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文档简介

2025年免疫细胞冻存标准协议一、引言免疫细胞冻存技术是生物医学领域的重要组成部分，为确保免疫细胞冻存质量，规范操作流程，特制定本标准协议。本协议旨在为相关研究人员和实验室提供统一的操作规范，确保冻存免疫细胞的活性、纯度和功能。二、冻存目的与原则1.冻存目的：为保存免疫细胞，以便后续实验研究使用，确保免疫细胞的活性、纯度和功能。2.冻存原则：保持细胞活性：冻存过程中，需确保细胞活性不受影响。保持细胞纯度：冻存过程中，需避免细胞污染。保持细胞功能：冻存过程中，需确保细胞功能不受影响。三、冻存材料与设备1.材料：免疫细胞：采集自____年____月____日的患者或志愿者。冻存液：含有____%的DMSO（二甲基亚砜）和____%的胎牛血清。玻璃试管：无菌、干净、无杂质。2.设备：程序冷冻器：用于控制冻存过程中温度的变化。移液器：用于准确移取细胞和冻存液。冰箱：用于存放冻存管。恒温水浴箱：用于解冻细胞。四、冻存操作流程1.细胞制备：将采集的免疫细胞进行洗涤、离心，去除杂质。2.配制冻存液：按照比例配制含有DMSO和胎牛血清的冻存液。3.细胞冻存：将制备好的细胞悬液与冻存液混合，充分混匀。将混合液分装至玻璃试管中，每管____mL。将装有细胞的玻璃试管放入程序冷冻器中，设置冻存程序（如：-1℃/min降至-80℃，保持____小时，再降至-196℃）。4.冻存管标记：在冻存管上标注样本信息（如：患者姓名、冻存日期、冻存液种类等）。5.冻存管存放：将冻存管放入冰箱中，按编号顺序存放。五、冻存细胞质量控制1.检测细胞活性：冻存前后，采用台盼蓝染色法检测细胞活性。2.检测细胞纯度：冻存前后，采用流式细胞仪检测细胞纯度。3.检测细胞功能：冻存前后，采用相应的实验方法检测细胞功能。六、冻存细胞解冻与复苏1.解冻：将冻存管从冰箱中取出，放入恒温水浴箱中，设置温度为____℃，待冻存管内液体完全融化。2.复苏：将解冻后的细胞悬液移至离心管中，加入适量复苏液（如：含____%胎牛血清的培养基），轻轻吹打混匀。3.细胞培养：将复苏后的细胞移至培养瓶中，按常规方法进行培养。七、冻存细胞使用与保存1.使用：冻存细胞在实验中使用时，需按照实验需求进行复苏、培养和检测。2.保存：冻存细胞在实验结束后，如有剩余，需重新冻存，继续存放于冰箱中。八、冻存细胞安全与环保1.操作过程中，严格遵守实验室安全规定，确保人员安全。2.遵循环保原则，妥善处理冻存液、玻璃试管等废弃物品。九、附则1.本协议由实验室负责人负责解释和修订。2.本协议自发布之日起实施。3.如有未尽事宜，可根据实际

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