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文档简介

4T/CITSXXXXX.X—2024软琼脂克隆形成试验2规范性引用文件3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1人间充质干细胞humanmesenchymalstemcell，hMSC3.2完全培养基completemedium4符号和缩略语下列缩略语适用于本文。FBS：胎牛血清（Fetalbovineserum）MEM：最小必需培养基（MinimumEssentialMedium）NEAA：非必需氨基酸（Non-essentialaminoacid）MSC：间充质干细胞（Mesenchymalstemcell）5实验环境6仪器与耗材5T/CITSXXXXX.X—20246.1二级生物安全柜。6.2荧光细胞计数仪。6.3低速离心机。6.4分析天平。6.5纯水仪。6.6高压灭菌锅。6.7水浴锅。6.8CO2培养箱。6.9微量移液器：10μl、100μl、200μl、1000μl。6.10倒置显微镜及成像系统。6.112℃~8℃医用冷藏冰箱。6.12药匙、称量纸、量筒、三角瓶。6.13无菌吸头：10μl、100μl、200μl、1000μl。6.14无菌移液管：5ml、10ml、25ml。6.15无菌离心管：1.5ml、15ml、50ml。6.16细胞计数板6.17无菌六孔板。7试剂7.1低熔点琼脂糖。7.2MSC细胞培养基。7.3MEM培养基。7.4FBS。7.5MEMNEAA。7.6丙酮酸钠。7.7谷氨酰胺。7.8AO/PI染液。8实验用细胞8.1阴性对照用细胞6T/CITSXXXXX.X—2024推荐使用MRC-5细胞系。来源于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，保存取用按照说明书执行。8.2阳性对照用细胞推荐使用HeLa细胞系，或经验证过的永生化细胞。来源于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，保存取用按照说明书执行。8.3待检细胞hMSC。9实验分组表1实验分组设计表33333无无10操作步骤10.1溶液配制10.1.15%琼脂糖（以10ml为例）：用分析天平称量0.5g低熔点琼脂糖干粉，加入10ml超纯水，混匀，121℃灭菌15min。灭菌完成后，热水浴保持琼脂糖溶液不凝固。10.1.2MEM完全培养基（以100ml为例无菌条件下按照表2配制，混匀后置于37℃备用。表2MEM完全培养基成分表7T/CITSXXXXX.X—202410.2细胞处理10.2.3.1阴性对照组：MRC-5，10.2.3.2阳性对照组：HeLa，用MEM完全培养基调整活细胞浓度至1×103cells/ml。10.3铺板及细胞接种（每组）自然冷却至凝固，或密封后置于2℃~8℃冰箱保存备用。10.4培养平板置于37℃、5%CO2培养箱中培养21d。

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