微生物学检验技术 课件 24项目二十四：厌氧菌鉴定

项目二十四厌氧菌鉴定学习目标1．掌握破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌的生物学特性、微生物学检验方法及致病机制。2．熟悉无芽胞厌氧菌的形态特征及初步鉴别。3．了解厌氧菌感染的条件及临床特征。4．具有正确采集和处理常见厌氧菌检验标本及进行相关检测的能力。5．能正确选择试验项目对常见厌氧菌进行检验，能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。项目二十四厌氧菌鉴定思维导图项目二十四厌氧菌鉴定概述必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌。根据能否形成芽胞分为两大类:有芽胞厌氧菌（外源性感染—致病菌）

无芽胞厌氧菌（内源性感染—条件致病菌）有芽胞厌氧菌只有1个属即梭菌属。破伤风梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌艰难梭菌共同特点G+杆菌，有芽胞，抵抗力强，厌氧感染条件是伤口厌氧微环境，产外毒素致病无荚膜(产气荚膜梭菌除外)细菌所致疾病破伤风梭菌破伤风产气荚膜梭菌气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎等肉毒梭菌肉毒中毒艰难梭菌假膜性结肠炎一、破伤风芽胞梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

菌体细长G+杆菌，周鞭毛，无荚膜。芽胞大于菌体，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状，为本菌的典型特征。芽胞芽胞鞭毛2.培养特性

专性厌氧，在血平板上可呈薄膜状生长，菌落半透明、灰白色、边缘疏松似羽毛状，伴β溶血。在庖肉培养基中，肉渣变黑，有腐败性恶臭。3.生化反应

大多生化反应阴性。4.抵抗力很强，土壤中可存活数十年，能耐干热150℃1h，煮沸100℃1h方可杀灭。繁殖体对青霉素敏感。（二）微生物学检验根据破伤风病人典型的临床表现即可诊断，特殊需要时才进行细菌学检查。1.标本从可疑的感染伤口采取浓汁、组织液或坏死组织块等。2.鉴定

直接涂片厌氧培养毒力试验（三）临床意义感染途径：创伤感染条件：厌氧微环境致病物质：破伤风痉挛毒素和破伤风溶血毒素典型症状：牙关紧闭、苦笑面容、角弓反张12破伤风痉挛毒素作用机理防治原则：及时处理伤口,扩创、清创人工自动免疫，白百破三联菌苗（DPO）或类毒素人工被动免疫，紧急预防注射破伤风抗毒素(TAT)，大剂量青霉素（四环素、红霉素）及使用镇静解痉药作对症处理。二、产气荚膜梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

G+粗大杆菌，无鞭毛，在机体内可形成明显的荚膜。芽胞直径小于菌体宽度，位于中央或近极端。2.培养特性

生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好血琼脂平板：双层溶血环卵黄琼脂平板：Nagler反应（α毒素）牛奶培养基：“汹涌发酵”卵黄琼脂平板Nagler反应双层溶血环汹涌发酵Nagler反应

产气荚膜梭菌在卵黄琼脂平板上，由于细菌可产生α毒素（卵磷脂酶）分解卵磷脂，使菌落周围出现乳白色浑浊圈，是鉴定本菌的简易方法。3.生化反应发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇，产酸产气明胶液化试验（+），H2S试验（+），卵磷脂酶（+）在乳糖蛋黄牛奶血琼脂上分解乳糖，有双层溶血环（二）微生物学检验1.标本避免正常厌氧菌群的污染和接触氧气2.鉴定涂片镜检:G+大杆菌，有荚膜，白细胞少，并伴有杂菌，有初步诊断价值。分离培养：厌氧培养，如有菌生长，取可疑菌落进行形态学和生化反应鉴定。（三）临床意义感染途径：创伤和消化道感染条件：厌氧微环境致病物质：外毒素、多种侵袭性酶和荚膜所致疾病：气性坏疽、食物中毒、坏死性肠炎防治原则：及时处理伤口,扩创、清创早期可用多价抗毒素血清抗生素使用三、肉毒芽胞梭菌（一）生物学特性1.形态与染色

专性厌氧，芽胞直径大于菌体，位于次极端，使细菌呈汤匙状或网球拍状。2.培养特性

严格厌氧，营养要求不高。厌氧血平板上形成2-4mm菌落，毛玻璃样，β-溶血。庖肉培养基中生长能消化肉渣，使之变黑，有腐败恶臭气味。3.生化反应生化特性随毒素型不同而有所差异。4．抵抗力很强，能耐热100℃1h以上，干热180℃2h高压蒸汽灭菌30min芽胞可被杀死。肉毒毒素不耐热，经56℃30min可灭活。（二）微生物学检验1.标本及时取可疑食品、呕吐物、粪便等。2.鉴定涂片镜检：G+大杆菌，菌体呈汤匙状或网球拍状。分离培养：庖肉培养基中能消化肉渣使之变黑，有腐败恶臭气味。肉毒素检测（+）。（三）临床意义感染途径：创伤和消化道感染条件：厌氧微环境致病物质：肉毒毒素（毒性最强）所致疾病：肉毒素中毒防治原则：加强食品管理和监督食品进食前加热煮沸治疗应尽早注射多价抗血清四、艰难梭菌革兰阳性粗大杆菌，有些菌株有周身鞭毛，芽胞位于菌体次极端，严格厌氧，营养要求较高，不易培养。临床意义：假膜性肠炎

艰难梭菌是人类肠道中的正常菌群，当长期使用氨苄青霉素、头孢菌素、红霉素、氯林可霉素以及抗肿瘤化学制剂引起菌群失调，引发抗生素相关性腹泻（假膜性结肠炎）。临床表现：严重腹泻、腹痛、伴有全身中毒症状，常并发有毒素性巨结肠的形成。治疗：可用万古霉素或甲硝唑，并口服调整正常菌群的制剂。（一）脆弱类杆菌

占临床厌氧菌分离株的25%，居临床厌氧菌分离株的首位。在一定条件下可引起人体内源性感染，如脑脓肿、腹膜炎、阑尾炎、女性生殖系统及盆腔感染。五、无芽胞厌氧杆菌脆弱拟杆菌的两极浓染及菌体的多形性（二）产黑色素普雷沃菌条件致病菌，可引起内源性感染，常与其他厌氧菌、需氧菌或兼性厌氧菌引起混合感染。是引起口腔与牙周感染、肺部感染及女性生殖系统感染常见菌之一。产黑色素普雷沃菌培养特性（三）不解糖紫单胞菌

不解糖紫单胞菌主要分布于人类口腔、泌尿生殖道和肠道，在正常人体的检出率较低。主要引起人类牙周炎、牙髓炎、根尖周炎，也可引起胸膜炎、阑尾炎和细菌性阴道炎，尚可引起头、颈部和下呼吸道感染。（四）革兰阳性无芽胞厌氧杆菌共同特点革兰阳性，菌体与类棒状杆菌相似，多呈“X”、“Y”、“人”、“川”等形状，大小不一、长短不等，多形性明显。pH6．5～7．8生长良好，但乳杆菌属最适pH5．5左右、甚至pH3亦能生长。各菌生化反应不一，多数能发酵葡萄糖，触酶（-），吲哚试验（-）。菌属主要特征（G＋C）%丙酸杆菌属主要代谢产物丙酸53～67乳杆菌属唯一的代谢产物乳酸32～53双岐杆菌属代谢产物乙酸＞乳酸55～67真杆菌属主要代谢产物乙酸、丁酸、甲酸30～40放线菌属代谢产物琥珀酸、乳酸、少量乙酸和甲酸57～69确定为厌氧菌后，在排除芽胞的前提下，进行鉴别

厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的25%，其中主要包括革兰阳性的消化球菌、消化链球菌和革兰阴性的韦荣球菌。1.消化球菌属本菌是人体正常菌群之一，常与其他细菌引起混合感染，包括腹腔感染，肝脓肿，外阴、阴道及盆腔感染，肺部和胸膜感染，口腔感染，颅内感染以及皮肤和软组织感染等。（五）厌氧球菌2.消化链球菌属临床厌氧菌分离株中占比例较高，仅次于脆弱类杆菌，居第2位。3.韦荣球菌属口腔、咽部、胃肠道和女性生殖道正常菌群，为条件致病菌，引起人体内源性感染，感染多为混合感染。

厌氧菌是一群在有氧环境中不能生长或生长不良而在无氧环境中生长得更好的细菌。包括厌氧革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、革兰阳性杆菌和革兰阴性杆菌，革兰阳性杆菌的芽胞位置和特征是厌氧菌重要的分类和鉴定依据。局部组织缺血、缺氧造成氧化还原电势（Eh）低、深部组织创伤和深部脓肿等厌氧环境是临床厌氧菌感染的重要因素。正确的标本采集和转运是厌氧菌分离培养的关键环节，其要点是避免正常菌落的污染和尽量减少标本在有氧环境中的暴露时间。梭状芽胞杆菌的种类最多，包括破伤风梭菌、产气荚膜梭菌和肉毒梭菌