1.2.2微生物的选择培养与计数课件高二下学期生物人教版选择性必修3

1.2.2微生物的选择培养与计数课题背景自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合菌群中不是优势种群时，更难实现。稀释涂布平板法呈现的杂菌群那么我们又如何达成这一目标呢？科学家们应用选择性培养基解决了这一难题。二、微生物的选择培养1.方法:对样品进行充分稀释,然后将_____涂布到制备好的_____培养基上。2.稀释涂布平板法的操作过程:(1)_________稀释操作:菌液选择系列梯度(2)涂布平板操作。①取菌液:取______菌液,添加到___________。

②涂布器灭菌:取出浸在_____中的涂布器,放在_____上燃烧,酒精燃尽后,_____涂布器。③涂布过程:用涂布器将菌液_____地涂布在培养基表面,涂布时可_____培养皿,使菌液分布_____。3.培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板_____,放入___________中培养,观察。0.1mL培养基表面酒精火焰冷却均匀转动均匀倒置恒温培养箱

【激疑】在进行稀释操作时,需要在酒精灯火焰附近操作吗?解释原因。提示:需要。在进行稀释操作时,如果不在酒精灯火焰附近进行,就有可能造成杂菌污染。核心点二、微生物的选择培养如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，可以如何操作？2、实验的具体操作：

1、稀释涂布平板法是将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。对土壤菌液进行稀释及科学的微生物数量测定方法---稀释涂布平板法。1.梯度稀释①铲取土样，将样品装入纸袋中1ⅹ101ⅹ1071ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL1mL1ⅹ105注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。90mL无菌水9mL无菌水1mL稀释涂布平板法操作过程③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。注意：各浓度分别涂布3个平板（重复实验）注意：多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧。2.涂布平板1071061031021041mL1mL1mL1mL9mL无菌水1mL1051.梯度稀释移液枪稀释涂布平板法操作过程1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中滴2、取少量稀释液（不超过0.1ml

），滴加到培养基表面灼3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。涂4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照浸3.取样涂布平板：主要方法稀释涂布平板法平板划线法主要步骤系列梯度稀释操作和涂布平板操作接种环在固体培养基表面连续划线接种工具涂布器接种环菌体获取从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体能否用于计数可以计数不能计数共同点都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可以观察菌落特征。知识归纳比较稀释涂布平板法和平板划线法核心点三、微生物的数量测定显微镜直接计数法：①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。②方法：用计数板计算。③计算公式：每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数x400x103x稀释倍数。④缺点：不能区分死菌与活菌，造成统计值比实际值偏大。1.统计菌落数目的方法：间接计数法（活菌计数法）①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作注意事项：a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。③计算公式：每毫升样品中的菌株数=(C÷V)xM,其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL)，M代表稀释倍数。④缺点：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，造成统计值比实际值偏小。1.如表所示为某微生物培养基的配方。下列说法中不正确的是()成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4·7H2O含量3g1g0.5g0.5g成分FeSO4（CH2O）H2O青霉素含量0.01g30g定容至1000mL0.1万单位A.此培养基属于液体培养基，其中的碳源是（CH2O）B.配制培养基时，溶化后必须要进行的是调整pH和灭菌C.接种时应在酒精灯火焰附近操作D.若用该培养基选择培养纤维素分解菌，应除去青霉素，加入纤维素粉课堂练习D2.下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图,有关叙述错误的是()A.在配制步骤②、③的培养基时,应先调pH值后高压蒸汽灭菌B.步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散,可以获得单细胞菌落C.步骤③采用涂布平板法接种,并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种,比较细菌分解尿素的能力C3.下列与纤维素分解菌及其分离实验的有关说法，错误的是()A.纤维素酶至少包括三种组分：C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶B.正确的操作流程：土壤取样→选择培养→梯度稀释→挑选菌落C.刚果红可与纤维素形成透明复合物，所以可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌D.通过定时测定葡萄糖产量的变化来衡量纤维素分解菌培养液中纤维素酶产量C课堂小结微生物的数量测定选择培养基的作用微生物选择培养获取纯培养物的方法-稀释涂布平板法微生物的选择培养和计数选择培养基微生物的选择培养科学实例筛