雌、孕激素受体在肝内外胆管癌中的表达

雌、孕激素受体（ER、PR）在肝内、外胆管癌中的表达

研究背景及目的胆管癌是一种恶性程度很高，预后不良的胆道系统恶性上皮性肿瘤，它对常规治疗的反应性很差。近年来，它的发病率在东南亚地区，尤其是日本和我国以每年递增5%的速度上升。众所周知，三苯氧胺是人工合成的非甾体类选择性雌激素受体调节剂。它对乳腺癌的治疗作用已经得到了广泛共识。三苯氧胺的主要作用机制是与靶细胞的雌激素受体发生竞争性结合，直接封闭雌激素受体，阻止雌激素和受体结合，从而阻断信号传导、核酸合成及细胞增殖。人类正常的胆管细胞不表达ER,但在发生胆管炎、多囊性肝病时,胆管细胞可表达ER-α及ER-β,雌激素可促进胆管细胞的增殖国外有研究显示在肝内胆管癌组织和胆管癌细胞系HuH-28均表达ER-α和ER-β两种ERSampson等采用RT-PCR技术在胆管癌细胞株SK-ChA-1检测到ERmRNA的存在，也用免疫共沉淀技术证明了ER蛋白的存在Alvaro等使用免疫组织化学方法检测了18例肝内胆管癌标本，结果显示全部标本均有ERα表达。Nash等报告肝内低分化胆管癌可表达PR国内有研究报道称临床胆管癌组织中有ER的表达,其表达阳性率在40%-50%,明显比癌旁组织高,其ER的高表达与胆管癌的恶性程度和预后有关,提示胆管癌可能是一种性激素依赖性肿瘤复习相关文献后发现的主要问题现有研究阳性结果判断方法为细胞浆或/和细胞核着色为阳性着色。文献中采用的免疫组织化学方法多不能避免内源性生物素的干扰，很容易将胞浆非特异性着色判定为阳性表达。阳性界值的选择：部分研究选择的阳性界值有1%、10%以及25%，部分未明确说明其界值根据2010年美国临床肿瘤学会（ASCO）/美国病理医师学院（CAP）发布的ER和PR免疫组织化学检测指南，ER和PR的肯定阳性定位应在细胞核，出现其他着色都应判断为非特异性着色，不能够作为指导临床诊治的依据。ER、PR在肝内胆管癌中阳性率不一致；在肝外胆管癌中表达报道较少研究目的本研究应用免疫组织化学方法检测肝内、外胆管癌标本内分泌治疗靶点ER和PR的表达水平，为今后胆管癌内分泌治疗研究和应用提供参考依据。研究方案收集滨州市人民医院病理科2006~2011年诊断（含会诊）的全部胆管癌病例58例对所有病例进行免疫组织化学染色

第一抗体ER（克隆号SP1）和PR（克隆号SP2）、第二抗体MaxvisionTM试剂均为即用型抗体，购自福州迈新生物技术有限公司。采用MaxVisionTM法进行免疫组织化学染色，DAB显色结果判定：ER和PR阳性定位于细胞核，呈棕黄色或棕褐色颗粒。细胞浆及细胞膜着色均判定为非特异性染色。由两位病理医师分别在高倍镜下随机计数500个细胞，记录阳性细胞比例并取平均值记录结果。根据美国临床肿瘤学会（ASCO）/美国病理医师学院（CAP）发布的ER和PR免疫组织化学检测指南，以阳性细胞比例1%为阳性界值：＜1%为阴性（-），≥1%阳性（+）。统计学方法：采用SPSS13.0统计软件处理数据，组间阳性率比较以Fisher确切概率法进行统计，以P＜0.05为差异有统计学意义结

果肝内胆管癌肝内胆管癌(24例)中ER和PR的表达ER阳性表达7例（29%）

高分化组3例（3/9,33%）

中分化组3例（3/11,27%）

低分化组1例（1/4,25%）PR阳性表达11例（46%）

高分化组2例（2/9，22%）

中分化组7例（7/11,64%）

低分化组2例（2/4,50%）不同组织学级别之间的ER和PR表达率均无统计学意义（P＞0.05）。

ERERERERPRPR肝外胆管癌肝外胆管癌中ER和PR的表达ER和PR在34例肝外胆管癌标本中均呈完全阴性表达。PR在肿瘤标本组织中附带有的胰腺组织中呈小导管细胞核阳性表达。阳性对照：10例子宫内膜及肌层标本均呈弥漫核阳性表达。ERPRPR讨论雌激素受体（estrogenreceptor,ER）、孕激素受体（progesteronereceptor,PR）是乳腺癌的治疗靶点，应用三苯氧胺治疗ER和PR阳性的乳腺癌患者取得了很好的效果。ER/PR阳性肿瘤反应率为60%～70%，而ER/PR阴性肿瘤则小于10%。内分泌治疗具有毒、副反应小，费用较低，患者生存质量较高的特点。Sampson等发现三苯氧胺可以拮抗17β-E2诱导胆管癌细胞的生长,因此,他们提出TAM展现出这种抗胆管癌作用可能是通过ER途径介导的。国内厦门大学韩鹏博士所做研究显示三苯氧胺能抑制雌激素及其受体的相互作用过程中起着关键的调控作用的热休克蛋白HSP90的表达，干预了胆管癌细胞的增殖并诱导了胆管癌细胞的凋亡。三苯氧胺抗胆管癌的作用机制：可能通过ER途径介导Nash等报道肝内转移的胃低分化腺癌有PR表达PR对肝内胆管癌中ER和PR表达的研究国内外均有报道，阳性率不一致。Nash等报道肝内胆管癌不表达ER，但在低分化肝内胆管癌中PR表达率50%。Sampson等虽然通过免疫组化的方法没有检测到胆管癌细胞系中存在ER蛋白，但通过免疫沉淀反应成功地证实了ER在胆管癌细胞系中存在。Alvaro等报道的肝内胆管癌ER阳性表达率100%。国外尚未检索到肝外胆管癌的相关报道雷元卫等采用免疫组织化学ABC法检测了30例肝外胆管癌标本，发现ER和PR的阳性表达率分别为56.7%和50%。问题是他们的判定标准为细胞浆和细胞核着色均为阳性着色。本研究发现肝内胆管癌ER的阳性率为29%，PR阳性率为49%。ER和PR在肝外胆管癌中呈完全阴性表达，与肝内胆管癌中ER和PR的较高表达率形成鲜明对比。以上结果，尤其是肝外胆管癌的结果与文献报道有显著差异。差异的原因可能是免疫组化检测系统和结果判定方法的不同所致。英国国家免疫组织化学外部质量评估方案（NEQAS）对实验室检测敏感性的研究31%36%29%4%JClinPathol2000;53:125–130200参与实验室同一个阳性细胞比例>10%肿瘤组织本文所采用的免疫组织化学方法MaxVision法原理：抗原抗体反应结合后，第二抗体上的多聚物酶复合物与第一抗体结合，二抗上的多聚物可结合许多的HRP分子，使敏感性较PAP法、ABC法和LSAB法高出几十倍，因多聚物葡聚糖是人体内不存在，无非特异性背景干扰。本研究中使用的抗体ER（克隆号SP1）和PR（克隆号SP2）均为兔单抗，敏感性较之前研究使用的鼠单抗明显提高。免疫组化染色过程中很重要的一步是抗原修复。作者以往研究显示乳腺癌中ER和PR最为敏感的抗原修复液是PH9.0Tris-EDTA，尤其对于激素受体低表达的肿瘤。本研究使用的抗原修复方法为PH9.0Tris-EDTA高压锅热修复3min。本研究采用的ER和PR判定标准为2010年ASCO/CAP发布ER和PR免疫组织化学检测指南：以阳性细胞比例1%为阳性界值：＜1%为阴性（-），≥1%阳性（+）。这一标准充分考虑到了三苯氧胺的治疗效果和相对很低的毒副作用。综上，本研究结果具有方法学的敏感性和结果解释的临床相关性。ER、PR在肝内、外胆管癌中表达情况的显著差异，提示ER途径主要在肝内胆管癌中产生作用，在肝外胆管癌中效应不明显。肝内、外胆管癌的发生发展具有不同的机制Mancino等的研究表明肝内胆管癌中VEGF-A、VEGF-C及其受体VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3均呈强阳性表达，但在Tang等的结果显示人的肝外胆管癌标本中，未能发现VEGFR的高表达。这一点或可为ER和PR在肝内、外胆管癌发生发展过程作用程度不同的提供辅证，因为雌激素可以诱导雌激素敏感肿瘤的新生血管形成，而VEGF在此过程中起到了重要作用。结论ER和PR在肝内、外胆管癌中的表达水平明显不同，仅表达于肝内胆管癌，可能参与了肝内胆管癌的发生过程，作为