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DB34DB34/T2515—2015猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法RT-PCRassayforporcineepidemicdiarrheavirus安徽省质量技术监督局发布I1本标准规定了猪流行性腹泻病毒（porcineepPEDV：猪流行性腹泻病毒（porcineepidemicPCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreactiRT-PCR：反转录聚合酶链式反应（reversetranscription-polymeraDEPC：焦炭酸二乙酯（diethylpyroTaq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNApolymerase）dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribM-MLV：莫洛尼氏鼠白血病病毒（moloneymurinelPBS：磷酸缓冲液（phosphatebuffersolution）TAE：Tris-乙酸电泳缓冲液（trisa25.11磷酸盐缓冲液（PBS，0.01mol/L，——下游引物5’-CCCATGAAGCACTTTCTCACTATC-5.15阳性对照样品：PEDV接种的VE采取病死或剖杀猪的小肠内容物，按1:5倍心管中，8000rpm离心10min，取上清36.2.412000g4℃离心15min，吸取上层水相移入新的离心管中，加将PCR扩增产物5μL与2μL上样缓冲液混合，点样于1％琼脂糖凝胶板加样孔中，琼脂糖凝胶板一侧点样孔加入DL2000DNAMarker（分子质量标准物），缓冲液为1×TAE，以5V/cm电被检样品出现663bp扩增条带为PEDV核酸阳性，未出现663bp41——阴性对照样品；2——阳性对照样品；3、4——阳性样品。5A.1.3量取0.2moL/L磷酸氢二钠溶液36mL，0.2mol/L磷酸二氢钠溶液14mL，称取氯5g，用灭菌去离子水溶解稀释至100A.2.10.5mol/L乙二铵四乙酸二钠（EDTA）溶液（pH8.——灭菌双蒸水——氢氧化钠——灭菌双蒸水——羟基甲基氨基甲烷（Tris分析纯）——冰乙酸——0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液(pH8.0)——灭菌双蒸水

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