免疫诊断与防治课件

第二十二章

免疫学检测技术主要内容抗原或抗体的检测免疫细胞的检测高度特异性:表位---CDR表面化学集团之间的可逆结合Ag-Ab通过非共价结合，影响易受温度、酸碱度等影响而解离解离度取决于：亲和力环境因素适宜的AgAb浓度和比例

抗原抗体比例合适肉眼可见IC(凝集物，沉淀物）AgAb反应的两个阶段AgAb特异性结合：非共价结合可见反应阶段：正负电荷吸引形成较大复合物

第一节体外抗原抗体反应特点1、抗原抗体反应的可见性：比例适当抗体过剩比例适当抗原过剩抗原抗体的比例与其形成免疫复合物大小的关系二、抗原-抗体反应影响因素1电解质：中性或弱碱性条件，Ag/Ab带负电0.85%的氯化钠作为稀释液2温度：37℃3.酸碱度：pH6~8。二、检测抗原抗体的体外试验凝集反应（agglutinationreaction)沉淀反应(precipitationreaction)免疫标记技术（immunolabellingtechnique）

原理：抗原抗体在体外相遇，发生特异性结合，用已知Ag，可以判断另外一种。（一）凝集反应(agglutination)

颗粒性Ag与相应Ab在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集物。

直接凝集反应间接(被动)凝集反应1.直接凝集反应①玻片法： 定性，已知抗体测未知抗原细菌的鉴定和分型人类ABO血型测定

1.直接凝集反应②试管法： 半定量，用已知抗原测未知抗体的量

肥达氏试验-----诊断伤寒和付伤寒间接凝集反应：可溶性Ag/Ab先吸附在某些颗粒载体上，形成为致敏颗粒，再与相应Ab/Ab结合，出现凝集现象.常用的载体颗粒乳胶颗粒人O型RBC、绵羊RBC2.间接凝集反应可溶性抗原 载体颗粒免疫微球（致敏载体）＋＋抗体凝集(二)沉淀反应概念：可溶性Ag与相应Ab在电解质存在条件下结合，出现肉眼可见的沉淀物。

可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、组织浸出液、细菌滤液等

类型：

1）单向琼脂扩散试验(singlelagarimmunodiffusion)2）双向琼脂扩散试验(doubleagarimmunodiffusion)

1）单向琼脂扩散试验应用：Ag鉴定，定量AbAg2）双向琼脂扩散试验(三)免疫标记技术将抗体或抗原反应与荧光素、酶、放射性核素等标记技术相结合，通过检测标记物，间接测定Ag-Ab复合的一类方法。重要标记技术：

1）免疫酶测定(enzymeimmunoassay,EIA)

酶联免疫吸附试验(ELISA）

2）免疫荧光技术(immunofluorescencetechnique)3）放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)4）免疫胶体金技术（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS)1.酶免疫测定用酶标记Ab进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。

抗原抗体反应＋酶促反应酶联免疫吸附试验

（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）将已知抗原/Ab吸附在固相载体表面，再用酶标抗体/Ag进行检测的抗原抗体反应。特点：敏感性高（ng-pg），操作简便类型：直接法(双抗体夹心法):

Ab+Ag+Ab*

间接法:

Ag+Ab+抗Ab*

双抗体夹心法2.免疫荧光技术免疫荧光技术:用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法。分类：

(1)直接荧光法

（2)间接荧光法结果观察:(1)荧光显微镜

(2)流式细胞仪(Flowcytometer，FCM)3、放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术第二节免疫细胞功能的检测

免疫细胞的分离、鉴定免疫细胞的功能测定一、免疫细胞的分离外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）T、B细胞的分离与鉴定磁珠分离法荧光激活细胞分选仪分离法（流式细胞术，FCM)外周血单个核细胞外周血单个核细胞-----淋巴细胞分离液二、免疫细胞及其亚群的分离和分析免疫吸附分离法：Ab包被培养板免疫磁珠法：

Ab吸附在磁珠上，加至细胞悬液，细胞吸附磁珠吸附磁铁，洗脱未结合细胞荧光激活细胞分离仪分离法（FACS）即流式细胞仪（Flowcytometry，FCM）抗原肽-MHC分子四聚体技术分析CTL流式细胞仪工作原理抗原肽-MHC四聚体技术

二、免疫细胞功能的测定

（一）

T细胞功能测定：

(1)T细胞增殖(转化)试验：形态计数3H-TdR或125I-UdR掺入法MTT比色法（2）DTH检测-----皮肤试验

淋巴细胞转化试验（形态学示意图）

PHA刺激48~72小时培养液3H-TdRPHA淋巴细胞全血分层液离心过滤测量放射性淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图结核菌素注射受试者前臂内侧皮内红肿硬结＞0.5cm阳性观察局部超敏反应48～72小时后无红肿硬结或＜0.5cm阴性原理：Ⅳ型超敏反应步骤： 皮肤试验（结核菌素试验）应用： OT试验（二）B细胞功能测定

(1)单向琼脂扩散试验等测定Ig的含量

(2)抗体形成细胞测定

溶血空斑形成试验

（三）细胞毒试验51Cr释放法LDH释放法凋亡细胞检测ELISPOT靶细胞51Cr洗涤去除游离的51Cr效应细胞测量上清液中释放的51Cr混合培养4-6小时细胞毒试验（51Cr释放法）示意图CK抗体包被的反应板

CK抗原包被的反应板加入淋巴细胞加入酶标记二抗加入底物检测抗原特异性B细胞加入底物T细胞产生CK的检测加入淋巴细胞加入酶标的CK抗体第二十三章免疫学防治适应性免疫的获得自然免疫人工免疫自然被动免疫自然主动免疫来自母亲的抗体自然感染（隐性、显性）人工被动免疫抗毒素免疫球蛋白人工主动免疫疫苗类毒素SIgAIgG

人工主动免疫articleactiveimmunization用疫苗（抗原物质)接种机体，使之主动产生适应性免疫应答，从而预防或治疗疾病的方法。

人工被动免疫articlepassitiveimmunization给人体注射特异性抗体，使之被动获得适应性免疫应答，达到治疗或紧急预防疾病的方法。

两类免疫方法的比较：人工免疫的种类自动免疫被动免疫

输入物质抗原抗体

免疫力出现的时间

1-4周后立即免疫力维持时间数月-数年2-3周

用途预防治疗或紧急预防第一节免疫预防疫苗Vaccine：接种后能使机体对特定疾病产生免疫力的生物制剂类的统称。疫苗的基本要求安全、有效、实用疫苗的种类及其发展第一代传统疫苗：灭活疫苗、减毒活疫苗、类毒素、第二代疫苗：微生物的天然成分及其产物亚单位疫苗、重组蛋白疫苗第三代疫苗：基因疫苗

主动免疫被动免疫

(一)灭活疫苗（二）减毒活疫苗（三）类毒素病原体灭活减毒活病原体细菌外毒素脱毒体液免疫体液免疫、细胞免疫亚单位疫苗：提取病原体有效的免疫原成分制成的疫苗。

霍乱亚单位疫苗结合疫苗:细菌荚膜多糖+白喉类毒素DAN疫苗：用编码病原体有效免疫原的基因与细菌质粒构建的重组体，注入人体，在宿主细胞中表达保护性抗原，从而诱导机体产生特异性免疫应答的疫苗。重组载体疫苗：用编码病原体有效免疫原的基因插入载体（减毒的病毒/细菌）基因组中，接种后,疫苗增殖大量表达保护性Ag.新疫苗的发展合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原连接适当载体与佐剂制成的疫苗。猪口蹄疫合成肽疫苗基因工程疫苗：利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原的纯化疫苗。HBsAg疫苗三、疫苗的应用

1.抗感染和计划免疫

2.抗肿瘤：HPV疫苗

3.计划生育:HCG4.防止免疫病理损伤:免疫偏离计划免疫Planedimmunization

据某些传染病的疫情监测和人群免疫状况，有计划地用疫苗进行免疫接种，预防相应传染病，最终达到控制乃至消灭相应的传染病的措施。疫苗名称接种对象月（年）龄乙肝疫苗0、1、6月龄卡介苗出生时脊灰疫苗2、3、4月龄，4周岁百白破疫苗3、4、5月龄，18-24月龄白破疫苗6周岁麻风、麻疹疫苗8月龄麻腮风疫苗18-24月龄乙脑疫苗8月龄，2周岁A群流脑疫苗8-18月龄A+C流脑疫苗3周岁，6周岁甲肝减毒活疫苗18月龄我国计划免疫程序表第二节免疫治疗一、分子治疗（输入分子制剂）1.分子疫苗：治疗性疫苗2.抗体：多克隆抗体：