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DB41河南省质量技术监督局发布本标准起草单位:河南海瑞正检测技术有限公司、河南省兽药饲料监察所、河南省种牛遗传性能测1饲料添加剂丁酸梭菌的测定微生物法凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）GB/T6682分析实验室用水规格和GB/T8170数值修约规则与极限数值的表注：除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。水应符合GB/T6682中三4仪器设备4.2粉碎机。4.3高压灭菌器。4.4恒温培养箱。4.7厌氧罐（配厌氧产气袋）。4.8超净工作台。4.11酒精灯。4.12试管架。4.13灭菌试管:15mL。25.1试样稀释及培养同时用1mL无菌生理盐水作对照。然后将5.1.5待培养基凝固后迅速将平皿倒置于培养箱中，5.2菌落特征5.3确证试验从平皿中选出5个特征菌落进行确证试验，在胰蛋白胨大豆琼脂平皿上进行纯化。挑选纯化的菌确证结果:革兰氏染色为阳性菌，菌体呈杆状，能形成圆-++---+6.1计算每块平板上的丁酸梭菌菌落数a，使用式（1）计算:式中:最终结果按照GB/T8170数值修约3选择两个连续稀释度平板（每个稀释度至少有一块平板），其上经确证后的丁酸梭菌数介于30~式中:N样品中丁酸梭菌菌数；Σa所有平板经确证后的丁酸梭菌菌数的总和；n1第一个稀释的平均数；n2第二个稀释的平均数；d第一个稀释度的稀释因子（未经稀释的液体样品的d值为1）。4培养基和试剂A.1硫酸亚铁培养基A.1.1成分A.1.2制法将上述成分置于烧杯中加热溶解，分装于三角瓶中；121℃高压灭菌A.20.85%生理盐水A.3革兰氏染色A.3.1结晶紫染色液A.3.1.1成分A.3.1.2制法A.3.2革兰氏碘液A.3.2.1成分A.3.2.2制法将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300mL。5A.3.3沙黄复染液A.3.3.1成分A.3.3.2制法6加入指示剂溴甲酚紫，分装于试管，115℃高压灭菌3

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