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文档简介

精子畸形试验原理精子畸形是指精子形状改变,导致畸形精子数量增多。(妇女自发流产与丈夫精子数目减少或畸形精子数量增多与有关。)精子畸形是环境理化因素对精原细胞遗传物质损伤的结果。小鼠精子畸形实验是一种检测环境理化因素对雄性生殖细胞遗传损伤的遗传毒理学方法。试剂和材料(1)实验动物一般采用杂交雄性小鼠,鼠龄8-10周。

(2)试剂生理盐水、甲醇(化学纯)、伊红染色液、环磷酰胺(30mg/kg或甲基磺酸甲醋(50mg/kg)或丝裂霉素C(l.0mg/kg)。

步骤(1)给药方法

按各种受试物实际侵入途径,选择适当的给药途径,可1次(急性)或连续5次(亚急性)给药。步骤(2)颈椎脱臼法处死小鼠,剪开腹腔,取出睾丸分离出双侧附睾,放入盛有4mL生理盐水的小平皿中,用眼科剪剪碎组织。(3)将悬液通过四层擦镜纸滤入离心管中。(4)滤液以1000r/min离心5min。

步骤(5)吸去上清液,视沉淀物多少,加入适量的生理盐水,混匀后,涂片。(6)空气干燥后,用甲醇固定5min,干后用2%伊红水溶液染色40min,冲洗,吹干后镜检。步骤(7)镜检,在低倍镜下找到背景清晰、精子重叠较少的部位,用高倍镜按顺序检查精子的形态。每只动物检查完整的精子1000个。精子畸形主要表现在头部,畸形的类型可分为无钩、香蕉形、无定形、胖头、双头以及双尾等。无尾精子、头部重叠的或精子整个与另一个重叠的均不计数。分别记录各种类型畸形的精子,进行精子畸形类

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