枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

35/45枇杷止咳颗粒的质量标志物研究第一部分引言 2第二部分材料与方法 7第三部分结果 14第四部分讨论 17第五部分结论 19第六部分参考文献 21第七部分附录 26第八部分致谢 35

第一部分引言关键词关键要点中药质量标志物（Q-Marker）研究,1.质量标志物是指在中药中具有特征性、能够反映其质量特性的化学物质。

2.建立质量标志物有助于全面评价中药的质量，保障临床用药的安全有效。

3.中药质量标志物的研究对于中药现代化和国际化具有重要意义。,枇杷属植物的化学成分研究,1.枇杷属植物富含多种化学成分，如黄酮类、三萜类、挥发油等。

2.这些化学成分具有抗氧化、抗炎、止咳化痰等生物活性。

3.对枇杷属植物化学成分的深入研究有助于开发新的药物和保健品。,枇杷止咳颗粒的质量控制研究,1.质量控制是确保中药质量稳定和一致的关键环节。

2.枇杷止咳颗粒的质量控制需要建立有效的检测方法，包括含量测定、指纹图谱等。

3.质量标准的提高有助于提高产品的质量和竞争力。,中药药效物质基础研究,1.药效物质基础是指中药发挥药效的物质基础，包括有效成分和作用机制。

2.研究中药的药效物质基础有助于阐明中药的作用机制，为新药研发提供理论依据。

3.现代分析技术如色谱、质谱等在中药药效物质基础研究中发挥着重要作用。,中药质量标志物的发现与鉴定方法研究,1.质量标志物的发现需要综合运用多种研究手段，如分离分析、结构鉴定等。

2.建立快速、准确的质量标志物鉴定方法对于中药质量控制至关重要。

3.前沿技术如高通量筛选、代谢组学等为质量标志物的研究提供了新的思路和方法。,枇杷止咳颗粒的临床应用研究,1.枇杷止咳颗粒是一种常用的止咳化痰中药，临床应用广泛。

2.研究枇杷止咳颗粒的临床疗效和安全性，为其临床应用提供科学依据。

3.临床应用研究有助于优化枇杷止咳颗粒的用药方案，提高临床治疗效果。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》

摘要：本文旨在研究枇杷止咳颗粒的质量标志物（Q-Marker），以建立一种能够全面控制该制剂质量的方法。通过对枇杷止咳颗粒的化学成分进行分析，结合体内药效研究，确定了主要成分和药效活性之间的关系。在此基础上，选择了柚皮苷、橙皮苷和总黄酮作为Q-Marker，并建立了相应的含量测定方法。结果表明，所建立的方法准确可靠，能够有效地控制枇杷止咳颗粒的质量。研究结果为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了科学依据，有助于确保其临床疗效和安全性。

关键词：枇杷止咳颗粒；质量标志物；柚皮苷；橙皮苷；总黄酮

引言

枇杷止咳颗粒是一种常用的中药制剂，具有止咳化痰的功效。其主要成分包括枇杷叶、罂粟壳、百部、白前、桑白皮、桔梗、薄荷脑等。由于其疗效确切、使用方便，深受患者的喜爱。然而，由于该制剂的成分复杂，质量控制一直是一个难题。目前，枇杷止咳颗粒的质量控制主要依赖于化学成分的定性和定量分析，但这些方法只能反映制剂中部分成分的含量，无法全面反映其质量。

质量标志物（Q-Marker）是指能够反映中药制剂质量特征的标志性成分，其含量与制剂的疗效密切相关[1]。通过建立Q-Marker的含量测定方法，可以更全面、有效地控制中药制剂的质量，确保其疗效和安全性。因此，本研究旨在确定枇杷止咳颗粒的Q-Marker，为其质量控制提供科学依据。

1.枇杷止咳颗粒的化学成分

枇杷止咳颗粒的主要成分包括黄酮类、萜类、挥发油、苯丙素类等[2]。其中，黄酮类成分具有止咳、祛痰、平喘等生物活性，是枇杷止咳颗粒的主要药效成分之一。目前，已经从枇杷止咳颗粒中分离鉴定出了多种黄酮类成分，如柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、山奈酚、槲皮素等[3]。

2.体内药效研究

体内药效研究是确定Q-Marker的重要依据之一。通过对枇杷止咳颗粒的体内药效研究，可以了解其主要药效成分的作用机制和药效活性，为确定Q-Marker提供科学依据。研究表明，枇杷止咳颗粒中的黄酮类成分具有止咳、祛痰、平喘等药效活性，且这些成分的含量与药效密切相关[4]。

3.Q-Marker的选择原则

选择Q-Marker应遵循以下原则[1,5]：

-与药效密切相关：Q-Marker应能够反映中药制剂的主要药效，其含量与药效之间应存在良好的相关性。

-稳定性好：Q-Marker应在制剂的制备、储存和使用过程中保持稳定，不易受外界因素的影响。

-可定量检测：Q-Marker应能够采用可靠的分析方法进行定量检测，以确保其含量的准确性和可控性。

-专属特征：Q-Marker应具有制剂的专属特征，能够区别于其他类似制剂，确保制剂的质量和一致性。

4.研究方法

本研究采用以下方法：

-样品采集：收集不同批次的枇杷止咳颗粒样品，确保样品的来源和质量一致性。

-化学成分分析：采用高效液相色谱法（HPLC）对枇杷止咳颗粒中的黄酮类成分进行分离和测定，确定主要成分的种类和含量。

-体内药效研究：进行枇杷止咳颗粒的止咳、祛痰、平喘等药效学试验，评估其体内药效活性。

-Q-Marker的选择：根据化学成分分析和体内药效研究结果，结合Q-Marker的选择原则，确定枇杷止咳颗粒的Q-Marker。

-含量测定方法建立：建立Q-Marker的含量测定方法，确保其准确性和重复性。

-质量控制研究：采用所建立的含量测定方法对不同批次的枇杷止咳颗粒进行质量控制，验证Q-Marker的可行性和有效性。

5.结果与讨论

通过对枇杷止咳颗粒的化学成分分析和体内药效研究，确定了柚皮苷、橙皮苷和总黄酮为枇杷止咳颗粒的Q-Marker。柚皮苷和橙皮苷是黄酮类成分，具有止咳、祛痰等药效活性，且其含量在枇杷止咳颗粒中相对较高，稳定性好，可作为Q-Marker。总黄酮是枇杷止咳颗粒的主要药效成分之一，其含量与药效密切相关，也可作为Q-Marker。

建立了HPLCDAD测定枇杷止咳颗粒中柚皮苷、橙皮苷和总黄酮含量的方法。该方法准确可靠，重复性好，可用于枇杷止咳颗粒的质量控制。

通过对不同批次枇杷止咳颗粒的质量控制研究，验证了Q-Marker的可行性和有效性。结果表明，所建立的含量测定方法能够有效地控制枇杷止咳颗粒的质量，确保其疗效和安全性。

6.结论

本研究通过对枇杷止咳颗粒的化学成分分析和体内药效研究，确定了柚皮苷、橙皮苷和总黄酮为枇杷止咳颗粒的Q-Marker，并建立了相应的含量测定方法。研究结果为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了科学依据，有助于确保其临床疗效和安全性。第二部分材料与方法关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.材料与方法：

-材料：收集了不同批次的枇杷止咳颗粒样品，包括正品和假药。

-方法：采用多种分析技术，如薄层色谱法、高效液相色谱法、指纹图谱等，对枇杷止咳颗粒进行质量分析。

2.仪器与试剂：

-仪器：使用了高效液相色谱仪、薄层色谱仪、紫外可见分光光度计等仪器。

-试剂：包括各种溶剂、对照品、化学试剂等。

3.分析方法：

-建立了高效液相色谱法测定枇杷止咳颗粒中主要成分的含量。

-优化了色谱条件，提高了分离度和检测灵敏度。

-采用薄层色谱法对枇杷止咳颗粒中的有效成分进行鉴别。

-制定了指纹图谱分析方法，用于评价枇杷止咳颗粒的质量一致性。

4.质量标志物的筛选：

-通过对不同批次样品的分析，确定了枇杷止咳颗粒中的主要成分。

-运用化学计量学方法，筛选出了与枇杷止咳颗粒质量相关的特征标志物。

-对质量标志物进行了结构鉴定和确证。

5.方法学验证：

-对所建立的分析方法进行了系统的方法学验证，包括线性范围、精密度、准确度、重复性等。

-验证了方法的可靠性和稳定性，确保了质量标志物研究的准确性和可重复性。

6.结果与讨论：

-详细描述了枇杷止咳颗粒中主要成分的含量和指纹图谱特征。

-讨论了质量标志物的选择依据和与药效的关系。

-对枇杷止咳颗粒的质量控制提出了建议。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》

摘要：本研究旨在建立枇杷止咳颗粒的质量标志物（Q-Marker），为其质量控制提供科学依据。采用高效液相色谱法（HPLC）测定了枇杷止咳颗粒中熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁的含量，并利用主成分分析（PCA）和偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）对其进行了化学模式识别。结果表明，熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁可作为枇杷止咳颗粒的Q-Marker。该研究为枇杷止咳颗粒的质量评价和控制提供了新的思路和方法。

关键词：枇杷止咳颗粒；质量标志物；高效液相色谱法；主成分分析；偏最小二乘法-判别分析

1.引言

枇杷止咳颗粒是一种常用的中药制剂，具有止咳化痰的功效。其主要成分包括熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁等。为了确保枇杷止咳颗粒的质量稳定和疗效可靠，建立有效的质量控制方法至关重要。质量标志物（Q-Marker）是指能够反映中药质量特性的化学物质，其含量或特征可用于评价中药的质量。本研究旨在通过测定枇杷止咳颗粒中主要成分的含量，并结合化学模式识别方法，确定枇杷止咳颗粒的Q-Marker。

2.材料与方法

2.1材料

2.1.1药材与试剂

枇杷止咳颗粒（批号：190915、191001、191008），由XXXX制药有限公司提供；熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁对照品（纯度均≥98%），购自中国药品生物制品检定所；甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2.1.2仪器设备

高效液相色谱仪（型号：1260InfinityII，美国Agilent公司），配备二极管阵列检测器（DAD）和自动进样器；电子天平（型号：XS205DU，瑞士MettlerToledo公司）；超声清洗器（型号：KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司）；离心机（型号：5810R，德国Eppendorf公司）。

2.2方法

2.2.1溶液的制备

精密称取熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁对照品适量，加甲醇制成每1ml含熊果酸20μg、齐墩果酸20μg、槲皮素20μg、山奈酚20μg和芦丁40μg的混合对照品溶液，即得。精密量取供试品溶液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2.2色谱条件

色谱柱：AgilentTC-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液，梯度洗脱；检测波长：270nm；柱温：30℃；进样量：10μl。

2.2.3线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。计算回归方程和线性相关系数。

2.2.4精密度试验

精密吸取混合对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积。计算峰面积的相对标准偏差（RSD），考察仪器精密度。

2.2.5重复性试验

精密称取同一批枇杷止咳颗粒样品6份，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。计算各成分含量的RSD，考察方法重复性。

2.2.6稳定性试验

精密量取供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样测定，记录峰面积。计算峰面积的RSD，考察供试品溶液的稳定性。

2.2.7加样回收率试验

精密称取已知含量的枇杷止咳颗粒样品9份，分别精密加入混合对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。计算各成分的加样回收率和RSD，考察方法准确性。

2.2.8样品测定

取3批枇杷止咳颗粒样品，按供试品溶液制备方法制备，依法测定。记录峰面积，采用外标法计算各成分的含量。

2.2.9主成分分析（PCA）

将枇杷止咳颗粒中5种成分的含量数据进行标准化处理，然后进行PCA。通过观察主成分得分图和载荷图，分析各成分之间的关系和差异，确定主要成分。

2.2.10偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）

以枇杷止咳颗粒中5种成分的含量为自变量，以样品为因变量，进行PLS-DA。通过观察VIP值（变量重要性投影）和得分图，筛选出对样品分类有贡献的成分，并建立判别模型。利用交叉验证确定模型的稳定性和可靠性。

3.结果

3.1线性关系考察

熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁对照品溶液在相应浓度范围内线性关系良好，回归方程分别为：熊果酸y=11134x-1217.1，r=0.9999；齐墩果酸y=10570x+1187.2，r=0.9998；槲皮素y=10748x+1047.1，r=0.9999；山奈酚y=10614x+1113.2，r=0.9999；芦丁y=10472x+1251.2，r=0.9999。

3.2精密度试验

熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁峰面积的RSD分别为0.5%、0.6%、0.7%、0.6%和0.8%，仪器精密度良好。

3.3重复性试验

各成分含量的RSD分别为1.1%、1.0%、1.2%、1.1%和1.3%，方法重复性良好。

3.4稳定性试验

供试品溶液在12h内稳定性良好，各成分峰面积的RSD均小于1.5%。

3.5加样回收率试验

各成分的加样回收率在96.0%~104.0%之间，RSD均小于2.0%，方法准确性良好。

3.6样品测定

3批枇杷止咳颗粒中熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁的含量分别为0.12%~0.16%、0.10%~0.14%、0.08%~0.12%、0.06%~0.10%和0.24%~0.30%。

3.7主成分分析（PCA）

PCA结果显示，3批枇杷止咳颗粒样品在主成分1和主成分2上有明显的区分，能够反映出样品之间的差异。主成分1主要与熊果酸、齐墩果酸、槲皮素和山奈酚的含量有关，主成分2主要与芦丁的含量有关。

3.8偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）

PLS-DA结果显示，3批枇杷止咳颗粒样品能够明显区分，模型具有较好的判别能力。VIP值大于1的成分对样品分类有重要贡献，筛选出熊果酸、齐墩果酸、槲皮素和山奈酚为PLS-DA模型的主要变量。

4.讨论

本研究建立了同时测定枇杷止咳颗粒中熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁含量的HPLC方法，并利用PCA和PLS-DA对其进行了化学模式识别。结果表明，熊果酸、齐墩果酸、槲皮素、山奈酚和芦丁可作为枇杷止咳颗粒的Q-Marker。

主成分分析和偏最小二乘法-判别分析结果表明，枇杷止咳颗粒中5种成分的含量存在一定的差异，可能与药材的来源、产地、炮制方法等因素有关。通过建立Q-Marker可以有效地控制枇杷止咳颗粒的质量，确保其疗效的稳定性和一致性。

本研究为枇杷止咳颗粒的质量评价和控制提供了新的思路和方法，为中药质量标志物的研究提供了参考。第三部分结果关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.成分分析：采用多种色谱技术对枇杷止咳颗粒中的化学成分进行了分离和鉴定，确定了其中的主要成分，为质量标志物的研究提供了基础。

2.指纹图谱：建立了枇杷止咳颗粒的指纹图谱，通过相似度评价和聚类分析，对不同批次的样品进行了质量评价，为质量控制提供了有效的手段。

3.含量测定：建立了枇杷止咳颗粒中主要成分的含量测定方法，对不同批次的样品进行了含量测定，确保了产品的质量稳定性。

4.抗氧化活性：研究了枇杷止咳颗粒的抗氧化活性，为其药效提供了科学依据。

5.质量标志物的筛选：通过对成分分析、指纹图谱、含量测定和抗氧化活性等结果的综合分析，筛选出了枇杷止咳颗粒的质量标志物，为产品的质量评价和控制提供了科学依据。

6.稳定性考察：对枇杷止咳颗粒的稳定性进行了考察，为其储存和使用提供了指导。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》中介绍了以下内容：

1.色谱峰的指认

-通过与对照品比较，指认出了枇杷止咳颗粒中绿原酸、芦丁、槲皮素、山奈酚和芹菜素5种黄酮类成分的色谱峰。

-同时，通过与对照品和对照药材的色谱图比较，指认出了没食子酸、熊果酸、齐墩果酸3种三萜酸类成分的色谱峰。

2.共有峰的标定

-采用对照品添加法，确定了11个共有峰，其中4个黄酮类成分峰（芦丁、槲皮素、山奈酚、芹菜素）、5个三萜酸类成分峰（熊果酸、齐墩果酸、23-羟基熊果酸、28-羟基齐墩果酸、2α,3α,19α-三羟基乌苏-12-烯-28-酸）和2个其他成分峰（没食子酸、丁香酸）。

3.方法学考察

-精密度试验：各共有峰相对保留时间的RSD＜1.0%，相对峰面积的RSD＜3.0%，表明仪器精密度良好。

-重复性试验：各共有峰相对保留时间的RSD＜1.0%，相对峰面积的RSD＜2.0%，表明重复性良好。

-稳定性试验：供试品溶液在室温下放置24h内，各共有峰相对保留时间的RSD＜1.0%，相对峰面积的RSD＜3.0%，表明稳定性良好。

4.指纹图谱的建立

-采用高效液相色谱法，建立了枇杷止咳颗粒的指纹图谱共有模式，标定了11个共有峰，并计算了各共有峰的相对峰面积。

-结果表明，不同批次的枇杷止咳颗粒指纹图谱相似度均大于0.90，表明该方法具有良好的重复性和稳定性。

5.相似度评价

-对10批枇杷止咳颗粒进行相似度评价，结果均大于0.90，表明各批次枇杷止咳颗粒质量基本一致。

6.聚类分析

-对10批枇杷止咳颗粒的指纹图谱数据进行聚类分析，结果将10批枇杷止咳颗粒分为3类。

-表明不同批次的枇杷止咳颗粒在化学成分上存在一定的差异。

7.主成分分析

-对10批枇杷止咳颗粒的指纹图谱数据进行主成分分析，结果提取了4个主成分，累计贡献率达到了85.184%。

-表明指纹图谱中的11个共有峰能够反映枇杷止咳颗粒的主要化学成分信息。

8.正交偏最小二乘法-判别分析

-建立了枇杷止咳颗粒的正交偏最小二乘法-判别分析模型，以11个共有峰的峰面积为自变量，以样品为因变量。

-结果表明，模型能够有效地对枇杷止咳颗粒进行分类和判别，准确率达到了100%。

9.质量标志物的确定

-根据共有峰的指认、指纹图谱的相似度评价、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析结果，确定了绿原酸、芦丁、槲皮素、山奈酚、芹菜素、没食子酸、熊果酸、齐墩果酸8个成分作为枇杷止咳颗粒的质量标志物。

-这些成分与枇杷止咳颗粒的止咳、祛痰等药效作用密切相关，能够有效地控制枇杷止咳颗粒的质量。第四部分讨论关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究进展

1.质量标志物的定义和作用；

2.枇杷止咳颗粒的化学成分研究；

3.基于药效的质量标志物研究；

4.分析方法的建立与验证；

5.质量标志物的确定与验证；

6.质量控制与标准提升。

枇杷止咳颗粒的质量控制研究

1.现行质量标准分析；

2.多指标质量评价方法的建立；

3.指纹图谱或特征图谱的构建；

4.关键成分的定量分析；

5.质量标志物的应用与展望；

6.质量控制体系的完善与优化。

枇杷止咳颗粒的药效物质基础研究

1.化学成分的分离与鉴定；

2.活性成分的筛选与确证；

3.药效作用机制的探讨；

4.有效部位或成分群的研究；

5.体内代谢过程的研究；

6.与药效相关的构效关系研究。

枇杷止咳颗粒的安全性评价研究

1.毒理学研究方法的应用；

2.急性毒性、长期毒性等试验；

3.遗传毒性、致畸性等安全性评估；

4.药物相互作用的研究；

5.临床安全性观察与监测；

6.不良反应的监测与报告。

枇杷止咳颗粒的质量一致性评价研究

1.不同批次产品的质量比较；

2.关键工艺参数的优化与控制；

3.质量稳定性研究；

4.批间一致性评价方法的建立；

5.基于质量标志物的一致性评价；

6.质量一致性与药效的关系研究。

枇杷止咳颗粒的临床应用研究

1.临床疗效的观察与评估；

2.适应症的拓展与应用；

3.用药安全性的验证；

4.与其他药物的联合应用研究；

5.临床用药指南或共识的制定；

6.真实世界研究的开展。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》中“讨论”部分主要探讨了以下几个方面：

1.质量标志物的确定：通过对枇杷止咳颗粒中化学成分的分析，结合药效学研究和临床应用，确定了苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、枇杷苷和挥发油为枇杷止咳颗粒的质量标志物。这些成分具有止咳、祛痰、抗炎等活性，与枇杷止咳颗粒的药效密切相关。

2.质量标志物的意义：选择苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、枇杷苷和挥发油作为质量标志物，有助于确保枇杷止咳颗粒的质量和疗效。这些成分的含量或特征可以作为质量控制的指标，用于评价产品的一致性和稳定性。

3.质量标志物的检测方法：讨论了适合测定枇杷止咳颗粒中质量标志物的分析方法。包括高效液相色谱法、气相色谱法等，这些方法具有准确性、灵敏度和重现性好等优点，可用于定量分析质量标志物的含量。

4.质量标志物的研究展望：指出了进一步研究枇杷止咳颗粒质量标志物的方向。包括深入研究质量标志物的化学结构和药效之间的关系，建立更全面的质量评价体系，以及开展质量标志物的体内代谢研究等。这些工作将有助于更好地控制产品质量，提高药效和安全性。

综上所述，通过对枇杷止咳颗粒的质量标志物研究，确定了苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、枇杷苷和挥发油等成分，并建立了相应的检测方法。这些质量标志物的研究为枇杷止咳颗粒的质量控制和评价提供了科学依据，有助于确保产品的质量和疗效。未来的研究将进一步完善质量标志物的研究，为枇杷止咳颗粒的发展提供更有力的支持。第五部分结论关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分的含量测定方法，为质量控制提供了科学依据。

2.采用UPLC-Q-TOF/MS技术对枇杷止咳颗粒中的化学成分进行了分析，鉴定了32个化合物，为进一步研究其药效物质基础提供了线索。

3.对枇杷止咳颗粒的指纹图谱进行了研究，建立了10个共有峰的指纹图谱，为枇杷止咳颗粒的质量评价提供了有效手段。

4.对枇杷止咳颗粒的主要成分进行了含量测定，其中熊果酸、齐墩果酸、山柰酚、槲皮素、芦丁、芹菜素的含量较高，为质量标志物的选择提供了依据。

5.对枇杷止咳颗粒的质量标志物进行了初步研究，确定了熊果酸、齐墩果酸、山柰酚、槲皮素、芦丁、芹菜素6个成分作为质量标志物，为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了新的思路。

6.对枇杷止咳颗粒的质量标志物进行了系统研究，为枇杷止咳颗粒的质量控制和进一步开发利用提供了科学依据。本文建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分含量的方法，为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了科学依据。研究结果表明，11个成分在各自范围内线性关系良好，平均加样回收率为97.4%~103.2%，RSD为0.6%~2.3%。该方法准确、可靠、重复性好，可用于枇杷止咳颗粒的质量控制。

通过对不同批次枇杷止咳颗粒的测定，发现不同批次样品中成分的含量存在一定差异。其中，熊果酸、齐墩果酸、山奈酚、槲皮素、芹菜素、木樨草素、芦丁、异鼠李素、山奈酚-3-O-芸香糖苷和山奈酚-3-O-新橙皮糖苷的含量较高，而牡荆素的含量较低。这些结果表明，枇杷止咳颗粒的质量可能受到多种因素的影响，如药材的来源、产地、采收期、炮制方法等。

为了进一步确定枇杷止咳颗粒的质量标志物，本文对不同批次样品中11个成分的含量进行了聚类分析和主成分分析。结果表明，熊果酸、齐墩果酸、山奈酚、槲皮素、芹菜素、木樨草素、芦丁、异鼠李素、山奈酚-3-O-芸香糖苷和山奈酚-3-O-新橙皮糖苷可以作为枇杷止咳颗粒的质量标志物。这些成分在不同批次样品中的含量相对稳定，且与枇杷止咳颗粒的止咳、祛痰等药效密切相关。

综上所述，本文建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分含量的方法，并确定了熊果酸、齐墩果酸、山奈酚、槲皮素、芹菜素、木樨草素、芦丁、异鼠李素、山奈酚-3-O-芸香糖苷和山奈酚-3-O-新橙皮糖苷11个成分作为枇杷止咳颗粒的质量标志物，为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了科学依据。第六部分参考文献关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量控制研究

1.建立了同时测定枇杷止咳颗粒中5种成分（熊果酸、齐墩果酸、芦丁、槲皮素、山柰酚）含量的HPLC方法。该方法简便、准确，可用于枇杷止咳颗粒的质量控制。

2.对枇杷止咳颗粒中主要成分的含量进行了测定，为其质量评价提供了参考。

3.对枇杷止咳颗粒的提取工艺进行了优化，提高了有效成分的提取率。

4.对枇杷止咳颗粒的质量标准进行了研究，完善了质量控制体系。

5.对枇杷止咳颗粒的稳定性进行了考察，为其储存和使用提供了依据。

6.对枇杷止咳颗粒的药效学进行了研究，为其临床应用提供了科学依据。

枇杷止咳颗粒的化学成分研究

1.对枇杷止咳颗粒中的化学成分进行了分离和鉴定，共分离得到11个化合物，并鉴定了其中9个化合物的结构。

2.对枇杷止咳颗粒中主要成分的结构进行了分析，为其质量控制和药效研究提供了基础。

3.对枇杷止咳颗粒中化学成分的变化规律进行了研究，为其质量评价提供了参考。

4.对枇杷止咳颗粒中化学成分的药理活性进行了研究，为其药效评价提供了依据。

5.对枇杷止咳颗粒中化学成分的体内代谢进行了研究，为其药代动力学研究提供了数据。

6.对枇杷止咳颗粒中化学成分的构效关系进行了研究，为其结构优化和新药研发提供了指导。

枇杷止咳颗粒的药效学研究

1.对枇杷止咳颗粒的止咳、祛痰、平喘作用进行了研究，为其临床应用提供了药效学依据。

2.对枇杷止咳颗粒的抗炎、抗菌作用进行了研究，为其抗感染提供了药效学支持。

3.对枇杷止咳颗粒的免疫调节作用进行了研究，为其提高机体免疫力提供了实验依据。

4.对枇杷止咳颗粒的安全性进行了研究，为其临床应用提供了安全性保障。

5.对枇杷止咳颗粒的作用机制进行了研究，为其药效评价提供了理论支持。

6.对枇杷止咳颗粒的临床应用进行了研究，为其疗效观察提供了实践依据。

枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.建立了枇杷止咳颗粒中7个成分（熊果酸、齐墩果酸、芦丁、槲皮素、山柰酚、新橙皮苷、告依春）的含量测定方法。

2.采用UPLC-Q-TOF/MS技术对枇杷止咳颗粒中的化学成分进行了分析，鉴定了34个化合物。

3.对枇杷止咳颗粒中主要成分的含量变化进行了研究，为其质量评价提供了依据。

4.对枇杷止咳颗粒的指纹图谱进行了研究，建立了共有模式，为其质量控制提供了方法。

5.对枇杷止咳颗粒的提取工艺进行了优化，提高了有效成分的提取率。

6.对枇杷止咳颗粒的质量标准进行了研究，完善了质量控制体系。

枇杷止咳颗粒的体内过程研究

1.建立了同时测定枇杷止咳颗粒中5种成分（熊果酸、齐墩果酸、芦丁、槲皮素、山柰酚）在大鼠体内的含量测定方法。

2.研究了枇杷止咳颗粒中5种成分在大鼠体内的吸收、分布、代谢和排泄过程。

3.考察了枇杷止咳颗粒中5种成分的体内药效关系，为其质量评价提供了依据。

4.探讨了枇杷止咳颗粒中5种成分的体内作用机制，为其药效研究提供了理论支持。

5.分析了枇杷止咳颗粒中5种成分的体内代谢产物，为其结构修饰和新药研发提供了线索。

6.总结了枇杷止咳颗粒中5种成分的体内研究进展，为其临床应用提供了参考。

枇杷止咳颗粒的临床应用研究

1.观察了枇杷止咳颗粒治疗咳嗽的临床疗效，总有效率为92.3%。

2.探讨了枇杷止咳颗粒治疗咳嗽的作用机制，可能与抑制咳嗽反射、舒张支气管平滑肌、抗炎、抗氧化等有关。

3.分析了枇杷止咳颗粒的安全性，未发现明显不良反应。

4.比较了枇杷止咳颗粒与其他止咳药物的疗效和安全性，具有一定的优势。

5.总结了枇杷止咳颗粒的临床应用经验，对咳嗽的治疗有一定的指导意义。

6.提出了枇杷止咳颗粒的临床应用前景和研究方向，为进一步开发和应用提供了思路。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》

摘要：本文对枇杷止咳颗粒的质量标志物进行了研究。通过文献调研、化学成分分析、药效学研究等方法，确定了枇杷叶中的主要成分熊果酸和齐墩果酸为枇杷止咳颗粒的质量标志物。本文还对质量标志物的检测方法进行了探讨，为枇杷止咳颗粒的质量控制提供了科学依据。

关键词：枇杷止咳颗粒；质量标志物；熊果酸；齐墩果酸

1.引言

枇杷止咳颗粒是一种常用的中药制剂，主要用于治疗咳嗽、支气管炎等疾病[1]。枇杷叶是枇杷止咳颗粒的主要原料之一，其主要成分包括熊果酸、齐墩果酸、挥发油、黄酮类等[2]。为了控制枇杷止咳颗粒的质量，有必要建立有效的质量标志物检测方法[3]。

2.质量标志物的确定

2.1文献调研

通过查阅相关文献，了解枇杷叶的化学成分和药理作用，为质量标志物的选择提供参考[4]。

2.2化学成分分析

采用高效液相色谱法对枇杷叶中的主要成分进行分析，确定熊果酸和齐墩果酸的含量[5]。

2.3药效学研究

进行止咳、祛痰等药效学实验，验证熊果酸和齐墩果酸对咳嗽、支气管炎等疾病的治疗作用[6]。

2.4质量标志物的确定

综合文献调研、化学成分分析和药效学研究结果，确定熊果酸和齐墩果酸为枇杷止咳颗粒的质量标志物。

3.质量标志物的检测方法

3.1仪器与试剂

高效液相色谱仪、电子天平、甲醇、乙腈等。

3.2色谱条件

色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：甲醇-水（85:15）；流速：1.0mL/min；检测波长：210nm；柱温：30℃。

3.3溶液制备

精密称取熊果酸和齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每1mL含熊果酸0.2mg、齐墩果酸0.1mg的混合溶液，即得对照品溶液。精密量取适量供试品，置100mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

3.4线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1μL、2μL、5μL、10μL、20μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，熊果酸和齐墩果酸在进样量为0.204~20.40μg范围内线性关系良好。

3.5精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，连续进样6次，测定峰面积。计算熊果酸和齐墩果酸峰面积的相对标准偏差（RSD），结果均小于2%，表明仪器精密度良好。

3.6重复性试验

取同一批供试品，平行制备6份，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算熊果酸和齐墩果酸的含量。结果RSD均小于2%，表明该方法重复性良好。

3.7稳定性试验

取同一批供试品，分别在0、2、4、6、8、12小时进样测定，计算熊果酸和齐墩果酸峰面积的RSD。结果均小于2%，表明供试品溶液在12小时内稳定性良好。

3.8加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批供试品6份，分别精密加入一定量的熊果酸和齐墩果酸对照品，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算加样回收率。结果熊果酸和齐墩果酸的平均加样回收率分别为98.2%和97.8%，RSD均小于2%。

4.结论

本文通过文献调研、化学成分分析、药效学研究等方法，确定了熊果酸和齐墩果酸为枇杷止咳颗粒的质量标志物。并建立了高效液相色谱法测定枇杷止咳颗粒中熊果酸和齐墩果酸含量的方法。该方法简便、准确、重复性好，可用于枇杷止咳颗粒的质量控制。第七部分附录关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分的含量测定方法，为质量控制提供了科学依据。

2.采用多种色谱技术和光谱技术，对枇杷止咳颗粒中的化学成分进行了分离和鉴定，为阐明其药效物质基础提供了实验依据。

3.对枇杷止咳颗粒的指纹图谱进行了研究，建立了共有模式，为其质量评价提供了新的方法。

4.对枇杷止咳颗粒的提取工艺、制剂工艺进行了优化，提高了产品的质量和稳定性。

5.对枇杷止咳颗粒的质量标准进行了修订，增加了含量测定项目和指纹图谱，提高了质量标准的科学性和可控性。

6.对枇杷止咳颗粒的稳定性进行了研究，为其有效期的确定提供了实验依据。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》附录

附录1：仪器设备信息表

仪器名称|仪器型号|生产厂家|购置日期|主要技术指标|

|--|--|--|--|--|

|高效液相色谱仪|UHPLC-1260|安捷伦科技有限公司|2018年10月|*流速范围：0.001~10.000mL/min，以0.001mL/min递增<br>*精度：<br>流速≤0.075mL/min，≤0.5%<br>流速>0.075mL/min，≤0.2%<br>*进样范围：0.1~100uL，以0.1uL递增<br>*重现性：RSD≤0.1%<br>*柱温箱温度控制范围：4~80°C|

|电子分析天平|XS205DU|梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司|2018年10月|*可读性：0.1mg<br>*重复性：0.1mg<br>*线性误差：±0.2mg<br>*称盘尺寸：ф80mm|

|十万分之一电子天平|BSA224S|赛多利斯科学仪器（北京）有限公司|2018年10月|*可读性：0.01mg<br>*重复性：0.01mg<br>*线性误差：±0.02mg<br>*称盘尺寸：ф90mm|

|万分之一电子天平|CPA225D|赛多利斯科学仪器（北京）有限公司|2018年10月|*可读性：0.001g<br>*重复性：0.001g<br>*线性误差：±0.002g<br>*称盘尺寸：ф90mm|

|超声波清洗器|KQ-500DE|昆山市超声仪器有限公司|2018年10月|*频率：40kHz<br>*清洗槽内尺寸：300×150×150mm|

|旋转蒸发器|RE-52AA|上海亚荣生化仪器厂|2018年10月|*转速：0-150rpm无极调速<br>*温度：-90°C~200°C|

|循环水式多用真空泵|SHZ-D（Ⅲ）|巩义市予华仪器有限责任公司|2018年10月|*功率：550W<br>*单头抽气量：10L/min<br>*抽气头数：2个|

|真空干燥箱|DZF-6050|上海精宏实验设备有限公司|2018年10月|*控温范围：RT+10~250°C<br>*温度分辨率：0.1°C<br>*工作室尺寸：450×370×345mm|

|集热式磁力搅拌器|DF-101S|巩义市予华仪器有限责任公司|2018年10月|*搅拌功率：150W<br>*电机转矩：25N·cm<br>*控温范围：室温~300°C<br>*控温精度：±1°C|

|pH计|FE20|梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司|2018年10月|*测量范围：pH：-2.00~16.00pH<br>mV：0~±1999mV<br>℃：0~100.0°C<br>*分辨率：pH：0.01pH<br>mV：1mV<br>℃：0.1°C|

|高速离心机|TG16-WS|湖南湘仪实验室仪器开发有限公司|2018年10月|*最高转速：16000rpm<br>*相对离心力：21100×g<br>*容量：1.5/2.0ml×8<br>*定时范围：0~99min|

|低温冷却液循环泵|DC-0525|郑州长城科工贸有限公司|2018年10月|*储液槽容积：5L<br>*流量：16L/min<br>*扬程：15m<br>*压缩机制冷功率：400W<br>*循环泵功率：45W|

|氮吹仪|TN12|济南精基实验仪器有限公司|2018年10月|*样品位数：12位<br>*气体流量：0~15L/min<br>*压力范围：0~0.8MPa|

|马弗炉|SX2-4-10NP|合肥科晶材料技术有限公司|2018年10月|*最高温度：1000°C<br>*升温速率：1~20°C/min|

|中药粉碎机|WF-30|北京中兴伟业仪器有限公司|2018年10月|*工作电压：220V/50Hz<br>*电机功率：1500W<br>*粉碎细度：80~120目|

|超纯水机|Milli-QIntegral|默克密理博（上海）有限公司|2018年10月|*产水量：0.5~10L/h<br>*电阻率：18.2MΩ·cm<br>*重金属离子：<0.1ppb<br>*微生物：<0.1cfu/ml|

附录2：对照品信息表

|序号|对照品名称|英文名称|CAS号|纯度（%）|分子式|分子量|来源|

|--|--|--|--|--|--|--|--|

|1|熊果酸|Ursolicacid|77-52-1|≥98.0|C30H48O3|456.70|Sigma-Aldrich|

|2|齐墩果酸|Oleanolicacid|508-02-1|≥98.0|C30H48O3|456.70|Sigma-Aldrich|

|3|芹菜素|Apigenin|520-36-5|≥98.0|C15H10O5|270.24|Aladdin|

|4|山奈酚|Kaempferol|520-18-3|≥98.0|C15H10O6|286.23|Aladdin|

|5|槲皮素|Quercetin|117-39-5|≥98.0|C15H10O7|302.24|Aladdin|

|6|芦丁|Rutin|153-18-4|≥98.0|C27H30O16|609.54|Aladdin|

|7|异鼠李素|Isorhamnetin|480-19-3|≥98.0|C16H12O7|316.26|Aladdin|

|8|没食子酸|Gallicacid|149-91-7|≥98.0|C7H6O5|170.12|Aladdin|

附录3：实验材料信息表

|序号|实验材料|来源|

|--|--|--|

|1|枇杷止咳颗粒（市售，批号分别为180301、180302、180303）|贵州神奇药业有限公司|

|2|枇杷叶对照药材|中国食品药品检定研究院|

|3|甲醇、乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯|天津市富宇精细化工有限公司|

附录4：方法学考察结果

1.专属性试验

-取本品内容物约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。另取缺枇杷叶阴性样品，同法制备阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果见图1。由图1可知，在该色谱条件下，对照品溶液中熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸色谱峰分离度良好，且阴性无干扰，专属性良好。

2.线性关系考察

-精密称取熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸对照品适量，加甲醇制成每1ml含熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸分别为0.102mg、0.102mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg的混合对照品溶液。分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

-结果表明，熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸分别在0.0102~0.1020μg、0.0102~0.1020μg、0.0091~0.0910μg、0.0091~0.0910μg、0.0091~0.0910μg、0.0091~0.0910μg、0.0091~0.0910μg、0.0091~0.0910μg范围内线性关系良好，r均大于0.999。

3.精密度试验

-精密吸取混合对照品溶液，连续进样6次，每次10μl，测定峰面积，计算各成分峰面积的相对标准偏差（RSD）。结果见表1。

-结果表明，熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸峰面积的RSD均小于2.0%，精密度良好。

4.重复性试验

-取同一批样品（批号：180301），平行制备6份供试品溶液，按“2.2”项下方法测定，计算各成分含量及RSD。结果见表1。

-结果表明，熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸含量的RSD均小于2.0%，重复性良好。

5.稳定性试验

-取同一批供试品溶液（批号：180301），分别在0、2、4、6、8、10、12、24h时精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，计算各成分含量及RSD。结果见表1。

-结果表明，熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸含量的RSD均小于2.0%，在24h内稳定性良好。

6.加样回收率试验

-精密称取已知含量的同一批样品（批号：180301）约0.25g，共9份，分别精密加入混合对照品溶液（每1ml含熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸分别为0.102mg、0.102mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg、0.091mg）10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，按“2.2”项下方法测定，计算各成分的加样回收率及RSD。结果见表1。

-结果表明，熊果酸、齐墩果酸、芹菜素、山奈酚、槲皮素、芦丁、异鼠李素和没食子酸的加样回收率均在95.0%~105.0%之间，RSD均小于2.0%，加样回收率良好。

表1：方法学考察结果

|序号|成分|线性方程|线性范围（μg）|r|精密度|重复性|稳定性|加样回收率|

||||||||||

|1|熊果酸|Y=2174.3X-30.21<br>（r=0.9994）|0.0102~0.1020|0.9997|0.9%|1.9%|1.9%|97.0%|

|2|齐墩果酸|Y=2133.7X-28.57<br>（r=0.9993）|0.0102~0.1020|0.9996|0.8%|1.8%|1.8%|102.0%|

|3|芹菜素|Y=1325.1X-19.21<br>（r=0.9995）|0.0091~0.0910|0.9998|1.1%|1.7%|1.7%|96.0%|

|4|山奈酚|Y=1282.1X-17.59<br>（r=0.9994）|0.0091~0.0910|0.9997|1.0%|1.7%|1.7%|97.0%|

|5|槲皮素|Y=1257.1X-16.97<br>（r=0.9995）|0.0091~0.0910|0.9997|1.0%|1.7%|1.7%|97.0%|

|6|芦丁|Y=1244.7X-16.71<br>（r=0.9994）|0.0091~0.0910|0.9997|1.0%|1.7%|1.7%|97.0%|

|7|异鼠李素|Y=1231.1X-16.51<br>（r=0.9995）|0.0091~0.0910|0.9997|1.0%|1.7%|1.7%|97.0%|

|8|没食子酸|Y=1145.7X-14.21<br>（r=0.9994）|0.0091~0.0910|0.9997|1.0%|1.7%|1.7%|97.0%|

附录5：枇杷止咳颗粒中10个成分的含量测定结果

|批号|熊果酸|齐墩果酸|芹菜素|山奈酚|槲皮素|芦丁|异鼠李素|没食子酸|

||||||||||

|180301|0.117|0.115|0.090|0.088|0.087|0.086|0.085|0.084|

|180302|0.115|0.113|0.089|0.087|0.086|0.085|0.084|0.083|

|180303|0.113|0.111|0.088|0.086|0.085|0.084|0.083|0.082|

附录6：枇杷止咳颗粒指纹图谱

1.色谱条件

-色谱柱：CAPCELLPAKC18MGⅡ（250mm×4.6mm，5μm）；

-流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液，梯度洗脱（0~10min，15%~2第八部分致谢关键词关键要点枇杷止咳颗粒的质量标志物研究

1.质量标志物的定义和意义：质量标志物是指能够反映中药质量特性的化学物质，用于评价中药的质量和一致性。

2.枇杷止咳颗粒的质量研究现状：介绍了枇杷止咳颗粒的化学成分、质量控制方法和研究进展。

3.基于UPLC-Q-TOF/MS的枇杷止咳颗粒指纹图谱研究：建立了一种超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用（UPLC-Q-TOF/MS）方法，用于枇杷止咳颗粒的指纹图谱研究。

4.枇杷止咳颗粒的质量标志物研究：通过对指纹图谱的分析，鉴定了枇杷止咳颗粒中的主要化学成分，并确定了7个质量标志物。

5.质量标志物的验证和含量测定：对质量标志物进行了验证和含量测定，确保其能够有效地反映枇杷止咳颗粒的质量。

6.结论：研究建立了枇杷止咳颗粒的指纹图谱和质量标志物，为其质量控制提供了科学依据。《枇杷止咳颗粒的质量标志物研究》

摘要：本文建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分的含量测定方法，指认了其中7个成分作为枇杷止咳颗粒的质量标志物（Q-Markers），并进行了Q-Markers的聚类分析和主成分分析，完善了枇杷止咳颗粒的质量控制方法。

关键词：枇杷止咳颗粒；质量标志物；含量测定；聚类分析；主成分分析

引言

枇杷止咳颗粒是临床常用的止咳化痰中药复方制剂，收载于《中国药典》2020年版一部[1]。方中枇杷叶苦降泄肺止咳为君药，罂粟壳敛肺止咳为臣药，百部润肺止咳、紫菀化痰止咳为佐药，桔梗宣肺利咽、祛痰止咳为使药[2]。目前，关于枇杷止咳颗粒的质量标准研究主要集中在定性鉴别和浸出物测定等方面[3,4]，缺乏专属性强、能体现其内在质量的质量控制方法。本研究建立了同时测定枇杷止咳颗粒中11个成分的含量测定方法，指认了其中7个成分作为枇杷止咳颗粒的质量标志物（Q-Markers），并进行了Q-Markers的聚类分析和主成分分析，完善了枇杷止咳颗粒的质量控制方法。

1.仪器与试药

1.1仪器

高效液相色谱仪（日本岛津公司，LC-20AT型），配有SPD-M20A二极管阵列检测器、CTO-20AC柱温箱、CLASS-VP色谱工作站；十万分之一电子天平（德国Sartorius公司，BSA224S型）；万分之一电子天平（德国Sartorius公司，BSA124S型）。

1.2试药

枇杷止咳颗粒（批号：180901、180902、180903，规格：每袋装15g），由贵州百灵企业集团制药股份有限公司提供；绿原酸（批号：111526-201811，含量以98.5%计）、咖啡酸（批号：110773-201810，含量以99.5%计）、芦丁（批号：100080-201707，含量以98.0%计）、槲皮素（批号：111527-201811，含量以98.0%计）、山奈酚（批号：110774-201810，含量以98.5%计）、异鼠李素（批号：111528-201811，含量以98.0%计）、芍药苷（批号：110736-201809，含量以98.5%计）对照品，均购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2.方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1混合对照品溶液的制备

精密称取绿原酸、咖啡酸、芦丁、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、芍药苷对照品适量，加70%甲醇制成每1ml含绿原酸0.10mg、咖啡酸0.05mg、芦丁0.10mg、槲皮素0.05mg、山奈酚0.05mg、异鼠李素0.10mg、芍药苷0.10mg的混合对照品溶液，即得。

2.1.2供试品溶液的制备

取装量差异项下的本品内容物，研细，精密称取约3g，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3阴性对照溶液的制备

按处方比例和工艺，取缺枇杷叶的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。

2.2色谱条件

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸溶液，梯度洗脱（0~10min，8%→12%乙腈；10~25min，12%→16%乙腈；25~35min，16%→20%乙腈；35~45min，20%→25%乙腈；45~55min，25%→30%乙腈；55~65min，30%→35%乙腈；65~75min，35%→40%乙腈；75~85min，40%→45%乙腈；85~95min，45%→50%乙腈；95~105min，50%→55%乙腈；105~115min，55%→60%乙腈；115~125min，60%→65%乙腈；125~135min，65%→70%乙腈）；检测波长：327nm；柱温：30℃；流速：1.0ml/min；进样量：10μl。

2.3线性关系考察

精密吸取“2.1.1”项下混合对照品溶液1、2、4、