茄子黄萎病苗期人工接种鉴定技术规程

1DBXX/XXXXX—本标准规定了茄子品种抗黄萎病苗期人工接种鉴定方法的术语和定义、鉴定方法、及其抗病性评价标准。抗性评价分级及鉴定结果有效性判断。本标准适用于茄子品种苗期对黄萎病人工接种抗性鉴定和评价。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改条款（不包括勘误的内容）或修改版均不适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本均适用于本标准。本标准中种子质量符合下列标准原则。GB16715.2-2010瓜菜类作物种子，茄子类。3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1人工接种(artificialinoculation)采用人工方法将病原物直接或间接接种到寄主植物的种子或根部，使其发病，并依据相关的抗性评价标准，来区分品种的抗病性。3.2对照品种(controlvariety)为了保证抗性鉴定结果的准确性、可靠性，减少年度间和环境条件差异，选择抗性水平较稳定的品种作为抗性鉴定试验的对照品种。4鉴定方法4.1育苗基质以进口丹麦的品氏托普泥炭（粒径0-6mm）或其他生产厂家生产的质优泥炭为育苗基质。将基质取出捣碎，加入20g蔬菜复合肥与适量的清水混配均匀，调节基质含水量至60%。4.2基质装盘播种灌根法和伤根灌根法使用底部有孔的塑料育秧盘（规格：54cm×6cm×6cm-3cm×3cm，32孔）播种、培育茄苗。将制备好的基质置入塑料秧盘中，基质量以装平秧盘为准。秧盘中每孔穴播茄子种子2-3粒，每个品种播种1盘，即32孔穴。4.3对照品种以“H051”栽培茄或其他易感黄萎病的茄子品种为人工接种抗病性鉴定的感病对照品种，以每批次的对照品种的抗性鉴定结果来评判各参试品种的相对抗性。4.4茄苗接种前管理2DBXX/XXXXX—种子发芽出苗后，保持秧盘基质湿润。出苗7-10d定苗，每穴保留健壮茄苗1株，苗龄20-25d，每盘追施尿素2g（兑水配成溶液）。露地育苗，雨天需做避雨处理，方法可用竹条与塑料薄膜制成拱棚覆盖茄苗。茄苗可使用杀虫剂防虫，但不使用杀菌剂防病。4.5接种时间以春、秋季节为宜。露地接种，气温宜在18-25℃进行；职能温室（棚）接种，气温可调节至20℃左右。4.6接种菌株采用当地有代表性的强致病力菌株接种。4.7接种方法4.7.1灌根法于多数茄苗长全2-3片真叶时接种。用移液器定量吸取10ml制备好的接种菌悬液注入到茄苗生长的基质中。接种菌悬液孢子浓度均为1×107个/mL(附录B)，接种菌悬液量均为每穴10ml。4.7.2伤根灌根法于多数茄苗长全3片真叶时接种，用规格为15cm×1cm钢制药勺的条形手柄在距离茄苗主根2-3cm的位置按等边三角形的三边方向分边垂直插入，切断茄苗部分须根，然后用移液器定量吸取10ml制备好的接种菌悬液均匀滴加到伤根形成的孔洞里。接种菌悬液孢子浓度均为1×107个/mL(附录B)，接种菌悬液量均为每穴10ml。4.8接种后期管理茄苗接菌后保湿24h，之后喷清水保持盘中基质湿润。露地管理雨天需做避雨处理，晴天气温偏高需做遮阳处理。保湿与避雨处理均可用竹条与塑料薄膜制成拱棚覆盖茄苗。5病情调查5.1调查时间灌根法以人工接种后45d进行病情调查，伤根灌根法以人工接种30d进行病情调查。5.1.1调查方法与数据处理调查各参鉴品种的所有茄苗，检查每株茄苗病情（症状识别见附录A按“0-5级”分级标准（见附录B）记载病情,统计株发病率和病情指数（见附录B）。6抗病性评价6.1评价标准茄子品种的抗病性以人工接种鉴定的结果进行评价。以对照品种的发病株率不低于50%，且3级以上的病株占总病株数的50%以上，为人工接种鉴定结果有效性标准。6.2抗性表型划分3DBXX/XXXXX—根据调查统计的各品种的病情指数，按照表1评定各参鉴品种对黄萎病的抗性结果。表1茄子品种苗期抗黄萎病评价标准抗性表型病情指数高抗（HR）X=0抗（R）0＜DI≤15中抗（MR）15＜DI≤30耐病（T）30＜DI≤50中感（MS）50＜DI≤70感（S）70＜DI≤1004DBXX/XXXXX—(资料性附录)A.1茄黄萎病症状在茄子整个生长期间均可发生黄萎病，苗期即可遭受侵染，5-6叶时初见症状；门茄座果以后，症状逐渐明显，田间症状有黄斑型、萎蔫型、枯死型3种类型，以黄斑型症状比较普遍。A.1.1黄斑型病株一般不矮化或稍矮化，叶片受害先是在叶脉间、叶尖、或叶缘出现褪绿、黄化病斑，并逐渐扩展到整个叶片，使叶片变黄或呈现大片黄化斑驳，且多自下而上或从一边向全株发展。叶片初在叶缘及叶脉间变黄，后发展至半边叶片或整片叶变黄。早期病叶晴天高温时呈萎蔫状，早晚尚可恢复，后期病叶病叶由黄变褐，萎蔫下垂以至脱落，严重时全株叶片变褐萎垂以至脱光仅剩茎杆。本病为全株性病害，剖检病株根、茎、分枝及叶柄等部，可见维管束变褐，挤捏横切面，无浑浊液渗出，可以与青枯病区别。A.1.2萎蔫型，与黄斑型相比，萎蔫型症状的特点是发病植株的叶怎不没有明显的黄斑症状，而是病株的叶片比较迅速地自下而上呈现出失水萎蔫状，往往病株的下部叶片枯死、上部叶片萎蔫。A.1.3枯死型，枯死型植株往往严重矮化，叶片皱缩、凋萎、枯死、脱落，病情扩展更为迅速，在比较短的时间内常常导致整株死亡；发病植株结果少，果实小、质地较硬、风味很差，甚至失去食用价值。A.2病害循环与发生规律茄黄萎病是以大丽轮枝菌（VerticilliumdahliaeKleb.)为主要病原引起的土传真菌性病害。病菌以休眠菌丝、厚垣孢子和微菌核随病残体在土壤中越冬，成为翌年的初侵染源。土壤中病菌可存活6〜8年，借风雨、流水或人畜活动传到无病田。翌年温度适宜时，病菌的分生孢子或微菌核萌发，从根部伤口或直接从幼根表皮及根毛侵人，后在维管束内繁殖，并扩展到枝叶，引起茄子系统发病和出现系统症状。该病在寄主的一个生长季节内无再侵染。病菌发育适温19-24℃,最高30℃,最低5℃。一般气温低，定植时根部伤口愈合慢，利于病菌从伤口侵人；从茄子定植到开花期如遇气候冷凉，日均温度低于15℃,且持续时间长，发病早而重；如此期间气候温暖，雨水调和，病害明显减轻；地势低洼、施用未腐熟的有机肥、灌水不当及连作地发病重。5DBXX/XXXXX—(规范性附录)黄萎病接种体制备、茄子黄萎病严重度分级标准、病情指数计算方法B.1黄萎病接种体制备在无菌条件下将参试的黄萎病菌从斜面中转接到含有150mL马铃薯蔗糖培养基(PS)的三角摇瓶中，150r/min、26℃条件下震荡培养4d。将菌液用双层纱布过滤，弃菌丝体留过滤液，将过滤液2000r/min离心10min，弃上清液，沉淀即为黄萎病菌孢子。用无菌水将孢子重新悬浮并稀释，在光学显微镜下使用血球计数板对菌悬液中孢子进行计数，配制成浓度为1×107个/mL的孢子悬浮液供接种