动物组织胚胎学实验：试验一 显微镜的正确使用、细胞和上皮组织

实验一显微镜的正确使用、细胞和上皮组织实验内容：熟悉显微镜的使用方法了解石蜡切片制作过程了解细胞在光镜下的形态、大小观察线粒体、肝糖元、高尔基体观察各种上皮组织形态结构实验须知显微镜是组织学实验课的主要仪器，又是贵重的光学仪器，应用显微镜必须经过严格训练，使用时务必严格按操作规程进行，切勿随意拆卸。应按正确的方法，轻取轻放，用毕放回原处。发现问题，随时报告，并记录在显微镜旁的小本上。实验室中制作的组织切片是教师们几十年辛勤劳动的结果，因此，对切片要严加爱护。切片只能在每个实验小组中轮流观察，不能隔桌相互传递，如果发生损坏，应及时报告老师并处以罚款(每张切片20元)。每一排由一组长负责。卫生安排（每周一组）负责电源、显微镜检查；桌子、地面每节课后均需打扫。熟悉工具—光学显微镜目镜物镜载物台光源载物台下面的结构，聚光器的调节聚光器标本推进器聚光器光阑聚光器高度调节钮标本夹持器，配合标本推进器，调节玻片的位置调节以适应不同的瞳距屈光度调节，适应左右眼不同视力物镜按顺时针从低倍到高倍排列分别为4倍、10倍、40倍和100倍注意：100倍的是油镜，必须用特殊的香柏油作介质，用后用二甲苯擦除，平时不用。调焦旋钮内侧大旋钮，粗调外侧小旋纽，细调调焦旋钮左右各一用右手控制标本位置，左手调焦显微镜使用前后注意事项前右手握住镜臂，左手平托镜座，保持镜体直立，严禁单手提取显微镜。检查显微镜是否完好，写登记本。中打开光源----放置切片----调整组织切片位置调整焦距----低倍镜观察----高倍镜观察后旋暗并关闭电源；下降载物台，取下组织切片，放回切片盒；物镜复位，罩上防尘罩；检查显微镜是否完好。10%福马林24小时

70%酒精1.5小时

80%酒精1.5小时

95%酒精1小时

95%酒精1小时

95%酒精1.5小时无水酒精1.5小时无水酒精1.5小时二甲苯0.5小时二甲苯0.5小时石蜡（56-58度）1.0小时60度石蜡（56-58度）1.0小时60度石蜡（56-58度）1.0小时60度石蜡切片制作过程介绍脱水固定透明透蜡包埋固定脱水透明脱水，常用不同浓度的乙醇透明，用二甲苯，甲苯，脱水(不同浓度的乙醇)透明(二甲苯)固定（波恩氏液）透蜡

包埋

透蜡，在温箱内进行，温度高于石蜡熔点透蜡后，将组织置于盛蜡的小容器中，冷却后成蜡块包埋后的蜡块和切片机蜡块和蜡块中间的组织夹持蜡块刀架摇柄蜡块也可固定在木块上。切出微米厚度的蜡片，蜡片往往连续成条用毛笔转移到载玻片上，烤片贴牢后可以染色苏木精-伊红染色法

(hematoxylin-eosinstainingmethod)

染色的步骤组织脱蜡（二甲苯1）10-15分钟组织脱蜡（二甲苯2）3-5分钟组织进入100%酒精2-3分钟组织进入95%酒精2-3分钟组织进入70%酒精2-3分钟自来水洗0.5-1分钟自来水洗0.5-1分钟组织进入苏木精染色10-15分钟自来水洗0.5-1分钟0.5%盐酸酒精分色10-20秒自来水洗10-30分钟组织进入70%酒精2-3分钟进入伊红染色3-5分钟进入95%酒精1-3分钟进入95%酒精2-3分钟进入100%酒精2-3分钟进入1005酒精2-5分钟进入二甲苯（1）5分钟-10小时进入二甲苯（2）30分钟用中性树胶封固显微镜观察原则

-------从低倍到高倍细胞（Cell）细胞的基本结构与细胞形态肝细胞(H-E染色)肌细胞血细胞神经细胞细跑器线粒体：蝾螈肝（铁矾苏木精染色)高尔基复合体：猪脊神经节（镀银法)粗面内质网：多极神经元的尼氏体细胞的光镜观察此图片上首先区分出细胞核然后区分出细胞形状线粒体绘图线粒体（mitochondrion）肾（铁苏木精染色）细胞核中间黑色圆点为核仁线粒体为细胞质中的小黑点核仁：合成RNA，组装核糖体大小亚基的前体高尔基体功能：参与细胞的分泌活动，加工、浓缩、包装和运输肝糖元过碘酸希夫反应（PAS反应）

多糖过碘酸氧化醛Schiff试剂紫红色沉淀肝细胞细胞核肝糖元有丝分裂（mitosis）细胞的繁殖有丝分裂：(马蛔虫子宫切片、铁苏木精染色)倒置显微镜

（Invertedmicroscope

）荧光显微镜

（fluorescencemicroscope）透射电子显微镜

(transmissionelectronmicroscope,TEM)扫描电子显微镜技术

（scanningelectronmicroscope,SEM）单层扁平上皮（肠系膜，镀银法）细胞核，不被染色细胞边界，被银染成黑色血管内皮，单层扁平细胞核，扁圆单层扁平上皮（血管内皮，HE染色）单层立方上皮（肾，HE染色）单层立方上皮（甲状腺）甲状腺上皮细胞细胞核单层柱状上皮（肠绒毛）小肠绒毛杯状细胞（gobletcell）假复层柱状纤毛上皮

（pseudostratifiedcolumnarciliatedepithelium

）气管壁气管软骨气管上皮，假复层柱状纤毛上皮细胞核，形态各异，看上去多层变移上皮（膀胱）

（transitionalepithelium）复层扁平上皮

（stratifiedsquamousepithelium

）表层细胞扁平中间细胞多边形