KTA0004-CN-Annexin V-AbFluor 647细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光）

AnnexinV-AbFluor™647细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光）Cat#:KTA0004 Size:50T/100T AnnexinV-AbFluor™647细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光） 货号：KTA0004 批号：见产品标签 应用实验：适用细胞的流式细胞仪或荧光显微镜检测 荧光激发/发射：AnnexinV-AbFlourTM647:650nm/665nm,PI:535nm/617nm 保质期：4℃保存6个月原理凋亡是细胞程序性死亡的一种形式，它能从组织中清除不需要的、受损的或衰老的细胞。在正常细胞中，负性磷脂位于细胞膜的内侧，而膜的外表面则被不带电的磷脂（PS）所占据。当细胞进入凋亡状态后，带负电的PS从质膜的内叶向外叶运输，使PS暴露在细胞外环境中。人抗凝血剂AnnexinV是一种35-36kDaCa2+依赖性磷脂结合蛋白，对PS具有高度亲和力。AnnexinV标记有荧光团或生物素，可通过与外叶PS结合识别凋亡细胞。碘化丙啶（PI）是一种荧光核染料，对活细胞和凋亡细胞不敏感，但对死细胞有红色荧光染色，与细胞内的核酸结合紧密。AnnexinV-AbFlourTM647细胞凋亡检测试剂盒（红色荧光）为细胞凋亡提供了一种快速简便的检测方法。在提供的结合缓冲液中用AnnexinV-AbFlourTM647和PI染色细胞群后，早期凋亡细胞显示细胞膜暗红色荧光，死细胞显示细胞核红色荧光和细胞膜暗红色荧光。活细胞几乎没有荧光。检测可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行分析。包装清单试剂盒组分 规格 储存条件 50T 100T AnnexinVBindingBuffer(5×) 5mL 10mL 4℃AnnexinV-AbFluor™647 250μL 500μL 4℃避光保存PropidiumIodide(PI) 100μL 200μL 4℃避光保存自备耗材·离心机·移液器及吸头·去离子水·载玻片·荧光显微镜或流式细胞仪·96孔板（细胞培养用）试剂准备1×AnnexinVBindingBuffer：用去离子水把AnnexinVBindingBuffer(5×)稀释成1×AnnexinVBindingBuffer。AnnexinV-AbFlourTM647：即用型；使用前，平衡到室温。PropidiumIodide(PI)：即用型；使用前，平衡到室温。实验步骤A.流式细胞仪分析1．通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。2．4℃，300g离心5min收集1-2×105细胞，用冰预冷的PBS洗涤两次。注意：贴壁细胞使用胰酶消化后离心收集细胞，消化时间如果过长，易造成细胞膜结构损伤而出现细胞坏死的假阳性，所以需控制胰酶消化时间。3．用100µL1×AnnexinVBindingBuffer重悬细胞。4．每100µL细胞悬液中加入4-5µLAnnexinV-AbFlourTM647和1-2µLPI，轻柔混匀。5．室温避光孵育15min。6．孵育结束后加入400µL1×AnnexinVBindingBuffer，轻柔混匀后置于冰上。染色后30min内通过流式细胞仪分析细胞。使用650nm和535nm激发，665nm和617nm附近测量荧光。B.荧光显微镜分析1．对于悬浮细胞：(1)按照步骤A.1到步骤A.6的流式细胞分析步骤。(2)将步骤A.6的细胞悬浮置于玻片上，用盖玻片盖住细胞。尽快使用适当的滤镜通过荧光显微镜分析细胞。2．对于贴壁细胞，按照以下操作步骤：(1)细胞接种于爬片或腔室载玻片上，培养细胞。(2)通过所需方法诱导细胞凋亡，同时培养无诱导的对照培养物。(3)除去培养基，用PBS洗涤细胞两次。(4)准备工作液：每100µL1×AnnexinVBindingBuffer添加4-5µLAnnexinV-AbFlourTM647和1-2µLPI，轻柔混匀。注意：最佳浓度可根据具体实验要求确定。(5)在细胞中加入适量的工作液（确保工作液完全覆盖细胞），室温避光孵育15-30min。(可以在冰上孵育，以减缓凋亡过程，但孵育时间需延长到至少30min)。(6)用1×AnnexinVBindingBuffer洗涤细胞两次。注意：此步不要使用PBS洗涤细胞。(7)载玻片上添加一滴1×AnnexinVBindingBuffer，然后将细胞爬片置于在载玻片上。对于细胞腔室载玻片上的细胞，添加足够的1×AnnexinVBindingBuffer覆盖细胞。注意：也可使用抗荧光淬灭封片剂封片。(8)使用适当的滤光片在荧光显微镜下分析细胞。相关产品CatalogNo. ProductNameKTA0001 AnnexinV-AbFluor™405细胞凋亡检测试剂盒（蓝色荧光）KTA0002 AnnexinV-AbFluor™488细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）KTA0003 AnnexinV-AbFluor™555细胞凋亡检测试剂盒（橙色荧光）KTA2010 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（绿色荧光）KTA2011 TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒（橙色荧光）KTA4001 线粒体膜电位分析试剂盒（JC-1法）KTD102-CN 细胞凋亡检测鸡尾酒套装BMU104-CN SuperKi