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备案号：56302-2017DB22DB22/T2688.2—2017饲料中三种致病菌检测微滴数字PCR法第2部分：单核细胞增生李斯特氏菌DeterminationofthreepathogenicbacteriainfeedbydropletdigitalPCRmethodPart2：Listeriamonocytogenes吉林省质量技术监督局发布I本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问本标准规定了饲料中单核细胞增生李斯特氏菌检测微滴数字PCR法的试剂和材料、仪器和设备GB4789.1食品安全国家标准食品微生物学检验总则GB4789.30-2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技理及阳性微滴的个数与比例得出靶分子的起始拷贝数或浓度。本标准通针特异性引物和探针进行数字4.4裂解液：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵)，Tris(trishydroxymethylaminomethane，三羟甲基氨基甲烷)，1.4mol/LNaCl4.5酚/氯仿/异戊醇（25:24:1，v/2按照GB/T14699.1对饲料进行采样吸取单核细胞增生李斯特氏菌增菌液1mL（6.3加到1.5mL无菌离心管中，12000r/mi），nm和280nm处的吸收值，从而确定DNA浓度最优浓度311143反应条件：95℃/5min，1个循环；95℃/15s，60℃/1min，40个循环；98℃/1根据数字PCR体系中阴性分割体系的终点荧光值设定荧光的阈值限。阈值限需要对空白和阳性扩增8.3.1样品基因没有得到扩增，扩增终点荧光信号小于阈值，可判定样品结果8.3.2样品基因得到扩增，扩增终

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