DB62T-獭兔人工授精技术规程

PAGEICSCCS甘肃省地方标准甘肃省地方标准DB62/TXXX獭兔人工授精技术规程Rulesforrabbitartificialinseminationtechniques（报批稿）20**-##-##发布20**-##-##实施甘肃省市场监督管理局发布DB62/xxxx-xxxx前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替DB62/T2625-2015《獭兔人工授精技术规程》，与DB62/T2625-2015《獭兔人工授精技术规程》相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：——更改了3.4冷冻精液的定义——增加了术语台兔——更改了4.1.1和名称——增加了种公兔的选择——更改了4.2.1冷冻精液的保存位置——增加了4.2.6精液收集——增加了稀释液计算方法——更改了4.3.3解冻后可进行输精的精液品质标准——增加了5.3输精次数——更改了獭兔繁殖情况登记表本文件由甘肃省农业农村厅提出。本文件由甘肃省畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：甘肃农业大学、临夏州农业农村局本标准主要起草人：封洋、滚双宝、杨巧丽、闫尊强、黄晓宇、王鹏飞、高小莉、梁永飞。——2015年首次发布为DB62/T2625-2015；——本次为第一次修订。本文件由甘肃农业大学解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至《獭兔人工授精技术规程》地方标准修订组（地址：甘肃省兰州市甘肃农业大学，邮编：730070，联系人：封洋，E-mail:fengyang@，联系方式，以供今后修订时参考。PAGE6獭兔人工授精技术规程１范围本文件规定了獭兔人工授精的方法和操作程序。本文件适用于獭兔人工授精站（点）、规模养獭兔场。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T5458液氮生物容器3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination用人工方法把公畜的精液采出经适当处理后，输送到发情母畜的生殖道内，使之受胎的一种繁殖技术。3.2精子活力spermmotility在温度为37℃条件下镜检,直线前进运动精子占总数的百分比。3.3精子密度

spermdensity每毫升精液中所含精子数，分密、中、稀三级。显微镜视野里精子稠密，精子与精子之间几乎无空隙，评判为密；精子与精子之间有空隙，能看清精子的头尾，但无法数清，评判为中；视野里精子稀少，精子与精子之间空隙大，能数清精子数量，评判为稀。3.4冷冻精液frozensemen经特殊方法处理，超低温冷冻后在液氮中（-196℃）长期保存的精液。3.5冷冻精液解冻thawingoffrozensemen冷冻精液使用前使冷冻精子重新恢复活力的处理方法。3.6台兔dummyrabbit用于诱导公兔爬跨、采集精液的活体兔或兔模具。4精液的准备4.1精液分类精液分为鲜精液和冷冻精液两种。4.2鲜精液的准备4.2.1器具用品准备备齐器械药品，包括假阴道、集精杯、玻璃棒、温度计、纱布、盐水瓶、消毒锅、显微镜、量筒、恒温箱、水浴锅、分装瓶、输精管、pH试纸、青霉素、链霉素、高锰酸钾、葡萄糖、标签等。凡是与精液有接触的器械都必须用煮沸或高温干燥等方法消毒。采精员、检验员用消毒液清洗双手。4.2.2药品准备每次采精前应配制好稀释液，现配现用。配方如下：葡萄糖3g、柠檬酸钠1.4g、EDTA0.1g、蒸馏水加至100mL，用玻璃棒轻轻搅动，待充分溶解后，用纱布过滤装入盐水瓶，盖紧瓶塞。高压蒸气消毒（103.4kPa、15min）或煮沸消毒，自然冷却备用。4.2.3假阴道的制备用直径约5cm，长度8cm的硬塑料管一支，两端锉光，内装与塑管内径相仿的软海绵一块，将海绵沿直轴方向打一小孔，孔径为0.5cm，孔口呈伞形。将洗净、消毒过的橡胶套松开，装入假阴道内胎中，使开口的一端翻转，固定在外壳边缘，有囊的一端露出，内胎的另一端约1cm，注入50℃～60℃的温水中，使海绵吸收，用温度计蘸取生理盐水或液石蜡，插入假阴道内4cm处测温。假阴道温度以40℃～42℃之间为宜。集精杯安装至假阴道末端。4.2.4种公兔的选择选择体质结实、生殖器官发育正常、性欲旺盛、精液品质良好公兔。采精前剪除公兔阴茎周围的长毛，体表擦拭干净。4.2.5采精对公兔采精频率为每ld采一次。保持采精室、检验室的环境卫生和安静。采精的地点应在公兔笼内，操作人员左手拿母兔诱情，待公兔"爬背"时，右手呈45°角持假阴道放在母兔后腿中间，待公兔射精后，立即将假阴道孔口朝上，以防精液流失。采精开始和结束前射出的少量白色液体和清白稀薄精液不予收集。4.2.6精液处理精液品质检查感官检查：精液的气味为无味或略腥，色泽为浓厚的乳白色或者乳黄色，其他颜色均不可用于输精。显微镜检查：用玻璃棒蘸取精液滴于载玻片上，在35℃～37℃温度下放入400倍进行显微镜检查，检查原精密度应为中级以上，活力在0.6以上方可输精。精液的稀释根据原精的浓度计算出需要稀释的倍数。其计算方法为：需加稀释液数量=滤精量×（原精密度×活力/0.1~1）。将稀释液调配至所需要的量，按每100mL内5~10万单位的比例加入抗菌素，轻轻搅拌。将集精杯内的原精液沿杯壁或玻璃棒慢慢倒入大量筒内。然后再加入等温稀释液轻轻搅拌。稀释后，立即对稀释精液进行镜检，要求活力不低于稀释前、每毫升活精子在0.1亿个以上。精液的分装精液的分装采用瓶装或者管装，装精液的瓶或者管应选用灭菌的一次性塑料制品。分装后贴上日期、獭兔编号，避光保存。从采精结束至分装过程应在15min内完成。4.3冷冻精液的准备4.3.1冷冻精液的保存冻精必须放在液氮贮精罐内备用，液氮罐应符合GB/T5458规定的标准，放在安全可靠的地方不要随便打开罐盖。保存期间定期检查罐内液氮消耗量,不足60%时及时补充液氮。4.3.2冷冻精液的解冻手握法将细管从容器中取出放入手心中用双手搓热，直至精液溶解。水溶法将细管冻精取出后，立即投入45℃~60℃温水中浸泡,直至精液完全溶解取出。4.3.3解冻后可进行输精的精液品质标准显微镜检查：用玻璃棒蘸取精液滴于玻片上，在35℃～37℃温度下放入400倍进行显微镜检查，检查原精密度应为中级以上，活力在0.55输精5.1输精前准备5.用玻璃输精器，前端长l0cm左右的空心小玻管与2mL注射器相连，也可用实验用滴管代替，每输精一次更换一支无菌输精器。输精器及精液必须加温至与獭兔体温相接近，输精前可放在35℃左右的温水中保温。5.1.2输精母兔的选择应选择健康无病，处于发情期的母兔进行人工授精。5.1输精前给母兔注射促黄体素释放激素（LRH-A3），注射剂量为0.5μg/只。5.2输精由保定人员抓住母兔的背部，使母兔臀部略朝上，输精员持输精器(如一人操作可一手抓兔，一手持输精器)。取经过稀释的精液0.5mL慢慢插入母兔阴道内约7cm处输精。插入时应轻轻向前上方旋动，边旋边进，插入后可来回轻轻转动几次。抽出输精器时慢慢地边转动边抽出，抽出输精器后，拍打一下兔子的臀部。整个人工授精过程要求动作准确，无菌操作。5.3输精次数一般一次输精即可，输精10d后进行妊娠检查。6妊娠检查6.1外观检查母兔妊娠后，可见采食量增大。人工授精15d左右，母兔体重明显增加，毛色光润，腹围增大