微生物学检验技术 课件 23项目二十三：非发酵菌鉴定

项目二十三非发酵菌鉴定学习目标1．掌握铜绿假单胞菌的主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。2．熟悉不动杆菌属和产碱杆菌属主要生物学特性、微生物学检验方法及鉴定依据。3．了解常见非发酵革兰阴性杆菌的临床意义。4．具有正确采集和处理常见非发酵革兰阴性杆菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确选择试验项目对常见非发酵革兰阴性杆菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十三非发酵菌鉴定思维导图项目二十三非发酵菌鉴定一、假单胞菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定一、假单胞菌属的鉴定概述1.假单胞菌属（Pseudomonas）为严格需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验均阳性，是假单胞菌科的代表菌属，包括200多个菌种。2.假单胞菌属是一类无芽胞、散在排列的革兰阴性杆菌，菌体直或微弯，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼，专性需氧。3.与人类关系密切的有铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等，是医院感染的主要病原菌。1.生物学性状（1）形态与染色：革兰阴性细长杆菌，有荚膜，单鞭毛，运动活泼一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（2）培养特性：营养要求不高，专性需氧，4℃不生长，42℃可生长。普通培养基上生长，80～90％产生各种水溶性色素，如绿脓素和荧光素。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（3）生化反应：氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（4）抗原构造

菌体（O）抗原

鞭毛（H）抗原外膜蛋白：具有属的特异性脂多糖：具有型特异性一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学性状（5）抵抗力：抵抗力强，对干燥、紫外线有抵抗力，对热抵抗力不强，56℃30min可被杀死，对某些消毒剂敏感，1%石炭酸处理5min即被杀死，临床分离菌株对多种抗生素不敏感一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌2.临床意义（1）主要致病物质：

铜绿假单胞菌有多种致病因子，包括结构成分、毒素和酶，如粘附素、多糖荚膜样物质、内毒素、外毒素A、弹性蛋白酶、磷脂酶C等（2）所致疾病：铜绿假单胞菌是条件致病菌，免疫力低下者易感染，是医院内感染的主要菌之一。临床表现多样，引起化脓性感染，如烧伤感染、呼吸道感染、中耳炎、眼角膜炎等，合并败血症者死亡率高。（3）药物敏感性：对抗假单胞菌青霉素类、氨基糖苷类、环丙沙星、头孢吡肟、头孢他定、美罗培能、亚胺培南敏感。医院获得性铜绿假单胞菌较社区分离株有较高的耐药性，常显示多重耐药。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（1）标本采集：根据疾病及检查目的分别采集不同的临床标本，如血液、痰液、脑脊液、胸（腹）水、尿液、脓液、分泌液、粪便等。医院环境检测可从空气、水、物体表面等处采样。一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（2）检验程序标本增菌

分离培养（血平板）最后鉴定可疑菌落（性状、色素）初步鉴定涂片染色镜检血标本涂片镜检氧化酶菌落特征绿脓素气味42℃生长分型生化鉴定：O/F

O枸櫞酸盐利用＋精氨酸双水解＋乙酰胺酶＋明胶液化＋一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌3.微生物学检验（3）检验方法1）直接镜检：涂片、革兰染色2）分离培养：直接接种或增菌后接种血平板和MAC3）鉴定：根据菌落特征、色素、菌体形态、生化反应等作出鉴定。对无色素菌株应与其他假单胞菌鉴别一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌与其他假单胞菌的鉴别

铜绿假单胞菌荧光假单胞菌恶臭假单胞菌韦龙氏假单胞菌产碱假单胞菌氧化酶999710010096溴化-16-烷基-3-甲胺生长948987ND156.5%氯化钠生长6543100ND4142℃生长1000000硝酸盐还原9819010054青脓素6596931000精氨酸双水解酶1009710010012尿素水解575275250明胶水解821000130葡萄糖产酸971001001000枸橼酸盐9593100ND65一、假单胞菌属的鉴定（一）铜绿假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：为革兰氏阴性杆菌，大小为0.7～0.8μm×2.3～2.8μm，有鞭毛，无芽孢，有数根极生鞭毛。（2）培养特性：需氧，最适生长温度是25～30℃，4℃生长，42℃不生长，在血平板上30℃孵育24h后形成灰白色、扁平稍隆起、湿润、光滑、边缘整齐的菌落，无溶血，挑取菌落呈黏丝状。能分泌黄绿色荧光色素发出荧光一、假单胞菌属的鉴定（二）荧光假单胞菌2.临床意义

荧光假单胞菌具有嗜冷性，可在血库储存的血中繁殖，若输入含有此种细菌的库存血液或血制品，可导致败血症、感染性休克或血管内凝血等严重后果，其内毒素的磷脂部分，可导致输血后不可逆的休克。3.微生物学检验

荧光假单胞菌生化能力活跃，氧化酶阳性，触酶阳性，能利用葡萄糖和果糖，有些菌株能从蔗糖合成果聚糖，液化明胶。在4℃生长和液化明胶(4～7d)，这两个特性可与恶臭假单胞菌相鉴别，后者均阴性。一、假单胞菌属的鉴定（二）荧光假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：革兰阴性杆菌，有些菌株为卵圆形，单端丛毛菌，运动活泼。（2）培养特性：专性需氧，最适生长温度25～30℃，4℃和42℃均不生长，在血平板上形成光滑、湿润、边缘整齐的灰色菌落，不溶血，菌落与铜绿假单胞菌相似，但只产生荧光素，不产生绿脓素，借此可与铜绿假单胞菌相区别，其陈旧培养物有腥臭味。一、假单胞菌属的鉴定（三）恶臭假单胞菌2.临床意义

恶臭假单胞菌为鱼的一种致病菌，常从腐败的鱼中检出，可作为人类咽部的正常菌群，是人类少见的条件致病菌，偶从人类尿道感染、皮肤感染和骨髓炎标本中分离出，分泌物有腥臭味。恶臭假单胞菌感染通常病情较重。

3.微生物学检验

恶臭假单胞菌氧化酶、过氧化氢酶、枸缘酸利用阳性，精氨酸双水解酶阳性，硝酸盐还原、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、明胶酶、尿素酶、V-P反应、吲哚反应阴性。一、假单胞菌属的鉴定（三）恶臭假单胞菌1.生物学特性（1）形态与染色：革兰氏阴性菌杆菌，直径0.5μm×2～3μm；有极生单鞭毛。（2）培养特性：最适生长温度35℃，专性需氧，在血平板上形成圆形，边缘整齐，隆起，表面光滑，湿润的菌落。一、假单胞菌属的鉴定（四）产碱假单胞菌2.临床意义

产碱假单胞菌为自然界腐生菌，广泛存在于多种水源中，是医疗用水污染的主要原因，如污染新生儿温箱湿化用水和氧气湿化用水，极容易导致新生儿呼吸道感染甚至败血症等。还可引起化脓性脑膜炎、尿道炎、肺炎、心内膜炎、新生儿败血症、脓胸眼部感染及脓肿等感染性疾病。3.微生物学检验

产碱假单胞菌氧化酶阳性，O/F试验为产碱型，42℃不生长，不产色素，不分解尿素，不液化明胶。一、假单胞菌属的鉴定（四）产碱假单胞菌二、不动杆菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定二、不动杆菌属的鉴定1.形态与染色

革兰阴性杆菌，常成双排列，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。2.培养特性专性需要，营养要求不高，最适温度35℃，鲍曼不动杆菌42℃可生长。（一）生物学特性2.培养特性血平板上菌落圆形凸起，中等大小，光滑、边缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈粘液状，不产色素；在麦康凯平板上形成粉红色菌落。二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性醋酸钙不动杆菌菌落（MAC）鲍曼不动杆菌菌落（MAC）二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性3.生化反应

氧化酶阴性，触酶阳性，硝酸盐还原阴性，O/F为氧化型。动力、甲基红、V-P、H2S和硝酸盐还原试验阴性。不同的菌种对糖的氧化分解能力不同，醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌氧化分解葡萄糖和乳糖产酸，多数菌种能利用枸橼酸盐。二、不动杆菌属的鉴定（一）生物学特性1.致病物质

致病机制尚不完全清楚，未发现不动杆菌能分泌毒素或细胞溶解素，其致病力主要由荚膜、菌毛、产物酶、脂质及载体等组成。2.所致疾病

本属细菌为条件致病菌，在非发酵菌中本菌的分离率仅次于铜绿假单胞菌，也是医院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染。3.药物敏感性

对青霉素、氨苄西林和头孢拉啶耐药；多数菌株对氯霉素耐药；对复方新诺明、哌拉西林/他唑巴坦、多西环素、和氟喹诺酮类较敏感。二、不动杆菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集

呼吸道、泌尿道及化脓感染的患者可采集尿液、痰液及脓液等标本；对疑为菌血症和脑膜炎的患者可采集血液和脑脊液标本。2.检验方法

（1）显微镜检查：

涂片革兰染色镜检，革兰阴性球杆菌，常成双排列，有荚膜，有菌毛。

（2）分离培养：在血琼脂培养基上，醋酸钙不动杆菌菌落较大，洛菲不动杆菌菌落较小，圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、灰白色、有黏性的β溶血菌落。在麦康凯琼脂平板上，醋酸钙不动杆菌形成粉红色的菌落，而洛菲不动杆菌形成黄色菌落。（3）生化反应：一般不产生色素，少数菌株可产生色素，氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性，触酶阳性。

二、不动杆菌属的鉴定（三）微生物学检验

醋酸钙不动杆菌鲍曼不动杆菌溶血不动杆菌琼氏不动杆菌约翰逊不动杆菌洛菲不动杆菌葡萄糖氧化＋＋＋／－－－－木糖氧化－＋＋／－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸双水解酶＋＋＋＋－／＋－鸟氨酸脱羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脱氨酶＋＋－－－－丙二酸盐利用试验＋＋＋－－／＋－柠檬酸盐利用试验＋＋＋＋／－＋－明胶液化－－＋－－－37℃生长＋＋＋＋－＋42℃生长－＋－－－－不动杆菌属主要菌种的鉴别要点二、不动杆菌属的鉴定（三）微生物学检验三、产碱杆菌属的鉴定项目二十三非发酵菌鉴定1.形态与染色革兰阴性短杆菌，成对或链状排列，有周鞭毛，无芽胞，多数无荚膜。三、产碱杆菌属的鉴定（一）生物学特性2.培养特性专性需氧，最适生长温度25～35℃，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，麦康凯和SS平板亦可生长。三、产碱杆菌属的鉴定（一）生物学特性1.致病物质

本属中临床分离最常见的是粪产碱杆菌，大部分感染是条件致病，主要来自潮湿环境，如雾化器、呼吸机和灌洗液等，血、痰、尿、脑脊液等是常见的发现部位，是医院感染的病原菌之一。其致病物质主要是菌体成分如内毒素等。2.所致疾病

可致抵抗力低下的患者发生菌血症，也可引起呼吸道、泌尿道及中枢神经系统感染。3.药物敏感性

药物敏感试验的药物选择与假单胞菌相同。临床治疗可用哌拉西林及替卡西林。三、产碱杆菌属的鉴定（二）临床意义1.标本采集

根据临床疾病不同采集不同的标本，如血液、尿液、痰液、脓汁、脑脊液等。2.检验方法（1）显微镜检查：

脑脊液、尿液离心取沉淀涂片，脓汁和痰液可直接涂片革兰染色镜检，为革兰阴性短杆菌，有周鞭毛.（2）分离培养：在血平板上可形成大小不等、灰白色、扁平、边缘稍薄的湿润菌落，粪产碱杆菌部分菌株有水果香味；在麦康凯和SS平板上形成无色透明菌落。（3）生化反应：不分解任何糖类，O/F不分解糖类呈碱性，氧化酶阳性，触酶阳性，分解胺类产碱。三、产碱杆菌属的鉴定（三）微生物学检验

粪产碱杆菌皮乔特产碱杆菌粪产碱杆菌Ⅱ型木糖氧化产碱杆菌42℃生长－－－＋亚硝酸盐还原＋－－＋硝酸盐还原－＋－＋丙二酸盐＋＋－＋木糖－－－＋常见产碱杆菌的特性