第十章高效液相色谱法课件

第十章高效液相色谱法第一节 方法原理第二节

高效液相色谱仪第三节

高效液相色谱法的应用目录第十章高效液相色谱法重点难点掌握

高效液相色谱法对流动相的要求，流动相的使

用方法；

熟悉

常用HPLC固定相，熟悉色谱柱的类型及维护常

识；

仪器的主要部件及工作流程；了解

高效液相色谱法的特点和分类。第十章高效液相色谱法方法原理第一节第十章高效液相色谱法第一节 方法原理（一）高效液相色谱法的特点1.分析速度快

2.柱效高

3.灵敏度高4.结果重复性好

5.应用范围广6.其他特点：色谱柱使用寿命长；组分柱后回收容易；可用于制备高纯度样品；仪器使用上较气相色谱法安全。一、高效液相色谱法的特点与分类第一节 方法原理（二）高效液相色谱法的分类1.液-液分配色谱法2.液-固吸附色谱法3.

分子排阻色谱法4.离子交换色谱法5.其他方法：离子对色谱法；手性色谱法；电色谱法；亲和色谱法

一、高效液相色谱法的特点与分类第一节 方法原理（一）固定相1.化学键合相的性质是指以无机物基质为载体，通过化学反应将各种不同基团键合到基质表面上所得到的固定相。2.化学键合相的种类①非极性键合相；②极性键合相；③离子交换键合相。二、固定相与流动相第一节 方法原理（二）流动相1.对流动相的要求（1）化学稳定性好且不含有任何腐蚀性物质（2）配制流动相的试剂纯度要高（3）流动相的黏度要低（4）流动相的种类选择恰当二、固定相与流动相第一节

方法原理（二）流动相2.

流动相的种类（1）反相色谱法：以水为主体，加入一定量与水互溶的有机溶剂如甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等，最常用的流动相为甲醇-水和乙腈-水。（2）正相色谱法：极性较低的疏水性溶剂，通常在正已烷、环已烷、庚烷,辛烷等烷烃中加入一定量的乙醇、异丙醇、四氢呋喃、乙腈、三氯甲烷等一定极性的溶剂。（3）离子交换色谱法：为具有一定pH的缓冲溶液。二、固定相与流动相第一节 方法原理（二）流动相3.流动相的使用（1）使用前过滤（2）使用前脱气（3）根据样品特点选择适当的洗脱方式（4）调节恰当的流动相pH（5）调节恰当的流速（6）分析前保证足够的流动相（7）流动相新鲜配制（6）流动相宜回收并注意使用安全（7）应尽可能不用缓冲液或选用较低浓度的缓冲液（8）检测波长高于流动相的截止波长二、固定相与流动相高效液相色谱仪第二节第十章高效液相色谱法一、仪器基本结构第二节高效液相色谱仪输液系统进样系统分离系统检测系统数据处理系统第二节高效液相色谱仪一、仪器基本结构（一）输液系统1.储液瓶：用来贮存足够量的流动相2.高压输液泵：将常压流动相变成高压3.梯度洗脱装置：有低压梯度和高压梯度两种方式4.脱气装置：用于排除贮液瓶至高压泵的流路中的气体第二节高效液相色谱仪一、仪器基本结构（二）进样系统1.六通进样阀：手动进样2.自动进样器：适合于批量分析（三）分离系统1.色谱柱2.恒温箱第二节高效液相色谱仪一、仪器基本结构（四）检测系统类型适用对象主要特点UVD具有紫外吸收的试样应用最广,灵敏度高，噪音低、线性范围宽，对样品没有破坏作用，适于梯度洗脱，其中DAD可同时获得组分的色谱与光谱信息ELSD挥发性低于流动相的任何样品组分检测灵敏度不如紫外检测器，但可检测不具紫外吸收的试样RID折射率与流动相不同的组分，均可可测定的对象范围很广，但灵敏度低，不适用于梯度洗脱FLD本身有荧光或经衍生化后可以产生荧光的化合物灵敏度较紫外检测器高，但可用于检测的对象较少ECD具电化学活性的物质灵敏度高，干扰多，对温度和流速的变化比较敏感MSD几乎所有物质灵敏度高，既可定性又可定量高效液相色谱法的应用第三节第十章高效液相色谱法一、定性分析方法第三节高效液相色谱法的应用（一）保留值对比法对比样品待测组分和相应对照品的保留值（二）两谱联用定性法高效液相色谱与质谱、核磁共振、红外光谱等方法联用定性，对于复杂样品的分析。二、定量分析方法第三节高效液相色谱法的应用1.外标法（最常用的方法）2.内标法3.面积归一化法第三节高效液相色谱法的应用三、应用与实例分析实例一

青蒿素的含量测定实例二

克拉霉素中有关物质的检查

小结第十章高效液相色谱法通过本章的学习，要掌握高效液相色谱法