免疫学检测技术常德基础医学系病原生物学与免疫学教研室课件

免疫学检测技术常德职业技术学院基础医学系病原生物学与免疫学教研室第三节免疫学检测技术一、抗原抗体的检测

抗原-抗体反应是指抗原与相应抗体在体内或体外发生特异性结合，其结构基础为抗原表位与抗体V区抗原结合位点的结构互补。体外的抗原-抗体反应又称血清学反应，可用已知的特异性抗体检测未知的抗原，也可用已知的抗原检测未知的抗体，可以是定性、定量或定位检测。第三节免疫学检测技术

抗原-抗体反应的特点1、特异性：抗原-抗体的结合具有高度特异性。2、可逆性：抗原抗体结合是非共价键结合，可解离。3、阶段性：抗原抗体反应可分为两个阶段：特异性结合阶段，可见的反应阶段。4、可见性：抗原和抗体两者的比例适当，结合后出现肉眼可见反应。

（一）第三节免疫学检测技术

影响抗原-抗体反应的因素

1、电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。2、温度：一般常使用反应在37℃水浴或孵育箱中进行。3、酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度

为PH6~8。

（二）第三节免疫学检测技术抗原-抗体反应的类型和检查方法

（三）

根据抗原的性质、参与反应的成分和反应呈现的结果，抗原-抗体反应的主要类型包括：

1、凝集反应

2、沉淀反应

3、免疫标记技术第三节免疫学检测技术1、凝集反应

细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集团现象，称为凝集反应，包括直接凝集反应、间接凝集反应和间接凝集抑制试验。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。由于凝集反应方法简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。第三节免疫学检测技术

（1）直接凝集反应颗粒性抗原直接与相应抗体结合出现的凝集现象。1）玻片法：为定性实验，简洁快速，常用于细菌的鉴定和人红细胞ABO血型的测定。2）试管法：为半定量实验，以抗原抗体结合出现可见反应的最大血清稀释倍数为血清抗体的效价，表示被检血清中相应抗体的含量，即滴度或效价，如临床诊断肠热症的肥达试验等。第三节免疫学检测技术

（2）间接凝集反应将可溶性抗原或抗体结合于某些颗粒载体表面，再与相应抗体或抗原进行反应出现的凝集现象，称为间接凝集反应。常用的颗粒载体有红细胞或聚苯乙烯乳胶颗粒等，根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血凝试验、间接乳胶凝集试验及间接乳胶凝集抑制试验。间接乳胶凝集试验如检测类风湿因子(RF),乳胶间接凝集抑制试验用于妊娠的早期诊断。第三节免疫学检测技术

2、沉淀反应

可溶性抗原（如细菌培养滤液、外毒素、血清蛋白等）与相应的抗体结合，在一定条件（适量的电解质，合适的酸碱度和温度）下，形成肉眼可见的沉淀物或仪器可检出的沉淀现象，称为沉淀反应。

第三节免疫学检测技术

2、沉淀反应

在液体中进行的沉淀反应目前所用的有免疫比浊法。沉淀反应大多在半固体凝胶中进行，可溶性抗原和抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇形成肉眼可见的白色沉淀现象。将琼脂扩散试验与电泳技术结合又衍生出对流免疫电泳等多种检测方法。

(1)单向琼脂扩散测定血清中IgG、IgM、IgA和补体C3等的含量。(2)双向琼脂扩散用于抗原或抗体的定性检测和两种抗原的相关分析。(3)免疫电泳是常用于血清蛋白的种类分析。(4)免疫比浊快速简便，适用于大批量标本的测定。

第三节免疫学检测技术3、免疫标记技术

是指用酶、荧光素、放射性同位素、胶体金及化学化光物质等标记抗体或抗原进行的抗原、抗体反应。具有高度敏感性和特异性，应用广泛。其中应用较广的是免疫荧光及放射免疫测定。但免疫荧光费时，不能定量及自动化；放射免疫技术所需的自动化仪器价格昂贵，所用试剂半衰期短、能危及人体健康。免疫酶技术则是敏感、快速、简便、应用范围广、不需特殊设备、易于把握的一项新技术。第三节免疫学检测技术3、免疫标记技术(1)酶免疫测定分酶联免疫吸附试验和免疫组化技术：①酶联免疫吸附试验(ELISA)：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。②免疫组化技术：包括酶免疫组化、免疫胶体金技术和免疫电镜技术。免疫胶体金技术广泛应用斑点金免疫层析试验（DICA，又称一步金法）检测尿中的绒毛膜促性腺激素（HCG），作为妊娠的早期诊断。第三节免疫学检测技术3、免疫标记技术(2)免疫荧光法又分直接法和间接法。(3)放射免疫测定法(RIA)(4)发光免疫测定法用于血清中超微量物质如激素的测定。(5)免疫印迹法是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。第三节免疫学检测技术二、免疫细胞的检测

(一)免疫细胞的类型与数量检测1、外周血单个核细胞的分离2、E花结试验能形成花结的细胞(即T细胞)约60%～80%。3、免疫磁珠分离法4、流式细胞术(FCM)可分类收集所需细胞，且能保持细胞活性以供进一步使用。第三节免疫学检测技术

(二)免疫细胞功能测定