DB51T 2913-2022 大口黑鲈诺卡氏菌病诊断和防治技术规程

DB51SpecificationfordiagnosisandcontrolofPathogenNocardiosisfromMicropterusI 2 2 2 2 2 4 5 5 6 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件主要起草人：李成伟、耿毅、王均、贺扬、吴宏伟、刘海燕、王振华、李建臻、黎1大口黑鲈诺卡氏菌病诊断和防治技术规程本文件规定了大口黑鲈（Micropterussalmoides）养殖过程中发生的诺卡氏菌病的流行情况、发GB/T6682分析实验室用水规格和试验GB/T14926.43实验动物细GB/T27623.1渔用抗菌药物药效试验DB51/T526大口黑鲈养殖技术规范指由鰤诺卡氏菌（Nocardiaseri4试剂和材料4.1水4.2试剂与培养基革兰氏染液配制按照GB/T14926.43中1%琼脂糖凝胶、七叶苷培养基、明胶培养基等相关配方见附录A，细菌基因组DNA提取试剂盒、PCR纯化24.4特异性鉴定引物特异性鉴定上游引物N5F1：5′-TGAGCCTGAACTGCATGGTTC-3′，下游引物N5R1：5′超净工作台、光学显微镜、PCR仪、电泳仪、离心机、生化培养箱、恒温摇床培养箱、常规细菌接水温15～32℃时都可流行，我省在每年4月底开始大规模爆发，直至10月均有该病流行，25~利用接种环，划线接种至BHI固体培养基，28℃恒温培养箱培养7～12d，从形态一致的优势菌群中挑取9细菌的鉴定9.1形态学鉴定9.1.1菌落形态9.1.2细菌形态3革兰氏染色法染色观察，参照GB/T14926.43中的9.2生化特性鉴定9.2.1氧化酶试验9.2.2尿素酶试验9.2.3硝酸盐还原试验9.2.4过氧化氢酶试验9.2.5柠檬酸盐试验9.2.6七叶苷水解试验9.2.7明胶液化试验9.2.8淀粉水解试验按SC/T7014中的规定执行，呈蓝色者为阴性，无DNA提取采用商品化的细菌基因组DNA提取试剂盒，按说明书操9.3.3琼脂糖凝胶电泳用1×TAE电泳缓冲液配制1%的琼脂糖凝胶（含0.5μL/mLEB）平板，凝固后放入水平电泳槽，使泳缓冲液刚好淹没胶面。将上述扩增产物6μL样品加入样品孔，使用DNA分子量标准参照物作对照。120V49.3.5测序与同源性分析9.4特异性检测9.4.1特异性基因扩增延伸1.5min，循环扩增30次；72℃终延9.4.2序列检测++ +5符合以下a）b）c）三条特征的基础上，d）或者e）特征出现任意一条者判定为大口黑鲈诺卡氏菌b)所分离病原菌菌落与菌体形态分别与“10.1”和“10.2”相符；放苗前做好清塘工作，使用无诺卡氏菌污染的水源和水系统，养殖用水符合NY5051中的规定；购入的大口黑鲈苗种经检验检疫合格，不含诺卡氏菌病原；做好投饲及日常管理工作，参照DB51/T526外用聚维酮碘或戊二醛溶液等渔用消毒药物全池泼洒，药物使用应符合SC/T16在400mL双蒸水中溶解121gTris碱，加入28.55mL冰乙酸和50mL0.5mol/LEDTA。再加A.4七叶苷培养基胰蛋白胨5.0g，磷酸二氢钾1.0g，七叶苷3.0g，柠檬酸铁铵0.5g，混匀，加热搅拌溶解，调节pH值为7.4±0.2，定容至1000ml，121℃高压71ttaacacatgcaagtcgagcggtaag61taacacgtgggtgatctgccttgcactctg121ggatatgagcctgaact181gcggcctatcagcttgttggtgaggtaa241tgagagggcgaccggccacactgggactgagacacggccc301agtggggaatattgcacaatgggcgaaagcctgatgca361ggccttcgggttgtaaacctcttt421agaagcaccggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgt481cggaatgactgggcgtaaagagcttgtaggcggtctgtcacg541agctcaactgtgggcctgcggtcgatacgggcagacta601attcctggtgtagcggtgaaatgcgcagatatcaggagga661tctctgggaagtaactgacgctgagaagcgaaagcgtggg721cctggtagtccacgccgtaaacggtgggtactaggtgtgg781tgccgtagctaacgcattaagtaccccgcctggggag841aaggaattgacgggggcccgcacaagcggcggagcatgtggat901aagaaccttacctgggtttgacatacaccggaaagccgta961ggtcggtgtacaggtggtgcatggct1021tcccgcaacgagcgca1081gagactgccggggtcaactcggagg11