抗生素效价的微生物检定法MicrobiologicalAssayofAntibioticPoten

抗生素效价的微生物检定法

MicrobiologicalAssayofAntibioticPotency重庆医药高等专科学校

ChongqingMedicalandPharmaceutialCollege目录Contents第一节概述

SectionIOverview第二节管碟法

SectionIICap-plateMethod学习目标

Learningobjective知识目标

KnowledgeObjectives能力目标

Abilityobjective1、掌握抗生素的效价测定方法——管蝶法。

1.Masterthemethodofpotencyassayofantibiotics--cap-platemethod.2、熟悉抗生素效价单位的含义及表示方法、标准品和供试品的概念。

2.Familiarizewiththemeaningandexpressionofantibioticpotencyunit,andtheconceptofstandardandtestproducts.3、了解其他测定抗生素效价测定方法。

3.Understandothermethodsofdeterminingthepotencyofantibiotics.能正确应用管碟法对抗生素的效价进行检测。

Beabletocorrectlyapplythecap-platemethodtotestthepotencyofantibiotics.素质目标

Qualityobjective严谨的实验态度和实事求是的工作作风。

Rigorousexperimentalattitudeandrealisticworkstyle.重点难点

Keypointanddifficulty重点抗生素的效价测定方法——管蝶法。KeyPointThemethodofpotencyassayofantibiotics--cap-platemethod.难点检测原理。Difficulty

Detectionprinciple.概述

Overview第一节

Section

I一、抗生素的定义

I.Definitionofantibiotics抗生素是指一类由生物(包括微生物、动物和植物在内)在其生命活动过程中所产生的，能在低微浓度下有选择地抑制或杀灭其它生物的化学物质，主要是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，可用微生物发酵法或化学合成与半合成法进行生产。Antibioticsreferstoaclassofchemicalsubstancesproducedbyorganisms(includingmicroorganisms,animalsandplants)inthecourseoftheirlifeactivities,whichcanselectivelyinhibitorkillotherorganismsatlowmicroconcentrations,mainlythemetabolitesofmicroorganismssuchasbacteria,actinomycetesandfungi,andcanbeproducedbymicrobiologicalfermentationorchemicalsynthesisandsemi-syntheticmethods.根据作用特点和化学结构进行分类：

Classifiedbyfeaturesofactionandchemicalstructure:AminoglycosidesAnti-tumorAnti-fungalBeta-lactamAnti-parasiticAntibacterial二、抗生素的效价、单位及表示方法

II.Potency,unitandexpressionofantibiotics（一）抗生素的效价

(I)Potencyofantibiotics

抗菌活性是指抗菌药物抑制或杀死病原微生物的能力。抗生素的抗菌活性通常用效价单位来表示，即抗菌效价指抗生素药物的作用强度。在临床应用中，抗生素的效价可准确地反映抗生素的医疗价值，以“单位（U/IU）”表示。

Antibacterialactivityistheabilityofanantimicrobialdrugtoinhibitorkillpathogenicmicroorganisms.Theantibacterialactivityofanantibioticisusuallyexpressedintermsofpotencyunits,i.e.,antibacterialpotencyreferstothestrengthofactionoftheantibioticdrug.Inclinicalapplication,thepotencyofanantibioticaccuratelyreflectsthemedicalvalueoftheantibioticandisexpressedin"units(U/IU)".硫酸链霉素

798单位/毫克

Streptomycinsulfate798units/mg青霉素G钠1670单位/毫克

SodiumpenicillinG1,670units/mg杆菌肽

74单位/毫克

Bacitracin74units/mg（二）抗生素效价单位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics抗生素效价的标示量，原则上应按所含特定的抗菌活性部分的重量来计算。

Thelabelledamountofantibioticpotencyshouldinprinciplebecalculatedonthebasisoftheweightofthespecificantibacterialactivepartcontained.

在应用中，抗生素类药物有效成分的表示方法，是按照各种抗生素的特点及使用经验，采用符合客观实际的效价单位表示。常用的抗生素效价单位有质量单位、类似质量单位、质量折算单位、特定单位。

Inapplication,theexpressionoftheactiveingredientsofantibioticdrugsisbasedonthefeaturesofvariousantibioticsandtheexperienceofusingthem,andtheexpressionofthepotencyunitthatconformstotheobjectiverealityisused.Commonlyusedantibioticpotencyunitsincludemassunit,similarmassunit,massconvertingunit,andspecificunit.（二）抗生素效价单位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics质量单位以抗生素中所含特定的抗菌活性部分（纯游离碱或游离酸）的质量1μg作为1单位，即1mg=1000单位。

Themassunittakes1μgofthemassofthespecificantibacterialactivepart(purefreealkaliorfreeacid)containedintheantibioticas1unit,i.e.,1mg=1,000units.案例

Case

硫酸链霉素抗菌活性是以链霉素效价单位表示的，其链霉素的效价单位是以具活性成分链霉素的“活性”质量表示的，即1链霉素效价单位＝1微克链霉素，这里是“活性微克”而不是“质量微克”。

Theantibacterialactivityofstreptomycinsulfateisexpressedinstreptomycinpotencyunits,anditsstreptomycinpotencyunitsareexpressedinthe"active"massoftheactiveingredientofstreptomycin,i.e.,1streptomycinpotencyunit=1microgramofstreptomycin,andhereitis"microgramsofactivity"insteadof"microgramsofmass".分析

Analysis

在抗生素的生产、研究和应用等方面，均以抗生素活性成分的“活性”质量计量抗生素的效价单位，采用活性成分的“活性”质量1μg＝1效价单位的方法表示。

Intheproduction,researchandapplicationofantibiotics,the"active"massoftheactiveingredientoftheantibioticisusedtomeasurethepotencyunitoftheantibiotic,whichisexpressedbythemethodthatthe"active"massoftheactiveingredient,1μg,isequivalentto1potencyunit.案例分析

Analysisofcase质量单位Massunit（二）抗生素效价单位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics类似质量单位

Similarmassunit类似质量单位以特定的纯抗生素制品盐的质量1μg作为一个单位，即1mg＝1000单位，其中包括了无抗菌活性的酸根在内。这种类似质量单位，虽然并不合理，但在国际上已经习惯沿用。

Thesimilarmassunittakes1μgofthemassofaspecificpureantibioticproductsaltasaunit,i.e.1mg=1,000units,includingtheacidradicalsthathavenoantibacterialactivity.Thissimilarunitofmass,althoughnotreasonable,hasbeencustomarilyusedinternationally.（二）抗生素效价单位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics质量折算单位

Massconvertingunit质量折算单位是以特定的纯抗生素制品的某一质量为1单位而加以折算。

Massconvertingunitsarethosethatareconvertedbytakingamassofaspecificpureantibioticproductas1unit.如：青霉素国际标准品

Forexample:penicillininternationalstandardproducts第一批青霉素国际标准品，青霉素G钠0.6微克为1单位，即1667单位/毫克。

Thefirstbatchofpenicillininternationalstandardproducts,0.6microgramsofsodiumpenicillinGfor1unit,thatis,1,667units/mg.第二批青霉素国际标准品，青霉素G钠0.5988微克为1单位，即1670单位/毫克。

Thesecondbatchofpenicillininternationalstandardproducts,0.5988microgramsofsodiumpenicillinGfor1unit,thatis,1,670units/mg.（二）抗生素效价单位及表示方法

(II)Potency,unitandexpressionofantibiotics特定单位

Specificunit特定单位是指对于不易得到纯品，组成成分较复杂的抗生素，在开始生产及临床使用时，只能以一特定量的标准品（或对照品）作为1单位。

Specificunitmeansthatforantibioticsthatarenoteasytogetpureproductsandhavecomplexcomposition,onlyaspecificamountofstandardproducts(orcontrolproducts)canbeusedas1unitwhenstartingproductionandclinicaluse.如：杆菌肽国际标准品

Forexample:bacitracininternationalstandardproducts第一批杆菌肽A国际标准品为55单位/毫克；

ThefirstbatchofbacitracinAinternationalstandardproductis55units/mg;第二批杆菌肽A国际标准品为74单位/毫克。

ThesecondbatchofbacitracinAinternationalstandardproductis74units/mg.这类抗生素的效价单位的精确定义很难确定，折算效价也难以计算，只能以国际标准品的效价单位，作为比较的基准。

Theprecisedefinitionofthepotencyunitofthistypeofantibioticsisdifficulttodetermine,andtheconvertedpotencyisalsodifficulttocalculate.Comparisonscanonlybemadeintermsofpotencyunitsofinternationalstandardproducts.效价测定

Potencyassay

效价的测定即指抗生素的含量测定，其方法主要有微生素检定法和理化方法。

Potencyassayreferstotheassayofantibioticcontent,andthemethodsmainlyincludemicrobiologicalassayandphysicochemicalmethods.微生物检定法

是以抗生素对微生物的杀伤或抑制程度为指标来衡量抗生素效价，是抗生素效价测定的最基本方法。MicrobiologicalassayItisthemostbasicmethodforthepotencyassayofantibioticsbytakingthedegreeofkillingorinhibitingofmicroorganismsbyantibioticsasanindicatortomeasurethepotencyofantibiotics.理化方法

是指根据抗生素的分子结构，利用其特有的化学或理化性质及反应进行的。PhysicochemicalmethodItreferstotheuseofuniquechemicalorphysicochemicalpropertiesandreactionsofantibioticsaccordingtotheirmolecularstructure.抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素效价测定方法。随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素效价的测定已被化学方法所替代，但由于以下原因，抗生素微生物检定法，目前在各国药典中仍占有重要地位。

Themicrobiologicalassayofantibioticsisaninternationallyrecognizedandclassicalmethodfortheassayofantibioticpotency.WiththedevelopmentofchemicalanalyticaltechniquessuchasHPLC,theassayofthepotencyofsomeantibioticshasbeenreplacedbychemicalmethods.However,themicrobiologicalassayofantibiotics,forthefollowingreasons,stilloccupiesanimportantplaceinthepharmacopoeiasofvariouscountries.01微生物检定法可直观、特异的反应出抗生素药品的抗菌活性，显示临床的特点。

Microbiologicalassaysprovideavisualandspecificresponsetotheantibacterialactivityofantibioticdrugs,showingclinicalcharacteristics.02多组分抗生素由于不同组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分、组成、含量和活性的关系。

Multicomponentantibioticsaredifficulttoaccuratelycharacterizetherelationshipbetweencomponents,composition,contentandactivityinchemicalassaysduetodifferencesinthebiologicalactivityofdifferentcomponents.03许多抗生素品种由于各种原因目前没有适当的化学分析方法表征其活性。

Manyantibioticspeciesdonotcurrentlyhaveappropriatechemicalanalyticalmethodstocharacterizetheiractivityforavarietyofreasons.04同时微生物法所需的仪器设备简单，成本低。

Atthesametime,themicrobiologicalmethodrequiressimpleinstrumentationandlowcost.三、抗生素的标准品与供试品

III.Antibioticstandardandtestproducts（一）抗生素微生物检定用标准品

(I)Standardproductsformicrobiologicalassayofantibiotics标准品是指用于生物检定或效价测定的标准物质，其特性量值一般按效价单位（或μg）计物质。Standardproductsarestandardsubstancesusedforbioassatorpotencyassay,andtheircharacteristicvaluesaregenerallymeasuredintermsofpotencyunits(orμg)tocalculatethesubstance.抗生素的国际标准品由世界卫生组织邀请有条件的国家检测机构或药厂协作标定后，由生物检定专家委员会最后通过决定。

TheinternationalstandardproductsofantibioticsarecalibratedbytheWorldHealthOrganizationbyinvitingnationaltestinginstitutionsorpharmaceuticalcompanieswiththenecessaryconditionstocollaborateinthecalibration,andthenfinallyadoptedbytheBioassayExpertCommittee.国家标准品是各国指定的机构选定一批性质完全相同的药品与国际标准品进行比较，定出它的效价，统一向全国的检定、科研、教育、生产单位分发，作为检定产品效价时使用

Thenationalstandardproductisagroupofdrugsofidenticalnatureselectedbythedesignatedorganizationofeachcountryforcomparisonwiththeinternationalstandardproducttodetermineitspotency,anduniformlydistributedtothenationaltesting,scientificresearch,education,andproductionunitsforuseinthedeterminationofproductpotency.（二）供试品

(II)Testproducts供试品是供检定其效价的样品，它的活性组分应与标准品基本相同。Thetestproductisasampleforthepotencyassay,anditsactivecomponentsshouldbeessentiallythesameasthestandardproducts.抗生素的标准品与供试品有什么关系？

Whatistherelationshipbetweenthestandardproductsandthetestproductsofantibiotics?课堂活动

ClassroomActivity四、抗生素微生物检定法的种类

IV.Typesofmicrobiologicalassayofantibiotics抗生素微生物检定法是利用抗生素在低微浓度下有选择地抑制或杀死微生物的特点，以抗生素的抗菌活性为指标，来衡量抗生素中的有效成分效力的方法。

Microbiologicalassayofantibioticsisamethodtomeasurethepotencyofeffectiveingredientsinantibioticsbyutilizingthecharacteristicsofantibioticsthatselectivelyinhibitorkillmicroorganismsatlowmicro-concentrations,andtakingtheantibacterialactivityofantibioticsasanindicator.抗生素微生物检定法可分为：

Microbiologicalassaysforantibioticscanbecategorizedas:管碟法

Cap-platemethod浊度法

Turbidimetricmethod稀释法

Dilutionmethod目前各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。

Thelattertwomethodsarecommonlyusedinpharmacopoeiasofvariouscountriestodeterminethepotencyofantibiotics.（一）管碟法

(I)Cap-platemethod通过测定由不同浓度的抗生素溶液在含有试验菌固体培养基中的扩散，而在其表面所产生的抑菌圈的大小，衡量抗生素抑菌效力的方法。

Itisamethodtomeasuretheantibiotic'santibacterialpotencybydeterminingthesizeoftheinhibitionzoneproducedonthesurfaceofthesolidculturemediumcontainingthetestorganismsbydiffusionofantibioticsolutionsofdifferentconcentrations.多用于抗生素药物的含量（效价）测定。

Itismostlyusedforthedeterminationofthecontent(potency)ofantibioticdrugs.（二）浊度法

(II)Turbidimetricmethod通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，利用分光光度法测定含不同浓度的抗生素的液体培养基的浊度，从而衡量抗生素抑菌效力的方法。

Itisamethodtomeasuretheantibiotic'santibacterialpotencybymonitoringthegrowthofequalamountsoftestbacteriainliquidmediawithdifferentconcentrationsofantibiotics,anddeterminingtheturbidityofliquidculturemediumcontainingdifferentconcentrationsofantibioticsusingspectrophotometry.可用于抗生素药物的含量（效价）测定。

Itcanbeusedforthedeterminationofthecontent(potency)ofantibioticdrugs.（三）稀释法

(III)Dilutionmethod通过监测等量的试验菌菌液在不同浓度的抗生素液体培养基中的生长情况，观察含不同浓度抗生素的液体培养基中有无细菌生长，从而测定抗生素最低抑菌浓度（MIC）的方法。

Itisamethodtodeterminetheminimuminhibitoryconcentration(MIC)ofantibioticsbymonitoringthegrowthofequalamountoftestbacteriainliquidculturemediumwithdifferentconcentrationsofantibiotics,andobservingwhetherthereisanybacterialgrowthinliquidculturemediumcontainingdifferentconcentrationsofantibiotics.常用于新药的研制及药敏试验等方面。

Itiscommonlyusedinthedevelopmentofnewdrugsanddrugsensitivetest.ConcentrationofantibacterialagentsincreasedLowestinhibitoryconcentrationoftheantibiotic.Control浓度设置ug/ml

Concentrationsettingug/ml12864321684210.50.25阴性对照

Negativecontrol阳性对照

Positivecontrol四、抗生素微生物检定法的种类

IV.Typesofmicrobiologicalassayofantibiotics抗生素微生物检定方法比较

Comparisonofmicrobiologicalassaymethodsforantibiotics管碟法

Cap-platemethod第二节

SectionII一、检定原理

I.Principleofassay

管碟法，又称杯碟法，是通过将不锈钢小管（俗称为牛津杯）放置在含敏感试验菌的琼脂培养基上，将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子随溶剂向培养基内呈球面状放射状扩散。同时将培养基置入适宜试验菌生长的培养箱内，使试验菌开始生长。

Cap-platemethod,alsoknownascylinderplatemethod,isamethodinwhichasmallstainlesssteeltube(commonlyknownasOxfordcup)isplacedontheagarculturemediumcontainingthesensitivetestorganisms,andtheantibioticsolutionisinjectedintothesmallsteeltube,wheretheantibioticmoleculesdiffusewiththesolventintotheculturemediuminasphericalradialpattern.Atthesametime,theculturemediumisplacedintheincubatorsuitableforthegrowthofthetestorganisms,sothatthetestorganismsbegintogrow.一、检定原理

I.Principleofassay抗生素分子在琼脂培养基中的浓度随与小钢管间距离的增大而降低，离小钢管越远，培养基中的抗生素分子越少，相应的抗生素浓度越低。当抗生素分子扩散达到一定时间，可在小钢管周围形成一个抑菌圈。Theconcentrationofantibioticmoleculesintheagarculturemediumdecreaseswiththeincreaseofthedistancefromthesmallsteeltube,thefartherawayfromthesmallsteeltube,thefewerantibioticmoleculesintheculturemedium,andthelowerthecorrespondingantibioticconcentration.

Whentheantibioticmoleculesdiffuseforacertainperiodoftime,aninhibitionzonecanbeformedaroundthesmallsteeltube.在抑菌圈中因抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受到抑制，此处琼脂培养基成透明状；在抑菌圈边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低抑菌浓度。Becausetheantibioticconcentrationishigherthantheinhibitoryconcentrationintheinhibitionzone,thegrowthofthetestorganismsisinhibited,andtheagarculturemediumherebecomestransparent;attheedgeoftheinhibitionzone,theantibioticconcentrationisexactlyequaltothelowestinhibitoryconcentrationoftheantibiotic.图12-1抑菌圈形成示意图

Figure12-1SchematicdiagramoftheformationoftheinhibitionzoneBacterialayerBottomlayerSphericalspreadingInhibitionzoneBacteriazone一、检定原理

I.Principleofassay量反应平行线原理：当抗生素浓度的对数剂量和反应呈直线关系，且供试品和标准品的作用性质相同时，供试品和标准品的两条量-反应关系曲线相互平行。

Principleofgradedresponseparallellines:Whenthelogarithmicdoseandresponseofantibioticconcentrationareinastraightlinerelationship,andthetestandstandardproductshavethesamenatureofaction,thetwogradeddose-responsecurvesofthetestandstandardproducts

areparalleltoeachother.二、检定的影响因素

II.Affectingfactorsofassay自学

Self-learning1抑菌圈的质量控制

Qualitycontroloftheinhibitionzone抑菌圈的形状

Shapeoftheinhibitionzone抑菌圈的大小

Sizeoftheinhibitionzone抑菌圈边缘清晰度

Clearnessoftheedgeoftheinhibitionzone2标准品与供试品的同质性

Homogeneityofstandardandtestproducts3斜率的控制

Slopecontrol三、检定方法

III.Assaymethods试验用菌液、缓冲液、培养基的配制

Preparationoftestbacteriasolution,bufferandculturemedium标准品与供试品溶液的制备

Preparationofstandardandtestproductssolutions双碟的制备

Preparationofdoubleplates滴加药液到小钢管内

Dripmedicineliquidintosmallsteeltubes培养

Culture抑菌圈测量

Measurementoftheinhibitionzone计算结果

Calculationresults双碟：装有培养基和试验菌的玻璃器皿叫双碟Doubleplates:glasswarecontainingculturemediumandtestorganismsarecalleddoubleplates.（一）培养基的适用性检查

(I)Suitabilitytestforculturemedium三、检定方法

III.Assaymethods（一）培养基的适用性检查

(I)Suitabilitytestforculturemedium图12-3抗生素效价检定操作流程图

Figure12-3FlowchartofantibioticpotencyassayoperationWeighingofstandardproductsDilutionofstandardproductsSolutionofstandardproductsWeighingoftestproductsDilutionoftestproductsSolutionoftestproductsEquipmentforbuffersInjectingintosmallsteeltubesPlatePreparationAddroundedcoverofclaytileAftersolidificationAftersolidificationPreparationofculturemediumBottomlayer20mlBacterialayer5mlAddsmallsteeltubesAddbacteriasolutionPreparationofbacteriasolutionAddroundedcoverofclaytileCultureMeasuretheinhibitionzoneReliabilitycalibration,potencycalculation（二）管碟法的分类

(II)Classificationofcap-platemethod管碟法根据试验设计不同，可分为：

Accordingtotheexperimentaldesign,Thecap-platemethodcanbecategorizedas:一剂量法(标准曲线法)

1-dosagemethod(standardcurvemethod)常用于原料生产的过程监控、中间体或半成品检验

Commonlyusedforprocessmonitoringofrawmaterialproduction,testingofintermediatesorsemi-finishedproducts.二剂量法

2-dosagemethod是抗生素质量检验的常规方法。用标准品、供试品各高低两个剂量，采用量反应平行线原理，在相同实验条件下比较供试品和标准品抑菌圈的大小。

Itisaroutinemethodforantibioticqualitytesting.Comparethesizeoftheinhibitionzoneofthetestandstandardproductsunderthesameexperimentalconditionsbyusingtwodosesofeachofthestandardandtestproductsrespectively,andbyusingtheprincipleofgradedresponseparallellines.三剂量法

3-dosagemethod主要用于标准品的标定

Itismainlyusedforcalibrationofstandardproducts日常使用多采用二剂量法，对于有争议结果，必须使用三剂量法测定的结果仲裁。

The2-dosemethodismostlyusedfordailyuse.Forcontroversialresults,theresultsdeterminedbythe3-dosemethodmustbeusedforarbitration.（三）操作注意事项

(III)Notesforoperation管碟法根据试验设计不同，可分为：

Accordingtotheexperimentaldesign,Thecap-platemethodcanbecategorizedas:试验环境：半无菌间

Testenvironment:semi-sterileroom仪器用具：双碟、钢管、灭菌

Instruments:doubleplates,steeltubes,sterilized试验菌：对抗生素敏感，新鲜

Testorganisms:sensitivetoantibiotics,fresh操作次序上的误差：滴加迅速

Errorsintheorderofoperation:rapidadditionofdrops抑菌圈的测量

Measurementoftheinhibitionzone四、二剂量法

IV.2-dosagemethod（一）操作方法

(I)operationmethod标准品溶液的制备：

Preparationofstandardproductsolutions:标准品的使用与保存，应遵循标准品使用说明书的规定。

Theuseandpreservationofstandardproductsshouldfollowtheprovisionsoftheinstructionsforuseofstandardproducts.供试品溶液的制备

Preparationoftestproductssolution例子

Example01检验用溶液的制备

Preparationofsolutionfortest（一）操作方法

(I)operationmethod

供试品溶液的制备：按估计效价先用稀释液制成1000U/ml的浓溶液，再根据要求用缓冲液制成滴蝶用最终高、低浓度的溶液

Preparationoftestproductssolution:Prepareaconcentratedsolutionof1,000U/mlwithdiluentfirstaccordingtotheestimatedpotency,andthenpreparethefinalhighandlowconcentrationsforplatedroppingwithbufferasrequired.抗生素类别Categoryofantibiotics试验菌Testbacteria培养基Culturemedium灭菌缓冲液pH值pHvalueofsterilizingbuffer抗生素浓度范围单位/mlAntibioticconcentrationrangeunit/ml培养条件Cultureconditions编号SerialnumberpH值pHvalue温度/℃Temperature时间/小时Time/hour庆大霉素Gentamicin短小芽孢杆菌Bacilluspumilus17.8~8.07.82.0~12.035~3714~16（一）操作方法

(I)operationmethod02菌悬液的制备自学

PreparationofbacteriumsuspensionSelf-learning03双碟的制备在半无菌室内或超净工作台上进行，应注意微生物及抗生素的污染，放双碟的台面应用水平仪调水平。

PreparationofdoubleplatesItshouldbecarriedoutinasemi-sterileroomoronancleanbench.Attentionshouldbepaidtothecontaminationofmicroorganismsandantibiotics.Thecountertopfordoubleplatesshouldbeleveledwithagradienter.玻璃/塑料平皿(d=90mmh=16-17mm)

Glass/plasticPlate(d=90mmh=16-17mm)菌层

5ml含菌培养基

Bacterialayer5mlBacteria-containingculturemedium底层

20ml灭菌培养基

Bottomlayer

20mlSterilizedculturemedium课堂活动

ClassroomActivity双碟制备的注意事项

Notesforthepreparationofdoubleplates播放双碟的制备视频

Showthevideoofthepreparationofdoubleplates知识链接

KnowledgeLink双碟制备注意事项Notesforthepreparationofdoubleplates1.玻璃双碟一定要干燥，不能有冷凝水。1.Theglassdoubleplatesmustbedry,nocondensationwater.2.刻度吸管要用砂轮将尖嘴割掉一点，变成大口后用，否则易发生堵塞。2.Graduatedpipettesshouldbeusedaftercuttingoffalittleofthepointedtipwithagrindingwheelandturningitintoalargemouth,otherwisetheyarepronetoclogging.3.冬季室温较低，倒好底层的双碟，待凝固后，可先放人37℃恒温箱内温热，这样倒菌层时，培养基易于摊布水平。3.Inwinter,withthelowroomtemperature,pourthebottomofthedoubleplate,aftersolidification,putitintothe37℃thermostattowarmup,sothatwhenpouringthebacteriallayer,theculturemediumiseasytospreadthelevel.4.摇匀菌层培养基时，一定注意不能摇出气泡。4.Whenshakingtheculturemediumwell,besurenottoshakeouttheairbubbles.5.无论是倒底层还是倒菌层动作都要快，尤其是倒菌层时要更快。5.Whetheritispouringthebottomlayerorpouringthebacteriallayer,theactionshouldbefast,especiallywhenpouringthebacteriallayershouldbefaster.（一）操作方法

(I)operationmethod04放置小钢管

Placesmallsteeltubes（一）操作方法

(I)operationmethod05滴碟、培养

Dripplate,culture毛细滴管（或滴管）滴碟

Capillaryburette(orburette)dripplateSH→TH→SL→TL（二）操作方法

(II)Operationmethod06测量抑菌圈双碟透明度好，无破损和不透明现象；抑菌圈应圆满，无破圈或圈不完整现象，否则应弃去该双碟。

MeasurementoftheinhibitionzoneThetransparencyofthedoubleplatesisgood,withnobreakageoropacity;theinhibitionzoneshouldbecomplete,withnobrokenorincompletezone,otherwisethedoubleplatesshouldbediscarded.（三）记录与计算

(III)Recordandcalculation01记录试验记录应包括抗生素的品种、剂型、规格、标示量、生产厂商、批号、检验目的、检验依据、检验日期、温度、湿度、标准品与供试品的称量、稀释步骤与核对人、抑菌圈测量结果。RecordThetestrecordshouldincludethetype,dosageform,specification,labeledamount,manufacturer,andbatchNo.oftheantibiotics,aswellasthetestpurpose,testbasis,testdate,temperature,humidity,weighingofstandardproductsandtestproducts,dilutionstepandchecker,andthe