第二章天然药物化学成分的提取分离方法第三节色谱分离法讲解

第二章天然药物化学成分的提取分离方法

第三节色谱分离法课前回顾1.采用乙醇沉淀法除去水提取液中多糖等杂质，应使乙醇浓度达到（

）A50%以上B60%以上C70%以上D80%以上2.在醇提取浓缩液中加入水，可沉淀（

）A树胶B蛋白质C树脂D鞣质3.提取化学成分常用的方法是（

）A溶剂法B蒸馏法C升华法D分馏法教学目的和要求1、掌握各种色谱法的基本原理2、熟悉影响各种色谱法的因素3、了解各种色谱的分离条件第三节色谱分离法一、色谱法的分类：色谱法根据分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、凝胶色谱与离子交换色谱等；根据分离方法又可分为：薄层色谱法、柱色谱法、纸色谱法、高效液相色谱法和气相色谱法等根据物质吸附力差别可将吸附色谱分为以下几类：物理吸附：无选择性，吸附与解吸可逆，如硅胶、氧化铝2.化学吸附：有选择性，吸附牢固3.半化学吸附：介于上述二者之间，

如聚酰胺（一）、吸附色谱1、物理吸附：（1）基本规律：“相似者易于吸附”（2）基本特点：无选择性、可逆吸附、快速（3）吸附力三要素：溶质极性；溶剂极性

吸附剂活性（4）吸附过程：

吸附再吸附解吸再解吸直至分离2、吸附剂：

（1）硅胶：弱酸性极性吸附剂；具有硅醇基，可形成氢键吸附；活性随含水量增大而降低（活化105℃30min）。适用于中性或弱酸性成分分离。

（2）氧化铝吸附力较强的极性吸附剂，可分为：碱性氧化铝：生物碱、甾体类中性氧化铝：萜类、皂苷、醛酮酸性氧化铝：有机酸、氨基酸（3）活性炭吸附力较强的非极性吸附剂。3、半化学吸附：聚酰胺（氢键缔合）（1）、影响因素：a、溶质的影响b、溶剂的影响洗脱能力：水<甲醇<丙酮<氢氧化钠水溶液<甲酰胺<二甲基酰胺<尿素水溶液4、化学吸附

（1）基本特点：有选择性、不可逆吸附（2）基本原理：产生化学反应

1)酸性物质与Al2O3发生化学反应

2)碱性物质与硅胶发生化学反应

3)Al2O3容易发生结构的异构化（3）应尽量避免（二）、分配色谱

1、原理：利用物质在固定相和流动相之间分配系数不同而达到分离。被分离物质两相溶剂中相对作逆流移动。载体主要有：硅胶、硅藻土、纤维素粉等。正相反相分类依据固定相极性大于流动相固定相极性小于流动相固定相水、缓冲溶液氰基键合相氨基键合相液状石蜡C18键合相C8键合相流动相氯仿、乙酸乙酯、丁醇水、甲醇适用范围水溶性或极性较大的成分脂溶性成分常用色谱硅胶、纸色谱RP-2、RP-8、RP-18洗脱顺序极性小的先洗脱极性大的先洗脱（三）、离子交换色谱根据物质解离程度不同进行分离1、基本原理：利用酸、碱化合物在解离状态时与阴、阳离子树脂产生离子交换的原理达到分离的方法。2、三要素：固定相(离子交换树脂)、溶质(被分离物)、洗脱剂3、分离物质范围：酸、碱类化合物

中药碱性成分用阳离子交换树脂；酚、酸性成分用阴离子交换树脂，将交换后的树脂通过调整酸碱使吸附物游离，选择适当溶剂将吸附物溶解出即可。OH-阴离子交换树脂Cl-阴离子交换树脂NaCl强碱性（-N+(CH3)3Cl-）弱碱性（-NH2,-NH-）强酸性（-SO3-H+）弱酸性（-COOH）H+阳离子交换树脂Na+阳离子交换树脂（四）、大孔吸附树脂1、结构与组成：

大孔吸附树脂为白色或淡黄色球形颗粒状，粒度多为20~60目。组成为苯乙烯，二乙烯苯，或а-甲基丙烯酸酯型。其中苯乙烯，二乙烯苯型为非极性树脂，2-甲基丙烯酸酯型为中极性树脂。

2、特性：（1）、理化性质稳定，不溶于酸、

碱及有机溶剂。（2）、对有机物选择性较好。（3）、吸附速度快。

（4）、再生处理方便。

3、吸附原理：（1）、吸附性：大孔吸附树脂本身具有吸附性，是由范德华力或氢键吸附的结果。（2）、筛性原理：是由大孔吸附树脂本身的多孔性所决定的。

4、影响大孔吸附树脂分离效果的因素：（1）、化合物分子极性大小：一般来说，大孔树脂的色谱行为具有反相的性质。被分离物质的极性大先流出色谱柱。（2）、分子体积大小：在一定条件下，化合物体积越大，吸附力越强。

预处理95%EtOH浸泡→湿法装柱→95%EtOH洗脱→水洗至无醇味上样湿法上样洗脱水/酸碱液/低浓度醇除杂质→依据吸附力选择洗脱液再生5%NaOH浸泡→洗至中性→5%HCl浸泡→洗至中性丙酮浸泡/回流5、大孔吸附树脂的使用流程（五）、凝胶色谱法

凝胶色谱法又称分子排阻色谱法、凝胶滤过色谱法、分子筛色谱法等。是一种以凝胶为固定相分离分子大小不同成分的色谱方法。具有设备简单，操作方便，结果准确，凝胶可反复使用等优点，成为天然药物化学和生物化学研究中的常规分离分析方法。

课堂论述题：简述大孔吸附树脂的吸附原理？

小结吸附原理吸附性应用硅胶物理吸附化学吸附——碱性化合物极性吸附剂各类成分氧化铝化学吸附——酸性化合物碱性或中性亲脂性成分活性炭非极性吸附剂水溶性成分聚酰胺半化学吸附氢键酚、醌测评1．吸附色谱常用的吸