_rev_primer"gene258..992/label="GST"/gene="GST"CDS258..992/label="ORFframe3"misc_feature918..938/label="precision"misc_featurecomplement(1034..1056)/label="pGEX_3_primer"promoter1322..1350/label="AmpR_promoter"gene1392..2252/label="Ampicillin"/gene="Ampicillin"CDS1392..2252/label="ORFframe3"rep_origin2407..3026/label="pBR322_origin"misc_feature3324..4415/label="lacI"CDS3456..4415/label="ORFframe3"promoter4464..4493/label="lac_promoter"misc_feature4507..4529/label="M13_pUC_rev_primer"promoter4528..4546/label="M13_reverse_primer"CDS4538..81/label="ORFframe2"misc_feature4555..4710/label="lacZ_a"promotercomplement(4558..4574)/label="M13_forward20_primer"misc_featurecomplement(4567..4589)/label="M13_pUC_fwd_primer"pET28a载体基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)别名:pET28a,pet28a,pET-28a(+)质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5369bp5'测序引物与序列:T7:5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'测序引物序列:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:N-His,N-Thrombin,N-T7,C-His载体抗性:卡那备注:N端含有Thrombin蛋白酶切位点;pET28a,b,c的差异仅仅存在于多克隆位点处。产品目录号:69864-3稳定性:瞬时表达Transient组成型:组成型Constitutive病毒/非病毒:非病毒pET28a载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET28a载体简介pET-28a-c(+)载体带有一个N端的His/Thrombin/T7蛋白标签，同时含有一个可以选择的C端His标签。pET28a载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。T7RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下终止蛋白翻译。pET30a载体基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)别名:pET30a,pet30a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5422bp5'测序引物与序列:T7:5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'测序引物序列:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:N-His,N-S,N-Thrombin,N-EK,C-His载体抗性:卡那备注:pET30a,b,c的差异只存在于多克隆位点，其他位点不存在。产品目录号:69909-3稳定性:瞬时表达组成型:组成型病毒/非病毒:非病毒pET30a载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET30a载体简介pET-30a(+)载体携带有一个N端的His标签/Thrombin酶切位点/S标签/EK蛋白酶切标签以与一个可选择的C端His标签。载体的多克隆位点见上面的图谱。需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制方向为正方向，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置。T7RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下终止蛋白翻译。pet32a载体基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)别名:pET32a,pet32a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:5900bp5'测序引物:T7：5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'3'测序引物:

T7t:5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'载体标签:thioredoxin(N端);His(中间和C端)载体抗性:氨苄备注:

pET32a载体用于表达可溶性，具有活性功能的蛋白;pET-32a(+)载体具有N端Thrombin（凝血酶）酶切位点，N端肠激酶酶切位点。pET32啊，pET32b，pET32c载体的差异主要是在于多克隆位点，其他地方完全一致。

产品货号:69015-3稳定性:瞬时表达组成型:组成型病毒/非病毒:非病毒pet32a载体质粒图谱和多克隆位点信息

pet32a载体简介pET32系列载体是设计用来克隆构建和高水平融合表达表达带有109个氨基酸Trx标签的蛋白质序列。将基因插入到载体的多克隆位点，能够获得融合表达蛋白质。同时融合蛋白包含有His标签和S标签，这些可以用于蛋白表达检测和纯化过程。载体的多克隆位点见上面的图谱。需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322载体的复制方向为正方向，所以T7表达区域在图谱中是处于反向的位置。T7RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够产生，并启动蛋白表达，同时蛋白表达将被T7终止子序列(Cat.No.69337-3)的作用下终止蛋白翻译。pET23a载体基本信息出品公司:EMDBiosciences(Novagen)别名:pET23a,pet23a质粒类型:大肠杆菌蛋白表达表达水平:高克隆方法:多克隆位点，限制性内切酶载体大小:3666bp5'测序引物: