医学微生物学-真菌病毒总论

1

真菌学真菌（fungi）是一类真核细胞型微生物。有典型的细胞核和完善的细胞器。2

概念

真菌（fungi）是指具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生方式吸收养料，仅少数为单细胞，大多数都有分支或不分支的丝状体，能进行有性和（或）无性繁殖的一群真核细胞型生物。

真菌广泛分布于自然界，种类繁多，有10余万种。大多对人无害，只有少数可引起人类疾病。大真菌Mushroom4真菌与人们生产、生活密切相关

penicilliummicrozyme

在Wittaker（1969）建立的五界分类系统（原核生物界、原生生物界、植物界、真菌界和动物界）中，把真菌单独作为一界。而真菌门包括6个门：子囊菌门、担子菌门、接合菌门、壶菌门、微孢子菌门和球囊菌门。6FUNGUSYeast（酵母）(singlecellular)Mold（霉菌）(multicellular)sporesporehypha1.真菌的形态Morphologyoffungi真菌的生物学特性真菌的结构

Structureoffungi78单细胞真菌:形态呈圆形或椭圆形，常见于酵母菌或类酵母菌。它们以芽生方式繁殖产生子代。

新生隐球菌

Cryptococcusneoformans白假丝酵母菌

CandidaalbicansYeasts-Unicellularfungi

酵母菌-单细胞真菌

Budding出芽pseudomycelium10酵母菌芽生新生隐球菌繁殖

Cryptococcusneoformans

新生隐球菌

Candidaalbicans

白假丝酵母菌13

多细胞真菌

菌丝+孢子，交织成团—菌丝体（霉菌）14菌丝（hypha)

菌丝是由成熟的孢子在环境合适的条件下长出的芽管并进一步延伸呈丝状。菌丝分为营养菌丝和气生菌丝，气生菌丝中能形成孢子的叫做繁殖菌丝。15孢子(spore)

真菌的繁殖结构，由生殖菌丝产生。根据繁殖方式，孢子可分为有性孢子和无性孢子。Molds-MulticellularfungiHyphaspore17无性孢子

分生孢子叶状孢子孢子囊孢子分生孢子孢子囊孢子18有性孢子：接合孢子19真菌孢子与细菌芽胞的区别真菌孢子细菌芽胞抵抗力不强，60～70℃短时间即死抵抗力强，能耐煮沸1～2小时一条菌丝可产生多个孢子一个细菌只产生一个芽胞是真菌的繁殖形式是细菌的休眠状态20培养特性常用培养基：沙保（Sabouraud’smedium）培养基，pH值5.5（4.0～6.0）培养温度：浅部真菌22~28C℃

深部真菌37

℃

生长速度：1～4W菌落类型：酵母型菌落；丝状菌落。21单细胞真菌菌落Unicellularfungi

Colony23多细胞真菌菌落MulticellularfungimoldMulticellularfungi26

有些真菌在不同寄生环境和培养条件下出现两种形态，称双相性真菌（dimorphicfungi），即在机体内或含血培养中37℃孵育，呈现酵母型菌落，而在沙保培养基上室温孵育，则形成丝状菌落。如荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌等。27抵抗力

真菌对干燥，阳光，紫外线及一般消毒剂有较强的抵抗力。但对2.5%碘酒，10%福尔马林都敏感，一般可用甲醛薰蒸被真菌污染的房间。对热敏感，一般60℃1小时可杀死真菌菌丝和孢子。28致病性致病物质：细胞壁糖蛋白（有内毒素样活性），毒素，荚膜等。致病方式（五种）：

致病性真菌感染（主要是外源性真菌）条件致病性真菌感染（主要是内源性真菌）真菌超敏反应性疾病（皮炎、哮喘等）真菌性中毒（毒素引起）

真菌毒素与肿瘤的关系（黄曲霉毒素等）29

有些真菌本身就具有毒性，称为有毒真菌，如毒蘑菇，食用后可引起人畜的直接中毒。免疫性1、天然免疫（1）皮肤粘膜屏障①机械阻挡②皮脂腺，汗腺，分泌酸性物质（儿童易患头癣，成人易患手足癣）③正常菌群拮抗（2）吞噬细胞（3）体液抗菌物质2、获得性免疫：真菌感染的恢复主要依靠细胞免疫。3031主要致病性真菌分类：依据侵犯部位和临床表现

浅部感染真菌深部感染真菌条件致病性真菌一、浅部感染真菌（皮肤癣菌）

黄癣白癣体癣毛癣菌（Trichophyton）表皮癣菌（Epidermophyton）小孢子癣菌（Microsprum）33股癣甲癣足癣Malasseziafurfur（秕糠马拉癣菌）35微生物学检查法

1.标本：根据病变部位取材2.直接镜检：观察菌丝和孢子结构浅部感染真菌的病变标本如毛发、皮屑、甲屑置玻片上，滴加10%KOH，加盖玻片微热熔化角质层，再将玻片压紧，用吸水纸吸去周围多余碱液，在显微镜下观察，见皮屑、甲屑中有菌丝，或毛发内部或外部有成串孢子，即可初步诊断为癣菌感染，但不能确定菌种。3.分离培养：沙保培养基许兰毛癣菌石膏毛癣菌Trichophyton

毛癣菌属Epidermophyton

表皮癣菌（絮状表皮癣菌）Microsprum

小孢子菌属（犬小孢子菌）39二、深部真菌感染

深部或系统性感染真菌是能侵袭深部组织和内脏以及全身的真菌。感染大多系外源性，致病性较强，能引起慢性肉芽肿样炎症，溃疡和坏死等。40（一）皮下组织感染真菌引起皮下组织感染真菌病的真菌有很多种，分别属于不同菌属，但它们有以下两个共同点：①为自然生长于土壤或腐坏植物中的腐生菌；②必须经由宿主的创口才能进入皮下组织，蔓延致病。主要有：孢子丝复合体是孢子丝菌病的病原体；黑霉菌可引起产色霉菌病；足分枝菌病真菌引起足分枝菌病。41致病性真菌疾病名称皮炎芽生菌(Blastomycesdermatitidis)芽生菌病巴西副球孢子菌(Paracoccidioidesbrasiliensis)副球孢子菌病荚膜组织胞浆菌(Histoplasmacapsulaum)组织胞浆菌病粗球孢子菌(Coccidioidesimmitis)球孢子菌病（二）系统性感染真菌系统性真菌病（systemicmycoses）是由土壤中的真菌所引起的，通常是由呼吸道吸入或伤口进入而感染。主要的系统性真菌有四种，这些真菌均具有双相性。42新生隐球菌

Cryptococcusneoformans1、生物学特性（1）形态结构和染色：圆形，厚荚膜。（2）培养：沙保培养基或血琼脂培养基温度：25°C和37°C皆能生长

菌落：酵母型菌落

43442、致病性

传染源：禽类，如鸽子粪便传播途径：呼吸道传播病变部位：肺，脑多见预防本菌感染，除应增强机体免疫力外，避免创口感染（土壤及鸟粪等）45三、条件致病性真菌特点:致病力不是很强；引起感染多为内源性；往往是继发感染，如久病体弱，免疫力低下或菌群失调时发生。OpportunisticMycosesCandida（假丝酵母菌）Aspergillus（曲霉）Mucor（毛霉）Pneumocystiscarinii(卡氏肺孢子菌）

47（一）假丝酵母菌（俗称念珠菌）48形态、染色:白假丝酵母菌菌体圆形或卵圆形，革兰染色阳性，大小不等，着色不均匀白假丝酵母菌形成假菌丝和厚膜孢子，有助鉴别假菌丝：孢子伸长成芽管，不与母体脱离，形成较长的假菌丝厚膜孢子:在玉米培养基上可长出厚膜孢子49假菌丝和厚膜孢子50致病性（1）入侵原因机体抵抗力下降（AIDS）大量、长期使用抗菌药物，激素和免疫抑制剂（2）入侵部位皮肤粘膜感染：以鹅口疮、阴道炎最多见内脏感染：有肺炎、肠胃炎、心内膜炎等，偶而也可发生败血症中枢神经感染：脑膜炎、脑炎51念珠菌性口腔炎真菌引起的过敏与中毒交链孢霉属分枝孢子菌霉曲霉属青霉菌属Aspergillus曲霉菌Aspergillusfumigatus

烟曲霉菌：allergic,pneumonia

Aspergillusflavus黄曲霉菌：Mycotoxinandtumor(livercancer)黄曲霉菌的黄曲霉毒素与肝癌等恶性肿瘤密切相关我国肝癌高发区广西福绥县和江苏祁东县（玉米，花生中黄曲霉毒素超标）54曲霉菌Aspergillus

ASPERGILLOSIS（曲霉病）

曲霉菌在自然界中广泛分布，已发现300多种曲霉菌，其中仅少数属于机会致病菌，以烟曲霉菌最常见。

Aspergillusfumigatus（烟曲霉）

Aspergillusniger（黑曲霉）Allergic-hypersensitivitytotheorganism.Aggressivetissueinvasion.Primarilyapulmonarydisease,buttheaspergillimaydisseminatetoanyorgan.Theymaycauseendocarditis（心内膜炎）,osteomyelitis（骨髓炎）,otomycosis（霉菌病）andcutaneouslesions.55肺曲霉菌病56毛霉菌毛霉菌广泛分布在自然界中，常引起食物霉变。毛霉菌是人体的机会致病菌，多在机体免疫力极度降低情况下发病。可侵犯肺，鼻、鼻窦、眼眶、脑及消化道等。57

鼻脑毛霉菌病是最常见的类型，但有时也可发生原发性皮肤，肺或胃肠道病变，也可经血流播散到其他部位。鼻脑感染通常是暴发性的，并且常致死。组织坏死性病变常发生于鼻粘膜，有时可见于腭部。菌丝侵犯血管可引起鼻中隔，腭和眼眶或鼻窦周围骨骼的进行性组织坏死。坏死的进行性扩展可累及大脑，而引起筛状窦栓塞体征，惊厥，失语或偏瘫。糖尿病酮酸中毒症的病人最易受感染。58防治原则

真菌感染尚无特异预防，主要注意公共卫生和个人卫生，碘化物治疗孢子丝菌病、毛霉菌病有一定疗效。制霉素、灰黄霉素、克霉唑（三苯甲霉唑）、酮康唑等外用或内服对癣症和白色念珠菌病等有较好疗效。近年服用5-氟胞嘧啶（5-FC）治疗单细胞真菌感染疗效显著。二性霉素B可用于深部全身真菌感染。59真核细胞型微生物真菌有完整细胞结构如细胞壁，细胞膜，胞浆，细胞核有DNA和RNA80S核糖体有较多的细胞器出芽

酮康唑，咪康唑，两性霉素B，…尚缺乏安全高效的抗真菌药医学病毒学MedicalVirologySmallpoxinChina1000BCVariolation种痘天花，种痘病毒（virus）的概念病毒是一类体积微小，结构简单，仅含一种类型核酸，必须在活的敏感细胞内才能生长繁殖的非细胞型微生物。1、近75％的传染病由病毒引起2、传染性强，传播迅速，流行广泛，死亡率高3、病毒与肿瘤及自身免疫性疾病的发生密切相关，有致畸作用4、目前病毒感染的诊疗还相对滞后，部分病毒尚缺乏有效疫苗5、不断发现引起人类疾病的新病毒医学病毒学现状新现的主要病毒种类人类免疫缺陷病毒埃博拉病毒SARS病毒禽流感病毒疯牛病病毒一.病毒的基本性状病毒的大小和形态（一）大小

测量单位为纳米(nm)最大的痘苗病毒为300nm较小的脊髓灰质炎病毒为30nm

#准确测量方法：电镜

(Electronmicroscope，EM)

病毒体（virion）完整性

感染性葡萄球菌(1000nm）

牛痘病毒300×250nmABCDEFG立克次体450nm衣原体390nmA、大肠杆菌噬菌体

(65×95nm)B、腺病毒

(70nm)C、脊髓灰质炎病毒

(30nm)D、乙脑病毒

(40nm)E、卵蛋白分子

(10nm

)F、流感病毒

(100nm)G、烟草花叶病毒（二）形态（三）病毒的结构和化学组成1.基本化学组成：核酸+蛋白质2.病毒的结构：

裸病毒核心（核酸）衣壳（蛋白质）包膜核衣壳包膜病毒NakedvirusesNeucleocapsidEnvelopedviruses(1)病毒核酸核酸种类：DNA或者RNA形态分类：线形/环形；单/双；+/-；节段

开放读码框

(openreadingframe,ORF)间可有基因重叠现象(overlappinggene)

基因重叠模式图（2）衣壳

ViralCapsidTheproteinshell,orcoat,thatenclosesthenucleicacidgenome.Functions:a.Protecttheviralnucleicacidb.Participateintheviralinfectionc.Sharetheantigenicity衣壳组成：壳粒(capsomeres)壳粒数目排列螺旋对称型

20面体立体对称型

复合对称型

衣壳的对称结构型衣壳蛋白的功能保护病毒核酸特异性吸附宿主细胞表面受体抗原成分，诱导机体免疫反应(3)包膜EnvelopeAlipid-containingmembranethatsurroundssomeviralparticles.Itisacquiredduringviralmaturationbyabuddingprocessthroughacellularmembrane.envelopedvirusandnakedvirus

包膜子粒(peplomere)或刺突(spike):GlycoproteinsenchasedinenvelopeEnvelopedVirusNakedVirusCubicHelical病毒体结构模式图（四）病毒的分类

分类原则：1、核酸类型与结构2、病毒体的形状和大小3、病毒体的形态结构4、对脂溶剂的敏感性

一般分为DNA病毒、RNA病毒、逆转录病毒三类。

不分节段（Polio病毒）

+RNA-V

分节段（RNA肿瘤病毒）

ssRNA

不分节段（副粘病毒）

RNA-V

-RNA-V

分节段（正粘病毒）

dsRNA---------±RNA-V---分节段（呼肠病毒）

ssDNA---------+DNA(AAV)

DNA-V

dsDNA--------±DNA(HSV)

逆转录病毒非寻常病毒朊粒(prion)，蛋白侵染颗粒，生物学地位待定，仅由一种耐蛋白酶K的蛋白分子组成。

二.病毒的增殖

（一）病毒的复制周期特点：复制（自我复制self-replication）病毒的复制周期：病毒进入敏感细胞后，以其基因组为模板，借助细胞中的原料、能量及场所合成自己的大分子（蛋白质与核酸）以组装子代病毒颗粒，最终按一定方式释放出细胞。病毒复制过程

吸附穿入脱壳复制周期生物合成(replicationcycle)

装配释放通过病毒的包膜或无包膜病毒表面的配体位点与细胞表面的特异受体结合而吸附。1、吸附

adsorption病毒受体感染细胞HIVCD4分子CD4＋T细胞EB病毒CR2（补体受体2）B细胞流感病毒糖蛋白末端神经氨酸许多细胞丙型肝炎病毒CD81肝细胞等adsorption2、穿入penetration包膜病毒—包膜与宿主细胞膜融合为主无包膜病毒—胞饮和直接进入penetrationherpesviruses,paramyxoviruses,HIV直接穿入penetration直接穿入penetration

病毒在细胞内脱去衣壳后，核酸才可发挥指令作用，多数是在细胞的溶酶体酶作用下脱壳释放出病毒基因组。3、脱壳

uncoating4、生物合成

biosynthesis

通过病毒基因组表达与复制来完成的，包括蛋白质的合成与核酸的复制，此阶段无完整病毒可见，也不能用血清学检测出病毒的抗原，称为隐蔽期。发生在病毒核酸复制之前的转录称为早期转录，产物为早期mRNA，翻译出早期蛋白；发生在病毒核酸复制开始或之后的转录称为晚期转录，产物为晚期mRNA，翻译出晚期蛋白。早期蛋白(earlyprotein):是功能性蛋白质，为病毒核酸复制提供酶类，抑制宿主细胞的自身代谢过程。晚期蛋白(lateprotein):主要是病毒的结构蛋白，与病毒的形态构成有关。dsDNA-V（大多数DNA病毒，如HSV疱疹病毒）DNA半保留复制；

细胞核中合成DNA，细胞质中合成病毒蛋白；根据病毒核酸复制时点将转录分为早期转录和晚期转录。早期早期（TK脱氧胸苷激酶）晚期晚期（结构）ssDNAvirus(微小病毒、TTV)

-ssDNA复制中间体解链，转录翻译装配衣壳核衣壳子代-ssDNA+ssRNA-V（如poliovirus

）（１）本身具有mRNA功能，形成多聚大蛋白；（２）复制中间体（replicativeintermediate,RI）:±RNA；（３）在细胞质内合成子代RNA和病毒蛋白+ssRNA(mRNA)复制中间体(±RNA)转译病毒的非结构和结构蛋白装配衣壳核衣壳解链子代+ssRNA-ssRNA-V（如influenzaAvirus）（１）本身没有mRNA功能；（２）复制互补＋RNA，作为mRNA

-ssRNA转录翻译装配衣壳核衣壳解链子代-ssRNA复制中间体自身携带的RNA多聚酶dsRNA-V（如Rotavirus）dsRNA翻译装配衣壳核衣壳解链Retrovirus（如

HIV）逆转录酶，以亲代RNA为模板合成互补DNA复制中间体：+RNA-DNA杂交体；前病毒（provirus）整合入细胞的染色体DNA，可随宿主细胞分裂而存在于子代细胞中。

Retrovirus+ssRNA反转录翻译装配衣壳核衣壳酶解RNA链合成DNA链子代+ssRNA复制中间体整合细胞染色体104BindingFusionReversetranscriptionNuclearlocalizationUncoatingIntegrationTranscriptionSplicingRNAexportGenomicRNAmRNATranslationModificationBuddingAssemblyMaturationEndocytosisLysosome1055、装配与释放

assemblyandrelease裂解细胞：腺病毒等无包膜病毒出芽方式：疱疹病毒等包膜病毒细胞融合：巨细胞病毒等整合方式：人类免疫缺陷病毒等

病毒复制周期

理化因素对病毒的影响灭活（inactivation）：病毒体受理化因素作用后，失去感染性；保留其抗原性、红细胞吸附等生物学功能。物理因素：温度、pH、射线化学因素：脂溶剂、化学消毒剂等温度：病毒在pH5.0以下或pH9.0以上迅速灭活射线：大多病毒耐冷不耐热，HAV耐热。pH：γ射线，χ射线，紫外线多能使病毒灭活物理因素化学因素：氧化剂、卤素及其他化合物有灭活病毒的功能脂溶剂可破坏有包膜的病毒酚类可除去病毒衣壳蛋白甲醛可破坏对病毒的感染性而对抗原性影响不大三.病毒的遗传和变异

病毒株(strain)：同种病毒的不同分离株。病毒型别(type)：同种病毒的不同血清型。突变株(mutant)：基因改变而发生某些生物特性改变的毒株。病毒准种(quasispecies)：从一个原始的特定病毒序列开始，病毒的每一轮复制均导致变异株的出现。一组自身复制的分子，彼此不同又密切相关。在任何时点，病毒群总是由常见的代表性序列（主序列）和同一组不同的但又密切相关的序列组成。遗传型变异：非遗传型变异:病毒变异的类型和机制病毒基因组碱基突变(mutation)病毒与病毒基因组之间的相互作用：重组(recombination)

重配(reassortment)表型混合表型交换遗传型变异

基因突变（genemutation）

突变株（mutant）表现为宿主范围、组织亲嗜性、抗原成分、耐药性、毒力等性状改变遗传型变异病毒基因组碱基突变自发突变spontaneousmutation

RNA病毒﹥DNA病毒诱发突变inducedmutation突变株（mutant）：表现为宿主范围、组织亲嗜性、抗原成分、耐药性、毒力等性状改变。温度敏感突变株（temperaturesensitivemutant，ts）：高温下基因编码的蛋白或酶失去功能。宿主范围突变株（host-rangemutant,hr）：改变了对宿主细胞的吸附或相互作用。eg:流感病毒耐药突变株drug-resistantmutant：病毒靶酶基因发生改变。

eg:HIV的AZT变异株。减毒突变株Attenuatedmutantsmilder(orno)symptomsPotentialroleinvaccinedevelopmentLostthepathogenesis,retaintheantigenicity引起新流行SARS,avianflu抗原成分突变增加诊断的困难耐药突变drug-resistantmutant

病毒靶酶基因发生改变→耐药；HIV→AZT（叠氮脱氧胸苷）变异株。基因重组geneticrecombination

形成兼有两亲代病毒特性的子代病毒。基因重配

geneticreassortment

通过交换RNA节段而进行的重组！甲型流感病毒抗原转换引起的流行流行年代亚型类别流行情况1918Hsw1N1可能为猪流感病毒西班牙流感，全球2000-4000万人死亡1957H2N2（亚洲甲型）亚洲流感，美国7万人死亡1968H3N2（香港甲型）香港流感，美国3.4万人死亡1977H1N1H3N2俄罗斯流感1997H5N1中国香港，大规模禽流感，35人发病2000H3N2欧，美，亚三洲2004禽流感大规模，东南亚2009H1N1世界范围，1.85万人死亡2014H9N2，H7N9禽流感四.

病毒的感染与免疫病毒感染viralinfection

病毒通过多种传播途径进入机体并在细胞中增殖的过程。病毒与机体病毒与细胞

病毒感染的传染源

病人病毒携带者患病或携带病毒的中间宿主医源性感染病毒的传播方式一、水平传播(horizontalinfection)

二、垂直传播(verticalinfection)水平传播:是指病毒在人群不同个体间的传播所导致的感染，其传播途径包括：呼吸道、消化道、泌尿生殖道、眼和破损皮肤等。主要感染途径传播方式与媒介病毒种类呼吸道空气、飞沫流感病毒、麻疹病毒等消化道污染水或食物脊髓灰质炎病毒、轮状病毒等输血、注射或器官移植污染血或血制品、污染注射器等人类免疫缺陷病毒、乙肝病毒和丙肝病毒等眼或泌尿生殖道接触、游泳池或性接触人类免疫缺陷病毒、乳头瘤病毒破损皮肤昆虫叮咬、狂犬、鼠类脑炎病毒、出血热病毒等垂直传播:是病毒通过胎盘、产道等途径由亲代传给子代的过程，常见的是RUV、CMV、HBV、HIV。TORCH：常见经垂直感染致胎儿畸形的病原体。梅毒螺旋体（T.pallidum,Tp）、弓形虫（Toxoplasma,Tox）、风疹病毒（rubellavirus,Rv）、巨细胞病毒（Cytomegalovirus,Cmv）、单纯庖疹病毒（herpessimplexvirus,HSV）。垂直传播发生的过程

病毒组特征举例虫媒病毒吸血昆虫传播布尼亚病毒、黄病毒消化道传播病毒胃肠道感染小RNA病毒、杯状病毒、星状病毒、轮状病毒呼吸道病毒呼吸道传播正粘、副粘、鼻病毒、腺病毒肝炎病毒感染肝脏HA\HB\HC\HD\HEV性传播病毒性接触传播HPV\HIV输血传播病毒HB\HC\HPV按病毒传播方式和感染部位把人类病毒分类呼吸道病毒正粘病毒(orthomyxoviridae):流感病毒副粘病毒(paramyxoviridae)：副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒其他病毒：腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒人类肠道病毒包括：1、脊髓灰质炎病毒(poliovirus)：1～3型。2、柯萨奇病毒(coxsackievirus)3、人肠道致细胞病变孤儿病毒（埃可病毒）

(entericcytopathogenichumanorphanvirus，ECHO)4、新肠道病毒：68、69、70、71型急性胃肠炎病毒：轮状病毒、杯状病毒、星状病毒。。。

消化道病毒肝炎病毒病毒种类HAVHBVHCVHDVHEV病毒分类小RNA病毒科嗜肝DNA病毒科黄病毒科缺陷病毒杯状病毒科病毒大小(nm)274240~6035~3732~34基因+ssRNAdsDNA+ssRNA-ssRNA+ssRNA抗原HAVAgHBsAg/HBcAg/HBeAgHCVAgHDVAgHEVAg传播途径消化道血源血源血源消化道潜伏期(天)15～5030～16015～9025～7510～60慢性化无3～10%40~70%2~7%无虫媒病毒arbovirus

通过吸血节肢动物(蚊、蜱、白蛉等)叮咬人、家畜及野生动物而传播疾病的病毒。伊蚊虱、蜱吸血白蛉库蚊其他病毒出血热病毒：汉坦病毒疱疹病毒：HSV，VZV，CMV。。。逆转录病毒：HIV狂犬病病毒人乳头瘤病毒：HPV细小DNA病毒痘病毒朊粒病毒的致病机制一、病毒对宿主细胞的致病作用二、病毒感染的免疫病理作用一、病毒对宿主细胞的致病作用溶细胞感染

cytocidalinfection稳定状态感染

steadystateinfection细胞凋亡

apoptosis细胞的增殖与转化cellproliferationandtransformation病毒基因组的整合integrationinfectionCytopathiceffect(CPE)

细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大，或数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。溶细胞型感染病毒在宿主细胞复制成熟后，一次释放大量子代病毒，细胞裂解死亡。主要见于无包膜、杀伤性强的病毒：poliovirus，多引起急性感染。阻断细胞大分子合成；引起细胞溶酶体膜通透性增高；病毒蛋白的毒性作用溶细胞感染

cytocidalinfection

多见于nakedviruses

稳定状态感染有包膜的病毒以出芽方式释放子代，细胞短时间内不立即被溶解与死亡。包涵体形成细胞膜发生变化：CTL识别病毒抗原；细胞膜融合形成多核巨细胞，如：

麻疹病毒、巨细胞病毒等。多次释放后，细胞死亡巨细胞病毒（cytomegalovirus,CMV）核内包涵体呈“猫头鹰眼”状：细胞肿大、变圆、核变大，形成巨大细胞；核内出现大型的嗜酸性包涵体。包涵体形成

inclusionbody内基氏小体（Negribodies）:狂犬病毒感染脑组织神经元细胞中嗜酸性细胞质内的包涵体病毒基因组的整合感染

integrationinfection

完全整合：逆转录病毒以双链DNA整合到宿主细胞染色体DNA。失常式整合：DNA病毒在细胞核内偶然地以部分病毒基因片段与细胞染色体DNA随机重组，整合的病毒DNA随细胞分裂进入子细胞。

有少数病毒可促进细胞的DNA合成，促进细胞增生，细胞繁殖增快，失去细胞间的接触抑制，在动物试验和细胞培养时，均可观察到细胞的增生和转化现象。如HBxAg、HPV16-E6、HPV16-E7和SV40-Tprotein等。细胞的增殖与转化cellproliferationandtransformationFigCulturedratpancreaticcellsandtransformedcells.细胞凋亡apoptosis

是一种由基因控制的细胞自主性死亡，受多种基因调节。在某些病毒感染时可由于病毒本身或病毒编码的蛋白间接作用诱导细胞凋亡。*HCV感染肝细胞病毒刺激CTL↓↓

高表达Fas高表达FasL↓↓CTL导致大量肝细胞凋亡→暴发性肝功能衰竭

*HBV、HCV感染→刺激免疫细胞产生TNF-α↑→肝细胞凋亡或坏死细胞凋亡与病毒性肝炎二、病毒感染的免疫病理作用

免疫抑制或免疫缺陷免疫病理反应免疫应答紊乱1、免疫抑制或免疫缺陷病毒感染免疫细胞如：麻疹病毒感染巨噬细胞、T细胞和B细胞，PPD-

EB病毒感染单核细胞

HIV感染CD4+T细胞免疫细胞MHC-I/MHC-II

表达↓病毒抗原与细胞因子结构相似病毒藏匿于免疫细胞或抗体难以作用的部位

2、免疫病理反应Ⅱ型超敏反应：细胞毒型变态反应Ⅲ型超敏反应：免疫复合物型变态反应Ⅳ型超敏反应：迟发型变态反应3、病毒感染引起免疫应答紊乱

免疫系统失去抗原识别功能，发生自身免疫病。隐性感染有无临床表现显性感染急性感染临床症状长短慢性感染持续性感染潜伏性感染慢发病毒感染病毒的感染类型1、隐性感染

inapparentinfection

原因：病毒毒力较弱或机体免疫力强病毒不能到达靶细胞

有排毒的可能传染源病毒携带者(viralcarrier)2、显性感染

apparentinfection

（1）急性病毒感染acuteviralinfection

大多数病毒感染属之（2）持续性病毒感染persistentviralinfection

慢性感染潜伏性感染慢发病毒感染

a、慢性感染

chronicinfection

症状轻微或缺如；可排毒；病程不一定呈进行性发展。b、潜伏性感染

latentinfection病毒基因组潜伏于组织或细胞中c、慢发病毒感染

slowviralinfection潜伏期长，病程呈亚急性、进行性，常导致死亡。如SSPE、Kuru

病等。

慢性感染chronicinfection显性感染或隐性感染后，病毒未完全清除，可持续存在血液或组织中并不断排出，可出现症状，也可无症状。HBV,HCV,HIV潜伏性感染latentinfection显性或隐性感染后，病毒基因组潜伏于一定的组织或细胞中，但并不能产生有感染性的病毒体，在某些条件下病毒可被激活而急性发作。LatentinthetrigeminalorthoracicganglioncellsInitialinfection:varicellaPainfulvesiclesofzosterchickenpoxshingles慢发病毒感染Slowvirusinfection

较少见但后果严重。病毒感染后有很长的潜伏期，既不能分离出病毒也无症状。经数年或数十年，发生某些进行性疾病，并导致死亡。Measlesvirus–Sub-acuteSclerosingpanencephalitis(SSPE)病毒感染的过程与结局局部感染（Localinfection)：病毒局限于入侵部位增殖并导致疾病，如鼻病毒、轮状病毒、流感病毒。全身感染(Systemicinfection)：病毒经一定途径感染机体后，在一种组织或细胞内增殖后，病毒释放入血或经淋巴系统或经神经系统，再入侵靶器官中的易感细胞，损伤细胞引起疾病。感染过程涉及多个组织、器官，如麻疹、肝炎病毒等。

持续性感染发生机制①病毒抗原发生变异或免疫原性弱；②病毒基因组整合于宿主细胞染色体上；③机体免疫力低下，不能形成有效的免疫应答。抗病毒免疫先天性免疫（非特异性免疫）获得性免疫（特异性免疫）干扰素（IFN）NKcells…体液免疫细胞免疫干扰素(interferon,IFN)1957年研究灭活病毒干扰活病毒现象时，发现由细胞产生的具有抗病毒活性的糖蛋白。是机体受病毒或其他干扰素诱生剂刺激巨噬细胞、淋巴细胞以及体细胞产生的具有多种生物学活性的糖蛋白。

1、生物学功能抗病毒抗肿瘤免疫调节

2、种类：免疫原性IFN-

IFN-

IFN-

主要由人白细胞产生主要由人成纤维细胞产生主要由人T细胞产生3、抗病毒机制：诱导细胞产生抗病毒蛋白INTERFERONINTERFERONantiviralstateantiviralstateantiviralstateantiviralstateINTERFERONantiviralstateantiviralstateantiviralstateantiviralstateINTERFERONantiviralstateantiviralstateantiviralstateantiviralstate4、特点：广谱抗病毒间接抑制病毒而不是杀病毒抗病毒作用具有种属特异性发挥作用迅速Diseasescurrentlytreatedwith

IFN-alphaandIFN-betahepatitisChepatitisBpapillomawartsandearlytrialswithcervicalcarcinomaKaposisarcomaofAIDS,colontumorskidneytumors(usuallyincombinationwithotherdrugs).BasalcellcarcinomaBreastcancercombinedwithtamoxifan五.病毒感染

的检测与防治原则

（一）、病毒感染的检测标本的采集与运送急性期标本根据感染性质取不同的标本标本置于转运液中冷藏快运血清标本需取双份病毒分离培养1、病毒分离的一般程序是

动物接种出现症状鸡胚接种病变或死亡血清学鉴定细胞培养细胞病变采集处理标本标本2、病毒的分离培养方法动物接种鸡胚培养细胞培养原代细胞培养二倍体细胞株传代细胞系（1）原代细胞培养：

动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长。

（2）二倍体细胞株：在体外连续培养50~60代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。为生产人用疫苗的首选细胞株。（3）传代细胞系

能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。临床病毒实验室常用的细胞培养

细胞培养常用的名称组织来源

传代数原代

HEKPMKRKGPE/CE

人胚肾恒河猴肾兔肾豚鼠胚或鸡胚1～2

二倍体

HEL(MRC-5)HDF

人胚肺人新生儿包皮

20～50

异倍体

Hep-2HeLaA549Vero

人喉癌人子宫颈癌人肺癌非洲绿猴肾

无限

识别病毒增殖的方法（1）细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）

溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。fibroblasticcells-herpessimplexvirusuninfectedearlyinfectionlateinfectionslidesfromCDCIdentificationincellculture

Cytopathiceffect(CPE)MultinucleatedgiantcellsTheclinicaldiagnosisofherpesvirusskininfectionisaidedbythefindingofmultinucleatedgiantcellswitheosinophilicintranuclearinclusionsinskinscraping.（2）红细胞吸附(hemadsorption)：流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24～48小时，细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生红细胞吸附现象。（3）观察病毒的包涵体（4）电子显微镜：直接观察病毒Microscopicidentification

rotavirusastrovirusescoronavirusadenovirus测定病毒数量可用空斑形成单位（PFU）表示。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落（CPE），即空斑。经染色后计算空斑数。病毒量测定PLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPLAQUEASSAYPlaqueformingunits(PFU)Ameasureofthequantityofindividualinfectiousparticles

Diluted10foldDiluted100foldDiluted1000fold检测病毒抗原的快速方法免疫荧光技术ELISA血清学方法Westernblot

……ELISA1°Ab2°AbQuantitationtest

IgG抗体效价需4倍或以上变化

补体结合试验

红细胞凝集和凝集抑制试验

检测病毒抗体方法PCRcycler（二）病毒感染的防治

病毒感染的预防人工主动免疫人工被动免疫人工主动免疫FigEdwardJennervaccinating(inoculating)JamesPhippswithcowpoxmaterial.病毒感染的预防灭活疫苗减毒活疫苗亚单位疫苗基因工程疫苗核酸疫苗减毒疫苗回复突变导致毒性增强；在免疫系统受损的人中导致疾病；导致先天缺陷，尤其是在怀孕头3个月接种活疫苗；减毒疫苗和其他病毒重组。注意事项成功的天花疫苗天花

人痘接种Variolation天花

琴纳1796：牛痘/猪痘1800’s强制儿童免疫1930’s英国最后一例自然感染

1940’s美国最后一例自然感染1958WHO推广1977.8：全世界最后一例，索马里1979WHO宣布脊髓灰质炎Polio1954，Salk，灭活病毒疫苗1957，Sabin，减毒口服活疫苗WHOplan：2000消灭脊灰

发达国家多用灭活Salk中国：Sabin苗

VAPP(vacc