毕业论文-延胡索酸二钠对断奶羔羊小肠发育情况的影响

1/1毕业论文--延胡索酸二钠对断奶羔羊小肠发育情况的影响延胡索酸二钠对断奶羔羊小肠发育情况的影响王婷，潘晓亮*，王新峰*，赖瀚卿1（石河子大学动物科技学院，新疆石河子，832000）关键词：

延胡索酸二钠；绒毛高度；隐窝深度；绒毛高度/隐窝深度摘要：

【目的】旨在探讨延胡索酸二钠对不同肠段内环境的影响。

【方法】选用30只试验羊，随机分为3组，每组10只。

对照组饲喂基础日粮，试验组在基础日粮基础上添加0.5%和1%的延胡索酸二钠，试验期60天。

【结果】实验结果显示：

（1)与对照组相比，添加延胡索酸二钠组的小肠绒毛高度均显著高于对照组(P0.05)，其中添加0.5%的延胡索酸二钠组的十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛高度分别增加了30.3%、30.1%、45.9%；(2)添加0.5%和1%的延胡索酸二钠隐窝深度（十二指肠和空肠）小于对照组(P0.05)，回肠则是大于对照组；(3)添加了延胡索酸二钠组的十二指肠V/C值明显大于对照组(P0.05)，其中0.5%的添加量效果最好（V/C值增加了58.6%)，1%次之,其他各组之间差异不显著(P0.05)。

【结论】延胡索酸二钠可以影响羔羊肠道的发育。

TheInfluenceOfDisodiumFumarateOnTheSmallIntestinalVillusHeightAndCryptDepthinweaninglambsWANGTing1，PANXiao-liang1*，WANGXin-feng1*，LaiHanqing1(1.DepartmentofAnimalScienceAndTechnology,ShiheziUniversity,Shihezi832000)Keywords:DF（disodiumfumarate）;Villusheight;Cryptdepth;V/C(villusheight/cryptdepth)Abstract：

Itsaimedtoinvestigatetheinfluenceofdisodiumfumarate(DF)onthesmallintestinaldevelopmentoflambs.Thirtysheepwereselectedandrandomlydividedintothreegroups,tensheepeachgroup.Thecontrolgroupwasfedabasaldiet,theexperimentalgroupwith0.5%and1%DFaddedonbasicdiet,theexperimentalperiodof60days.Theresultsshowthat:(1)Comparewiththecontrolgroup,DFgroupeachsegmentvillusheightweresignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P0.05),with0.5%DFtheduodenum,jejunumandileumvillusheightwereincreasedby30.3%,30.1%and45.9%;(2)With0.5%and1%DFthecryptdepth(duodenumandjejunum)werelessthanthecontrolgroup(P0.05),theileumdepthisshallowerthanthecontrolgroup;(3)AddDFduodenumV/Cwassignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P0.05),addtheamountof0.5%wasthebest(V/Cwereincreased58.6%),withadd1%wasthesecond,Thedifferencesbetweentheothergroupswasnotsignificant(P0.05)这段英文语法好1基金项目：

石河子大学高层次人材专项（RCZX201203）和(RCZX201102)；兵团绵羊重点实验室开放课题（2013KLS04）；自然基金项目（31360558）作者简介：

王婷（1990-），女，新疆石河子人，硕士，研究方向：

饲料资源开发利用，(E-mail)wangting14900@sina.com*通讯作者:潘晓亮（1960-），男，江苏丹阳人，博士，教授，研究生导师，主要从事动物营养与环境调控研究，（E-mail）shz_panxiaoliang@王新峰（1971-），男，河南驻马店人，副教授，研究生导师，主要从事动物营养饲料与肠道微生物研究，（E-mail）wxf@像不是很对.Thesedatasuggestthat,theDFcanaffectthedevelopmentoflambsintestinaltract.引言有机酸及其钠盐作为食品添加剂和调味剂应用已经十分普遍，如醋酸，苹果酸及盐酸，柠檬酸等。

但作为动物的饲料添加剂还比较少见，因为当今营养学家们还没有完全发现有机酸在动物营养中所起作用的原理。

最新研究表明，延胡索酸等有机酸[1、2]可改善反刍动物的瘤胃发酵，它可以维持pH值的稳定和降低乳酸的产量，有机酸可促进乳酸利用菌的生长，使乳酸的利用增加，促进其对乳酸的利用，增加二氧化碳的产生量，提高瘤胃内pH值，而且能促进纤维素分解菌的增殖及对纤维素的消化，对提高生产性能有重要意义。

因此，延胡索酸可能是一种有益的反刍动物饲料添加剂。

但是延胡索酸具有一定的酸性，添加后会降低瘤胃内的初始pH。

由于pH值是瘤胃内重要的生化指标，过酸的环境极易导致瘤胃微生态失衡从而导致瘤胃酸中毒。

而延胡索酸二钠盐属于碱性物质则对瘤胃内环境具有一定的缓冲作用，不会引起pH的显著降低。

所以延胡索酸二钠作为饲料添加剂比延胡索酸更为合适。

作为饲料添加剂，DF对绵羊瘤胃微生物的作用研究的不够深入，对瘤胃的影响的报道也不一致，对羔羊肠道发育影响尚未见报道。

本实验通过研究DF对断奶羔羊不同肠段发育情况的影响，为今后广泛运用DF作为饲料添加剂提供科学理论依据。

这段行间距有问题1材料方法1.1试验材料1.1.1试验材料延胡索酸二钠购自陕西交大瑞森渭南化学工业有限责任公司纯度98%1.1.2试验地点新湖总场农场大西北畜牧有限公司种羊场。

1.2试验设计选取体况体重及年龄相近的萨福克和与德美杂交一代羔羊30只，60天左右断奶，将其随机分为3组（即对照组和2个试验组,每组10只），试验时间为60天，自由饮用清洁水。

对照组I饲喂不添加DF的基础日粮；试验组II饲喂0.5%DF添加量的日粮（在风干日粮基础上添加）；试验组III饲喂1%添加量的日粮；试验设计见表1，本试验所使用的饲料配方及营养成分见表2。

表1试验设计日粮DF添加量试验动物/只对照组基础日粮100.5%组基础日粮+0.5%101%组基础日粮+1%10表2本试验饲料配方及营养成分表混合饲料成分（%）月龄1~2月龄（前期料）3~4月龄（后期料）玉米粉3525苜蓿粉450玉米青贮070精料补充料154其他51日粮营养水平（%）粗蛋白（CP）15.0111.03总钙（Ca）1.360.71总磷(P)0.330.29中性洗涤纤维（NDF）22.129.3酸性洗涤纤维（ADF）19.924.5粗脂肪6.135.53注：

精料补充料是用呼图壁县华峰农牧科技有限责任公司生产的新望华峰牌颗粒饲料。

其他包括饲料添加剂、棉籽壳、棉粕、干草、无机盐等。

1.3样品的采集和处理试验第70天，每组随机选择4只，共计12只试验羔羊，颈静脉放血处死，迅速取出十二指肠、空肠及回肠各3厘米左右。

使用0.9%的生理盐水轻轻冲洗干净后，分别浸入4%的多聚甲醛溶液中固定，留待检测不同肠段绒毛高度和隐窝深度2试验方法2.1试验药品[5]。

4%多聚甲醛、PBS缓冲液、各浓度乙醇（75%、85%、95%、100%I、100%II）、无水乙醇二甲苯（无水乙醇与二甲苯的比例为1：

1）、二甲苯、软蜡（46～48℃）、硬蜡（54～56℃）、苏木素（MAIXIN-BIO）、伊红、氨水、0.5%盐酸酒精。

2.2组织学方法立即切取小肠组织块放入4%的福尔马林溶液中固定。

按常规组织学方法，经过75%、85%、95%、100%I、100%II无水乙醇的各浓度乙醇逐级脱水，用二甲苯透明、软蜡透蜡、硬蜡包埋、修块、切片（厚度为5-6m），贴片、烤片，最后进行H.E.染色。

利用光学显微镜对组织切片进行观察，并用Motic-Image-advanced3.2图像处理软件测小肠粘膜结构的指标。

具体步骤如下：

A组织块置固定液中固定24小时h95%后，取出经流水冲洗24小时B组织块经梯度酒精脱水：

70%酒精6-12h80%酒精6-12h90%酒精6-12h95%酒精4-6h100%酒精I1h100%酒精II1hC透明：

二甲苯I1015min二甲苯II10-15minD浸蜡：

依次从脱水栅栏中取出组织放入提前融好蜡的蜡缸中浸蜡2hE包埋：

准备干净的烧杯融化适当的蜡块，将组织块从蜡缸中取出，依次放入叠好的纸盒中，并迅速将融好的蜡液倒入纸盒中，确保组织块在蜡液中不改变位置和方向。

冷凝成蜡条后，修整蜡块（呈梯形，贴标签）F切片：

用旋转切片机连续切片，厚度为4-7微米，切出一片接一片的蜡带；G贴片与烤片：

用粘附剂（蛋白甘油）。

首先在洁净的载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，再将一定长度蜡带或用刀片断开成单个蜡片于温水（＜42℃左右）中展平后，捞至玻片上铺正，将载玻片放入45℃温箱中干燥，但是需要适当的延长时间（3h左右）。

2.3染色2.3.1H.E染色（Hematoxylin和Eosin）的目的染色的目的是使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色以便于观察。

本研究的目的是测定出羔羊小肠绒毛高度和隐窝深度。

这段没必要2.3.2H.E染色步骤常规H.E染色，操作步骤为：

（1）脱蜡：

室温条件下，切片于二甲苯（Ⅰ）5min二甲苯（Ⅱ）5min（2）过渡：

乙醇二甲苯（1：

1）混合液中2～3min（3）梯度乙醇水化：

于无水乙醇（Ⅰ）2min无水乙醇（Ⅱ）2min95%乙醇2min90%乙醇2min85%乙醇2min70%乙醇2min（4）染色：

切片置于苏木素染色5～10min后，立即用水冲洗数次以洗去多余染料（5）分化：

盐酸酒精快速分化5～10s，以镜检为准(6)碱化：

侵入自来水20min，使切片逐渐变为蓝色；0.5%-1%伊红液中染色，35min,自来水冲洗数遍（7）依次浸入75%乙醇85%乙醇95%乙醇均为1-2min无水乙醇（Ⅰ）无水乙醇（Ⅱ）乙醇二甲苯（1：

1）混合液分别为2～3min（8）组织切片透明：

二甲苯（Ⅰ）5min二甲苯（Ⅱ）5min（9）中性树胶封片，显微镜下观察试验方法没必要太详细2.4主要监测指标和方法2.4.1主要检测指标观察和比较羔羊小肠形态和结构的变化情况。

应用Motic-Image-advanced3.2图像处理软件，各段小肠取5张切片，每张切片选5个视野拍照，每张照片测量5根最长的肠绒毛高度(以肠腺绒毛连接处到绒毛顶端为准)、最深的隐窝深度(以肠腺绒毛连接处到肠腺基部为准)。

2.4.2测量方法和数据处理分析光镜下详细观察和计数每组羔羊的十二指肠、空肠、回肠的绒毛高度和隐窝深度。

具体检测方法是：

①取每根肠管横切面，选5根最长且排列整齐的绒毛测量每个肠绒毛的长度；②取每根肠管横切面，测量标准跟肠绒毛的标准一样。

所得数据使用SPSS13.0软件包进行One-Way-ANOVA分析。

结果以平均值标准误表示，P0.05为差异显著，P0.01为差异极显著。

3实验结果3.1H.E染色图片如图所示，分别为70日龄羔羊小肠（回肠、空肠、十二指肠）对照组、添加0.5%DF组和1%DF组的H.E染色(410倍光镜)下的绒毛形态图。

小肠壁的内表面有大量的环形皱襞，皱襞上有许多绒毛状的突起，叫小肠绒毛,其高度称为绒毛高度图中用字母A表示。

小肠隐窝是绒毛根部上皮陷入固有层形成的管状腺，开口于相邻绒毛之间，其深度称为隐窝深度图中用字母B表示。

对照组0.5%DF组1%DF组3.2对十二指肠、空肠、空肠发育的影响表370日龄各组羔羊的绒毛高度、隐窝深度项目对照组绒毛高度（um）V393.5751.20隐窝深度（um）C451.7658.71V/C0.870.45绒毛高度（um）隐窝深度（um）V/C0.930.07回肠绒毛高度327.026.820.5%1%十二指肠a512.8017.99b492.5346.51ba372.4428.78a368.1429.62bA1.380.66B1.340.33B空肠365.9814.55a478.0865.69b494.6165.84b395.2540.10a293.9524.18b374.2836.36aaa1.640.32477.9283.44b1.330.25380.6032.19aab图370日龄回肠HE染色(410倍光镜)图270日龄空肠HE染色（410倍光镜）图170日龄十二指肠HE染色(410倍光镜)（um）隐窝深度（um）V/C311.9965.28367.7457.58308.7725.071.070.191.300.121.240.04注：

大写字母表示差异极显著（p0.01),小写字母表示显著性差异（p0.05),同一行中，不同字母表示差异显著，相同字母表示差异不显著。

3.2.1十二指肠的发育绒毛高度由上表分析可知，添加0.5%和1%的DF与对照组相比差异均显著（P0.05)，以0.5%效果最好，肠绒毛高度增加了30.3%。

隐窝深度添加1%的DF与对照组相比差异显著（P0.05)，隐窝深度减少了18.4%。

添加量为0.5%时差异不显著（P0.05)。

V/C添加0.5%和1%的DF与对照组相比差异极显著（P0.01)，其中以添加量为0.5%效果最好。

论文不能这么列，最好删掉3.2.2空肠的发育绒毛高度由上表分析可知，添加0.5%和1%的DF与对照组相比差异均显著（P0.05)，以0.5%效果最好，肠绒毛高度增加了30.1%。

隐窝深度添加0.5%的DF与对照组相比差异显著（P0.05)，隐窝深度减少了25.8%。

添加量为1%时差异不显著（P0.05)。

V/C添加0.5%的DF与对照组相比差异显著（P0.05)，其中以添加量为0.5%效果最好，添加量为1%时效果次之。

。

3.2.3回肠的发育绒毛高度添加0.5%的DF与对照组相比差异显著（P0.05)，以0.5%效果最好，肠绒毛高度增加了45.9%。

1%效果次之。

隐窝深度添加1%和0.5%的DF与对照组相比差异均不显著（P0.05)，但以添加量为0.5%时效果最好，隐窝深度减少了18.0%，1%效果次之。

V/C添加0.5%和1%的DF与对照组相比差异均不显著（P0.05)。

4讨论肠绒毛(intestinalvillus)是由肠上皮和固有层共同向肠腔突出形成的细小突起，长约0.35～1mm，可使肠腔表面积扩大约10倍，绒毛多呈柱状、叶状或指状等[11、17]。

肠绒毛高度的增加能够使小肠吸收营养物质的面积增大，肠绒毛的完整性及高度决定了小肠的吸收面积，影响营养物质的吸收及动物的生长。

关于不同种添加剂对肠绒毛高度的应用报道也有不少，张运涛等[12]报道，在蛋用仔鸡日粮中添加酵母多糖，可以明显保护雏鸡小肠绒毛。

周琼等[13、14]报道，美洲大蠊粉可使发生病理变化的小鼠肠黏膜及绒毛修复完好，并提高肉鸡的肠绒毛高度。

张玲等[15]报道，鲫鱼中添加木聚糖酶能提高鲫鱼的肠绒毛高度，以0.05%的添加量最好。

本实验得出，添加量为0.5%的DF组的肠绒毛高度明显高于对照组(P0.05)。

十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛高度分别增加了30.3%、30.1%、45.9%。

说明DF具有促进肠绒毛生长发育的功能，但机理尚有待进一步研究。

小肠隐窝可促进小肠的吸收功能。

该试验中可以明显的看出DF组隐窝深度（十二指肠和空肠）小于对照组(P0.05)，虽然回肠在统计上差异不显著,但添加1%的DF组隐窝深度比对照组小。

代兵等[16]（2011）对断奶7日龄的仔猪肠道切片进行了观察，结果表明断奶后7日龄，仔猪十二指肠和空肠绒毛高度较对照组有显著升高，并且显著降低了十二指肠和空肠隐窝深度，这说明在断奶后早期，日粮中的谷氨酰胺对仔猪小肠细胞增殖和维持肠道正常形态具有重要作用。

王书平等[17]（2009）在研究谷氨酰胺在体内的代谢过程及调控机制时发现，谷氨酰胺在体内的生物合成与谷氨酸相同，其主流为葡萄糖转化为丙酮酸，然后经三羧酸循环转变为a-酮戊二酸再合成谷氨酸，谷氨酸再与氨合成谷氨酰胺。

而本实验结果表明日粮中添加DF可以增加小肠绒毛高度，降低隐窝深度。

其可能的机制为，延胡索酸是三羧酸循环的中间产物，日粮中添加一定量的延胡索酸有助于提高三羧酸循环的速度并且增加a-酮戊二酸的合成，最终使谷氨酰胺的合成增加。

绒毛高度/隐窝深度的比值(V/C值)隐窝是肠壁的凹陷，绒毛是肠壁的凸起，隐窝深度增加会减弱营养物质的吸收能力，绒毛高度增加才会增强营养物质的吸收能力，这些都是反映小肠黏膜形态结构及功能最直接的指标[18]。

V/C值综合反映小肠的功能状态，比值下降，表示消化吸收功能下降。

比值上升，消化吸收功能增强。

该实验中添加DF组的十二指肠V/C值明显大于对照组。

这一结果与张祥[19]（2007）的研究报道一致。

综上所述，在饲料中添加一定量的DF能够增加肠绒毛高度，降低隐窝深度，增加V/C值，从而改善肠道的生长发育。

5结论与对照组相比，添加延胡索酸二钠组的小肠绒毛高度均显著高于对照组(P0.05)，其中添加0.5%的延胡索酸二钠组的十二指肠、空肠、回肠的肠绒毛高度分别增加了30.3%、30.1%、45.9%；添加0.5%和1%的延胡索酸二钠隐窝深度（十二指肠和空肠）小于对照组(P0.05)，回肠隐窝深度则是大于对照组；添加了延胡索酸二钠组的十二指肠V/C值明显大于对照组(P0.05)，其中0.5%的添加量效果最好（V/C值增加了58.6%)，1%效果次之,其他各组之间差异不显著(P0.05)。

即添加0.5%和1%的DF，对羔羊的肠道发育有明显的改善作用，这一结果为今后广泛运用DF作为羔羊饲料添加剂提供了科学理论依据。

肠道发育可直接影响到羔羊的生长发育，尤其是刚断奶的羔羊，消化系统发育不完善，过早的食用草料容易引起羔羊腹泻等不良症状，影响其生长发育。

日粮中添加DF能促进断奶羔羊消化系统微生物的构建，缓解一些不良症状结论再编一点参考文献[1]李海英，刘志强，郑文新，等.添加延胡索酸二钠对绒山羊消化代谢的影[J].新疆农业科学，2012，49，2：

341－346.[2]张彩芳，杨菊清,李水仙，等.添加延胡索酸二钠对绵羊消化代谢的影响[J].新疆农业科学，2009，46，6：

1351-1356.[3]CeraK,MahanDCReinhartGA.Weaklydigestibilityofdietssupplementedwithcornoil,lardortallowbyweaningswine[J].JournalofDairyScience,1988,66:14-30.[4]DundfordBRKnabeDAHaenskyWE.Effectofdietarysoybeanmealonthemicroscopicanatomythesmallintestineintheearly-w