《畜禽养殖场细菌耐药性水平评价技术规范》编制说明

编制说明标准名称畜禽养殖场细菌耐药性水平评价技术规范任务来源（项目计划号）安徽省市场监督管理局关于下达2024年第三批安徽省地方标准制修订计划的通知》（皖市监函〔2024〕377号），计划编号为2024-3-109项负责起草单位安徽省饲料兽药监察所单位地址安徽省合肥市洞庭湖路3355号参与起草单位安徽省动物疫病控制中心、安徽省农机安全监理总站、安徽华澳生物技术有限公司、安徽赛如分析检测科技有限公司标准起草人（全部起草人，应与标准文本前言中起草人排序一致）序号姓名单位职务职称电话编制情况1、编制过程简介2024年9月2日，收到《安徽省市场监督管理局关于下达2024年第三批安徽省地方标准制修订计划的通知》（皖市监函〔2024〕377号），本标准的计划编号为2024-3-109项，随后成立标准编制小组，成员有刘发全、吴昊、许世富等人。标准起草过程：2024年9月，安徽省饲料兽药监察所联合安徽省动物疫病控制中心、安徽省农机安全监理总站、安徽华澳生物技术有限公司、安徽赛如分析检测科技有限公司成立了标准制定工作小组，分工负责标准起草相关工作，编制小组以科学、规范、可操作性强为原则，按GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草本标准，采取召开座谈会、发电子邮件等方式，征求起草单位、相关企业等行业内的专家意见和建议，完成了本标准征求意见稿。2、制定标准的必要性和意义必要性：抗菌药物在人类和畜牧业中得到了广泛应用，为规模化、集约化养殖业的发展提供了重要支撑。然而，抗菌药物的大量使用也导致了动物源细菌耐药性日益加剧。这不仅加大了畜禽疫病的防控难度，给养殖业造成巨大损失，而且耐药细菌及耐药基因还可能在人、动物和环境中转移，对人类健康和公共卫生造成潜在威胁。我省各级兽医主管部门和兽用抗菌药使用减量化示范企业的努力，初步建立并执行兽药安全使用管理制度，做到规范科学用药，落实兽用处方药制度、兽药休药期制度和“兽药规范使用”承诺制度等多项有章可循的制度，并取得了较好的成绩，在有效遏制动物源细菌耐药性方面，我省虽然启动了养殖场细菌耐药性监测工作，但对某一兽用抗菌药使用减量化示范企业来说，是否能通过兽用抗菌药使用减量化方案有效遏制细菌耐药性，不仅需要持续对其耐药性进行持续监测，还需要细化细菌耐药性的评价方案。目前还没有相关细菌耐药性评价的国家标准和农业标准，为了能从遏制细菌耐药性的角度量化兽用抗菌药使用减量化实施效果，有必要建立畜禽养殖场细菌耐药性水平评价技术规范，能科学评估细菌耐药性监测结果，指导养殖场科学合理的使用抗菌药，评估全省养殖场兽用抗菌药使用减量化效果，以标准的形式在安徽区域建立一个详细的细菌耐药性水平评价技术规范供养殖场及耐药性监测相关单位使用。意义：1.保障动物健康和生产效益，通过定期监测和评价，可以及时了解养殖场内流行的耐药菌株及其耐药模式，为疾病的精准诊断和治疗提供依据，有助于制定有效的治疗方案，监测结果可以帮助养殖者了解养殖场的卫生状况和管理水平对细菌耐药性产生的影响，从而针对性地改进养殖环境、饲养管理方式和生物安全措施，降低疾病的发生率，减少对抗生素的依赖，提高养殖效益;2.保护公共卫生安全，养殖场内的耐药细菌可能通过食物链传播给人类，导致人类感染耐药菌，引发食源性疾病，给公共卫生安全带来威胁。开展耐药性监测与评价，可以及时发现潜在的公共卫生风险，采取相应的防控措施，保障食品安全和人类健康，通过对养殖场的耐药性监测与评价，可以掌握耐药菌的传播途径和流行趋势，为制定区域或全国范围内的耐药菌防控策略提供数据支持，有效遏制耐药菌的传播和扩散;3、合理使用抗生素，耐药性监测与评价结果可以为兽医和养殖者合理选择和使用抗生素提供科学依据，避免滥用和误用抗生素，减少不必要的抗生素使用，降低耐药性的产生速度，为政府制定和调整抗生素使用政策、监管措施提供数据支持，促进抗生素的合理使用和管理，保障养殖业的可持续发展;5.生态环境保护，抗生素在畜禽体内不能完全代谢，部分会随粪便、尿液等排泄物进入环境。通过耐药性监测与评价，可以促使养殖者合理控制抗生素的使用剂量和使用时间，减少抗生素向环境中的排放，降低对土壤、水体等生态环境的污染，过度使用抗生素导致的细菌耐药性问题，可能会破坏环境中的微生物群落结构和生态平衡。通过耐药性监测与评价，有助于了解抗生素对生态环境的影响，采取相应的生态修复措施，维护生态系统的稳定和健康。总之，科学监测细菌耐药性，不仅需要建立专门针对畜禽养殖环节的常见细菌的分离鉴定及药敏试验的技术规范，还需要建立畜禽养殖场细菌耐性水平评价技术规范，正确评估畜禽养殖场的细菌耐药性情况，为国家提供更科学的养殖环节细菌耐药性水平监测结果及变化趋势，对科学评估动物源细菌耐药性的公共卫生安全影响具有重要意义。3、制定标准的原则和依据，与现行法律法规、标准的关系。本标准依据抗菌药使用减量化的实际需要，编制遵循“前沿性、科学性、实用性、规范性”的原则，按照《中华人民共和国标准化法》和《安徽省地方标准管理办法》等有关法律、法规制定。本标准遵循现行的国家标准、农业行业标准和相关法规的规定。4、主要条款的说明，主要技术指标、参数、试验验证的论述（详细说明）本文件规定了畜禽养殖场细菌耐药性水平评价的设备和材料、样品采集、菌株分离与药物敏感性试验、饲养管理、评价方法、记录和生物安全的要求。本文件适用于安徽省畜禽养殖场的细菌耐药性水平评价。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.1 食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB4789.28 食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB19489 实验室生物安全通用要求GB4789.28-2024食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求NY/T4141 动物源细菌耐药性监测样品采集技术规程NY/T4142 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程微量肉汤稀释法NY/T4143 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程琼脂稀释法NY/T4144 动物源细菌抗菌药物敏感性测试技术规程纸片扩散法NY/T4146 动物源沙门氏菌分离与鉴定技术规程NY/T4145 动物源金黄色葡萄球菌分离与鉴定技术规程NY/T4147 动物源肠球菌分离与鉴定技术规程NY/T4148 动物源弯曲杆菌分离与鉴定技术规程NY/T4149 动物源大肠埃希菌分离与鉴定技术规程SN/T1944 动物及其制品中细菌耐药性的测定纸片扩散法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1细菌耐药性ResistancetoDrug细菌对于抗菌药物作用的耐受性。3.2抗菌药物敏感性试验AntimicrobialSusceptibilityTesting，AST测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用的一种试验方法。通过该试验可以判断引起感染的病原微生物对各种抗菌药物的敏感程度，从而为选择最有效的抗菌药物进行治疗提供重要依据，以指导临床合理选用药物的微生物学试验。3.3敏感Sensitive表示被测菌能被常用剂量的抗菌药物所抑制。3.4中介Intermediate表示被测菌对常规剂量抗菌药物的反应性较低，提高药物剂量可能有效。3.5耐药Resistant表示被测菌不能被常规剂量的抗菌药物所抑制。3.6最低抑菌浓度MinimumInhibitoryConcentration，MIC在体外试验中抑制特定微生物生长所需的最低抗菌药物浓度，用以判断测试菌株对抗菌药物的敏感程度。4设备和材料4.1 设备微生物实验室常规灭菌及培养设备按GB4789.1执行，其他设备如下：——微量移液器：0.1μL～2.5μL、1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL；——多通道微量加样器：10μL～100μL；——麦氏比浊仪：可测量范围0.01～4.00麦氏单位；——恒温培养箱：36℃±1℃；——低温贮藏箱：2℃～8℃；——冰箱：2℃～8℃，-20℃，-80℃。4.2 材料——无菌培养皿：直径90mm；——96孔透明无菌微孔板；——1μL一次性无菌接种环、10μL一次性无菌接种环；——一次性无菌采样拭子；——标准比浊管；——药敏试验板。4.3试剂4.3.1 实验用水除非另有说明,水应符合GB/T6682三级水的规定。4.3.1无菌生理盐水无菌生理盐水的制备按GB4789.1执行。4.3.2 培养基培养基制备按GB4789.28执行。4.3.3 质控菌株本标准中的质控菌株为大肠埃希菌、沙门氏菌、粪肠球菌、弯曲杆菌、金黄色葡萄球菌，保存、传代等应按照GB4789.28的要求执行。5样品的采集与记录5.1样品的采集与记录按NY/T4141规定执行。6菌株分离6.1金黄色葡萄球菌分离与鉴定按NY/T4145规定执行。6.2沙门氏菌分离与鉴定按NY/T4146规定执行。6.3肠球菌分离与鉴定按NY/T4147规定执行。6.4弯曲杆菌分离与鉴定按NY/T4148规定执行。6.5大肠埃希菌分离与鉴定按NY/T4149规定执行。7抗菌药物敏感性试验按NY/T4142、NY/T4143或NY/T4144规定操作。 8评价对象8.1不同养殖阶段的同批次动物针对不同的养殖阶段的同批次动物及时进行采样、细菌分离和药敏试验,评价细菌耐药性水平变化。8.2同一养殖场不同圈舍的动物在相同时间，针对同一养殖场不同圈舍的动物进行采样、细菌分离及药敏试验。8.3不同养殖方式的动物评价不同养殖方式下的畜禽动物细菌耐药性水平差异,采样时间和方案应完全一致。分离菌株数量和种类应保持一致。8.4监测时期的动物在进行大规模耐药性监测时，应在规定时间完成耐药性水平评价。9评价方法9.1整体耐药水平评价9.1.1耐药强度系数统计养殖场分离的大肠埃希菌或肠球菌的MIC值，若MIC值超出药敏板测定范围，则以最大测定值的下一个二倍梯度作为MIC修正值。将全部MIC值（含修正值）取10的对数，求得平均值和中位值作为耐药强度系数值。若耐药强度系数低（高）于对照组或区域水平，则认为耐药水平低（高）。9.1.2多重耐药率计算养殖场3重、5重和7重耐药率。若多重耐药率低（高）于对照组或区域水平，则认为整体耐药水平低（高）。9.2记录应保留原始的细菌分离鉴定以及药敏结果，记录表见附录A。10生物安全10.1实验室应符合GB4789.1和GB19489的要求。10.2废弃物处理应按照GB19489规定执行。10.3菌株管理按照中华人民共和国农业农村部令第16号文件中动物病原微生物菌(毒)种保藏管理相关规定执行。5、标准中如果涉及专利，应