DB61-T+1813-2024化妆品紧致功效测试技术规范

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DB61陕 西 省 地 方 标 准DB61/T1813—2024化妆品紧致功效测试技术规范TechnicalSpecificationforcomesticsfirmingefficacytest20242024040320240503陕西省市场监督管理局发布DB61/T1813DB61/T1813—2024DB61/T1813DB61/T1813—2024目  次前言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1基本要求 2测试准备 3测试 4数据处理 5测试报告 5质量保证 5II前  言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由陕西省药品监督管理局提出并归口。本文件起草单位：陕西省食品药品检验研究院、陕西博溪通用检测科技有限公司、陕西省药品和疫苗检查中心、陕西省药品技术审评中心、咸阳市食品药品检验检测中心。本文件主要起草人：王莉芳、蔡虎、曹涵博、杨文娟、卢永波、李潇、刘海静、吴小勇、冯润东、党琳琳、罗阿利、张若冰、李晓春。本文件首次发布。本文件由陕西省食品药品检验研究院负责解释。联系信息如下：单位：陕西省食品药品检验研究院电话编：710065II地址：陕西省西安市高新区科技五路21邮编：710065II化妆品紧致功效测试技术规范范围本文件适用于化妆品体外成纤维细胞弹性蛋白含量测试。规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。GB/T622 化学试剂盐酸GB/T646 化学试剂氯化钾GB/T678 化学试剂乙醇（无水乙醇）GB/T1266 GB/T1274 GB/T1266 GB/T1274 GB/T3102.6 光及有关电磁辐射的量和单位GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T21395 二甲基亚砜SN/T3899 3术语和定义SN/T3899界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1紧致firming有助于保持皮肤的紧实度，弹性。3.2紫外光辐照强度ultravioletlightirradiance（如（mW/cm²）。13.3紫外光辐照剂量ultravioletlightirradiationdose入射到某一表面的紫外线（如UVA）的量（强度×时间），单位为焦耳每平方米（J/m²）或焦耳每平方厘米（J/cm²）。3.4酶联免疫吸附测定法enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA基本要求环境要求100级要求，环境温度应控制在20℃～24℃，环境湿度应控制在50%～70%，防震动，防电磁干扰。其他试验操作应在常规实验室环境下进行，生物安全等级达到一级要求。耗材和试剂所用试剂应为分析纯，试验用水应按GB/T6682的要求进行制备。与细胞培养相关试剂、耗材应作无菌处理。耗材耗材应满足下列要求：所用试剂应为分析纯，试验用水应按GB/T6682的要求进行制备。与细胞培养相关试剂、耗材应作无菌处理。耗材耗材应满足下列要求：25cm²、75cm²培养瓶；6孔平底细胞培养板；1.5mL、15mL、50mL；10μL、200μL、1000μL；0.22μm。试剂试剂应满足下列要求：Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium培养基（DMEM）；SN/T3899的要求；磷酸二氢钾（KH2PO4）GB/T1274的要求；十二水合磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）GB/T1263的要求；氯化钠（NaCl）GB/T1266的要求；氯化钾（KCl）GB/T646的要求；盐酸（HCl）GB/T622的要求；GB/T678的要求；转化生长因子-β1（TGF-β1）粉末纯度≥95%；2GB/T21395的要求；44pmL0.18nmL～12nmL。试剂配制试剂配制应满足以下要求：90mLDMEM10mL14d；（0.10.27g2.87g8.00g0.20g800mLpH7.41000mL，过14d；TGF-β1溶液（100ng/mL）0.002mgTGF-β11mL0.002mg/mL0.22μm28100ng/mLTGF-β1溶液；酶联免疫吸附测定法相关试剂应按照试剂盒说明书配制所需溶液。仪器设备仪器设备应符合下列要求：37℃，5CO²，95%相对湿度；100级；0.0001g；超低温冰箱温度为-40℃～-86℃；100倍～400倍；200nm～999nm；UVA315nm～400nm；315nm～400nm；1000r/min～14000r/min4℃；0r/min～1000r/min；2μL～20μL、20μL～200μL、100μL～1000μL；5×104个细胞/mL～1×107个细胞/mL。测试准备细胞准备10DMEM细胞培养液为基础培养液于细胞培养箱中培养。P72×105个细胞/孔6324h±2h后用于试验。样品制备受试物的配制应根据受试物理化特性选择合适的溶剂配置成受试物工作液，配制要求如下：3（母液中受试物的浓度应为试验浓10倍～1000倍），过滤除菌，然后使用细胞培养液稀释到试验浓度；（母液中受试物的浓100倍～1000倍），过滤除菌，其中二甲基亚砜或无水乙醇的体积在溶液1%。受试物浓度的选择应通过细胞毒性试验确定受试物安全浓度范围，以受试物处理细胞后细胞活力≥90%时的浓度为安全浓度的最高浓度，在安全浓度范围内，选择1个～3个浓度作为受试物试验浓度。试验分组试验过程中应按如下要求分组：UVA辐照；30J/cm²UVA辐照剂量辐照；30J/cm²UVA辐照剂量辐照。100ng/mLTGF-β1。30J/cm²UVA辐照剂量辐照。仪器准备UVAUVA辐照仪开关打开后应稳定15min±2minUVA辐照仪的辐照强度进行校准，确保UVA辐照仪辐照强度稳定。6测试受试物孵育应弃掉培养孔中的细胞培养液，更换新的培养液，操作过程按照5.3要求进行，各试验组细胞孵育时间宜为24h±2h。UVAUVA辐照过程应在无菌操作环境下进行，清洗并更换细胞培养液为磷酸盐缓冲溶液，每孔添加量为1mL。按照5.3试验分组进行UVA辐照，辐照剂量宜为30J/cm²。照射时间计算见式（1）：tH/E (1)式中：t——照射时间，单位为秒（s）；H——辐照剂量，单位为毫焦每平方厘米（mJ/cm2）；E——辐照强度，单位为毫瓦特每平方厘米（mW/cm2）。换液UVA辐照结束后，应将磷酸盐缓冲液更换为新的培养液，各试验组细胞孵育时间宜为24h±2h。细胞上清液收集及保存4孵育培养结束后，每孔应收集不少1mL细胞培养液，用于检测；如需储存应储存于超低温冰箱，有效期90d。6.5检测应对细胞培养液离心，离心转速宜为12000r/min、时间不小于10min。离心后收集上清液，按照弹性蛋白酶联免疫试剂盒说明书所述方法进行稀释及测定。数据处理弹性蛋白含量计算按照试剂盒说明书提供的计算方法计算，每组应取3个复孔的平均值作为检测结果，结果表示为平均值±标准差（Mean±SD）。统计分析数据应使用t检验分析显著性差异，双尾检验。与阴性对照组相比，p<0.05则认为其具有统计学差异。精密度(SD/Mean)100% (2)式中：C.V(SD/Mean)100% (2)式中：C.V——变异系数；SD——标准差；Mean——平均值。8测试报告宜包括但不限于以下几个方面的内容：——目的；——材料；——设备；——受试物信息；——方法；——