照片大二上分子医学实验_第1页
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文档简介

。可用于样品的制备、纯度鉴定、分子量测定等。（AGEμg（TEMED）TEMED催化下，过硫酸铵可使丙烯酰胺单体的双键SDSSDS和巯基乙醇后，巯基乙醇可使蛋白质分子中的二硫键还原；SDS能使蛋白质的非共价键（氢键、疏水键）SDS复合物。由于SDS带有大量负电荷，当它与蛋白质结合时，所带的负电荷的量大大超过蛋白SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物在水溶液中的SDS复合物的短轴长度都一样，而长轴则随蛋白质相对分子质量的大小成正比地变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移蛋白转膜组装顺序（三明治制作转膜夹黑色面（负极）－（正极（1）SDS-12（1）SDS-12％分离胶浓度，10ml30%凝胶贮液10%SDS10%0.6空气，是胶面平整30分钟凝胶完全聚合，用滴管吸去分离胶胶面的水封层，并用无TEMED要在注胶前再加4.5％分离胶浓度，5ml 30%凝胶贮液10%SDS10%30%凝胶贮液10%SDS10%3.00.3TEMED的加入量，混匀后用细长头的滴管将凝胶溶液加到以聚合10μl与“5×样品溶解液”40μl混合（做两份样品100℃沸2~3min，取出冷至室温。15～20mA,待样品进入2小时。1小时。另一块凝胶板中的凝胶用于转膜。染色完毕，倾出染色液，加入脱色液。20～30min换一次脱色液，2～3次后可初步观3张缓冲液浸湿的滤纸上，盖上经甲醇激活（15-30sec）PVDF膜（切多余的膜及纸，与凝胶一样大小）3张缓冲液浸湿的滤纸，排气泡。33用塑料夹夹紧，放入转移电泳仪，电泳槽搁置冰上，恒压1小时。 PVDFTBST1h牛血样品样品样品样品牛血在上图中，X？（cm）marker到起始线之间的距离，L（cm）123、凝胶浓度的选择：根据待测样品估计的相对分子量，选择凝胶浓度。Mr25000~2000005%的凝胶；Mr10000~70000的蛋白质选用终15%的凝胶；在此范围内样品的相对分子量的对数与迁移率呈直线关系。4SDS的作用下解离在上图中，X？（cm）marker到起始线之间的距离，L（cm）123、凝胶浓度的选择：根据待测样品估计的相对分子量，选择凝胶浓度。Mr25000~2000005%的凝胶；Mr10000~70000的蛋白质选用终15%的凝胶；在此范围内样品的相对分子量的对数与迁移率呈直线关系。4SDS的作用下解离Mr及分子中肽链

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