新教材高中生物选择性必修3课件：3 2 2 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定(人教版)

第2课时将目的基因导入受体细胞和目

的基因的检测与鉴定知识点1知识点2知识点3课时作业随堂检测///////12356////////////////////////////网络构建·晨读必背4///////将目的基因导入受体细胞1联想质疑自主梳理微量注射器子房柱头花粉管通道单子叶植物T－DNA染色体DNAT－DNA圆形小片转化细胞农杆菌提醒：农杆菌转化法中的两次拼接、两次导入(1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T-­DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T­-DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。(2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T­-DNA导入受体细胞。(1)花粉管通道法是我国科学家独创的一种方法，主要适用于双子叶植物和裸子植物。()提示：农杆菌转化法主要适用于双子叶植物和裸子植物。(2)农杆菌侵入植物细胞后，其Ti质粒上的T－DNA能转移到被侵染的细胞，并且整合到该细胞的染色体DNA上。()(3)培育转基因动物时，常选择受精卵作为受体细胞，利用显微注射法将目的基因直接注入受精卵中。(

)(4)将目的基因导入原核细胞时，通常用大肠杆菌作为受体细胞，并需要用Ca2＋处理大肠杆菌，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的状态。(

)×√√√[典型例题]

(2021·黑龙江哈尔滨三中期末)下列关于目的基因导入受体细胞的方法中，不正确的是(

) A.我国利用花粉管通道法培育了转基因抗虫棉 B.用Ca2＋处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞 C.将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是显微注射法 D.利用农杆菌转化法培育大多单子叶转基因植物

解析目前我国的转基因抗虫棉是利用花粉管通道法培育的，A正确；为使大肠杆菌易吸收DNA分子，应先用氯化钙溶液进行处理，使大肠杆菌处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B正确；显微注射技术是将目的基因导入动物细胞最为有效的一种方法，C正确；农杆菌对大多数单子叶植物没有侵染能力，D错误。D★显微注射法★花粉管通道法目的基因导入植物细胞时常选用植物的体细胞作为受体细胞，主要是因为植物体细胞具有全能性，且取材方便，而动物的体细胞不易表达全能性，故而对动物细胞来说，常选用全能性最高的受精卵为受体细胞。

1.将目的基因导入植物细胞，通常有哪些方法？

提示：花粉管通道法和农杆菌转化法。2.将目的基因导入动物细胞时，受体细胞通常选择什么细胞？采用何种方法导入？

提示：动物受精卵，显微注射法。目的基因的检测与鉴定2联想质疑自主梳理PCRmRNA抗原—抗体杂交(1)常使用PCR等技术，从分子水平上检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或Bt基因是否转录出mRNA。()(2)从分子水平上检测目的基因是否翻译出相关蛋白质的方法之一是利用抗原—抗体杂交技术。()(3)可以通过盐碱地栽培试验从细胞水平上检测转基因抗盐碱作物是否具有抗盐碱的特性以及抗盐碱的程度。()提示：作物抗盐碱栽培试验属于个体生物学水平。√√×[典型例题]

目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定关键步骤的是(

) A.检测受体细胞是否有目的基因

B.检测受体细胞是否有致病基因 C.检测目的基因是否转录mRNA D.检测目的基因是否翻译蛋白质

解析检测受体细胞中是否有目的基因是鉴定和检测的第一步，但即便受体细胞中存在目的基因，不能说明目的基因一定会稳定遗传并表达，A错误；目的基因不一定是致病基因，B错误；检测目的基因是否转录mRNA，但能否翻译成相应的所需蛋白质却不一定，所以该步不是最关键的步骤，C错误；检测目的基因是否翻译蛋白质是检测目的基因是否表达的最后步骤，如果存在该蛋白质，说明目的基因能在受体细胞内稳定存在并能表达，D正确。D[变式训练]PCR在生物学实验中具有非常广泛的用途，下列不属于PCR的应用范畴的是(

) A.扩增和筛选目的基因

B.检测目的基因是否导入受体细胞 C.检测目的基因是否转录出mRNA D.检测目的基因是否翻译出蛋白质

解析检测目的基因是否翻译出蛋白质，常使用抗原—抗体杂交的方法，D错误。D★转Bt抗虫玉米1.目的基因已经插入受体细胞的染色体DNA上，为什么还要进行转录和翻译水平的检测？

提示：插入的目的基因不一定会表达。2.从目的基因表达的角度上看，目的基因的检测与鉴定主要包括哪些步骤？检测的技术手段分别是什么？

提示：①检测目的基因是否转录出mRNA：PCR等技术；②检测目的基因是否翻译出特定的蛋白质：抗原—抗体杂交技术。DNA片段的扩增及电泳鉴定3联想质疑自主梳理1.DNA片段的扩增解聚与结合30微量移液器微量离心管离心机反应液2.PCR扩增产物的电泳鉴定琼脂糖凝胶电泳凝胶的浓度DNA分子的大小和构象紫外灯琼脂糖核酸染料加样孔电泳缓冲液加样孔指示分子大小的标准参照物指示剂紫外灯(1)利用PCR扩增DNA片段时，在第一轮循环的变性之前，通常要用94℃的高温处理反应液5min进行预变性。()(2)PCR中离心的目的是让反应组分在离心管中分层分布。()提示：PCR中离心的目的是让反应组分集中分布在离心管的底部。(3)电泳鉴定PCR产物时，应在每个加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。(

)提示：电泳鉴定PCR产物时，应在一个加样孔中加入指示分子大小的标准参照物，其他加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。√××[典型例题]

(2021·山东潍坊期中改编)下列关于PCR的说法，错误的是(

)A.PCR是体外复制DNA的技术B.PCR过程中只需要一个模板DNA、两种引物分子、大量脱氧核苷酸原料C.TaqDNA聚合酶要具有耐高温的特点D.PCR利用了DNA的热变性原理解析PCR是体外复制DNA的技术，A正确；PCR过程中需要一种模板DNA、两种引物分子、大量脱氧核苷酸原料，还需要扩增缓冲液、TaqDNA聚合酶等，B错误；TaqDNA聚合酶具有耐高温的特点，C正确；PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合，D正确。B[变式训练]

(2021·北京四中期末)用PCR方法检测转基因植株是否成功导入目的基因时，得到以下电泳图谱，其中1号为DNA标准样液(Marker)，10号为蒸馏水。PCR时加入的模板DNA如图所示。据此做出分析不合理的是(

)A.PCR产物的分子大小在250至500bp之间B.3号样品为不含目的基因的载体DNAC.9号样品对应植株不是所需的转基因植株D.10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰B解析PCR过程中，可以通过设计特定的引物来扩增特定的DNA片段。4～9号是转基因植株，理论上应包含目的基因，结合2号野生型和10号蒸馏水组的结果，推测包含目的基因的片段大小应为250～500bp，A正确；3号PCR结果包含250～500bp片段，应包含目的基因，B错误；9号PCR结果不包含250～500bp片段，所以不是所需转基因植株，C正确；10号放入蒸馏水，可排除反应体系等对结果的干扰，由图可知，10号的电泳结果能确定反应体系等对实验结果没有干扰，D正确。★微量移液器(1)为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量移液管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压蒸汽灭菌。(2)在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。1.PCR过程需要解旋吗？是通过什么手段实现的？提示：需要；高温。2.加液时，都需要加入哪些组分？提示：扩增缓冲液、4种脱氧核苷酸、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、水等。网络构建·晨读必背4思维导图PCR显微注射法PCR抗原—抗体抗虫接种晨读必背1.转化是指目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.将目的基因导入植物细胞的常用方法除了花粉管通道法之外，还有农杆菌转化法等。3.将目的基因导入动物受精卵最常用的一种方法是利用显微注射直接将目的基因注入动物的受精卵中。4.在基因工程操作中，常用原核生物作为受体细胞，其中大肠杆菌的应用最为广泛。一般先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。5.在电场的作用下，DNA等带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程称为电泳。随堂检测51.下图表示用化学方法合成目的基因Ⅰ的过程。据图分析下列叙述正确的是(

)CA.过程①需要DNA连接酶B.过程②需要限制酶C.目的基因Ⅰ的碱基序列是已知的D.若某质粒能与目的基因Ⅰ重组，则该质粒和Ⅰ的碱基序列相同解析过程①发生碱基互补配对，不需要DNA连接酶，A错误；过程②发生碱基互补配对，不需要限制酶，B错误；用人工的方法化学合成目的基因必须知道目的基因的碱基序列，C正确；某质粒能与目的基因重组，只需要有相同的黏性末端即可，不必所有序列都相同，D错误。2.(2021·山东济南章丘四中质检)下列有关体内DNA复制与PCR比较的叙述，错误的是(

) A.二者子链的延伸方向相同，均为5′端→3′端 B.二者均需要解旋酶破坏氢键来实现解旋 C.体内DNA复制需要能量，PCR反应也需要能量 D.二者遵循的碱基互补配对方式相同

解析DNA体内复制与利用PCR扩增DNA时，子链的延伸方向相同，均为5′端→3′端，A正确；PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，在高温条件下氢键断裂，B错误；DNA体内复制与利用PCR扩增DNA时都需要能量，但两者所需能量来源不同，C正确；DNA体内复制与利用PCR扩增DNA时，遵循的碱基互补配对方式相同，D正确。B3.(2021·河北名校联盟)下列用于判断目的基因是否转移成功的方法，不属于分子水平的检测的是(

) A.通过观察害虫吃棉叶是否死亡 B.通过PCR检测棉花的染色体DNA上是否插入抗虫基因 C.检测转基因生物中是否转录出相应的mRNA D.利用抗原—抗体杂交检测从转基因生物中提取的蛋白质是否翻译成功

解析通过观察害虫吃棉叶是否死亡，属于个体生物学水平上的鉴定，A正确；通过PCR检测棉花的染色体DNA上是否插入抗虫基因，属于分子水平的检测，B错误；检测转基因生物中是否转录出相应的mRNA，属于分子水平的检测，C错误；采用抗原—抗体杂交检测目的基因是否翻译成蛋白质，属于分子水平的检测，D错误。A4.(2021·中原名校联考)

农杆菌转化法是植物基因工程的常用方法，如图为这种方法的示意图，回答下列问题：(1)一般情况下农杆菌不能侵染的植物是________，利用农杆菌自然条件下侵染植物的特点，能将目的基因导入植物细胞。具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在T－DNA，它具有可转移至受体细胞并整合到受体细胞________上的特点，因此只要将目的基因插入________________________(部位)上即可。(2)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞除可采用农杆菌转化法之外，还可采用________________等。答案(1)单子叶植物染色体DNA

Ti质粒的T－DNA

(2)花粉管通道法解析(1)一般情况下，农杆菌不能侵染单子叶植物，但其可侵染双子叶植物和裸子植物。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T－DNA转移至被侵染的细胞，并将其整合到该细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞，并将其插入到植物细胞的染色体DNA上，使目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(2)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞除了可采用农杆菌转化法，还可采用花粉管通道法等。课时作业6知识点1将目的基因导入受体细胞1.(2021·石嘴山市期末)利用农杆菌转化法将目的基因转入受体细胞后，目的基因插入的位置是(

) A.Ti质粒上

B.受体细胞染色体DNA上 C.T­DNA上

D.农杆菌的拟核

解析植物基因工程中，可以用土壤农杆菌作为转移目的基因表达载体的工具，土壤农杆菌细胞内含有Ti质粒。农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-­DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上，故选B。BD2.(2021·河北正定调研)土壤农杆菌侵染植物细胞时，Ti质粒上的T-­DNA片段转入植物的基因组.利用农杆菌以Ti质粒作为运载体进行转基因，下列相关叙述正确的是(

) A.目的基因应插入T­DNA片段外，以防止破坏T­-DNA B.用Ca2＋处理农杆菌，以利于其侵染植物细胞 C.Ti质粒是一种环状DNA分子，属于细菌的拟核DNA D.T­-DNA片段有利于介导外源DNA整合到植物的染色体

解析在农杆菌转化法中，需要将目的基因插入到T­-DNA片段上，A错误；农杆菌转化法中不需要用Ca2＋处理农杆菌，应直接利用土壤农杆菌感染植物细胞，B错误；Ti质粒是一种环状DNA分子，是存在于细菌拟核DNA之外的DNA，C错误；T­-DNA片段有利于介导外源DNA整合到植物的染色体，D正确。3.(2021·山东济南调研)下列关于目的基因导入受体细胞的描述，正确的是(

)A.可以通过显微注射法直接将目的基因导入动物的受精卵中B.通过基因工程大量获得胰岛素时，受体细胞选择大肠杆菌比酵母菌更有优势C.可以用PEG处理大肠杆菌将目的基因导入其细胞内D.可以使用病毒将目的基因导入受体细胞解析目的基因导入受体细胞前必须进行基因表达载体的构建，不能直接将目的基因导入，A错误；酵母菌细胞中有多种细胞器，作为受体细胞生产胰岛素(分泌蛋白)比大肠杆菌更有优势，B错误；大肠杆菌作为受体细胞时应使用Ca2＋进行处理，C错误；可以利用部分病毒将自身DNA整合到宿主细胞染色体上的特点构建基因表达载体，并通过病毒的侵染将目的基因导入相关受体细胞，D正确。DA4.(2021·河北唐山期末)下列有关基因工程中目的基因的正确叙述是(

)A.用同种限制酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获相同黏性末端B.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达C.目的基因与载体结合的过程发生在细胞内D.目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生基因突变解析每一种限制酶能识别特异性的碱基序列，并在特定位点进行切割，所以用同种限制酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获相同黏性末端，A正确；目的基因进入了受体细胞不一定能成功实现表达，还要通过进一步检测和鉴定才能确定目的基因是否表达，B错误；目的基因与载体结合的过程发生在细胞外，C错误；基因工程的原理是基因重组，不是基因突变，所以目的基因导入受体细胞后，受体细胞即发生了基因重组，D错误。知识点2目的基因的检测与鉴定5.(2021·黑龙江哈尔滨期末)利用基因工程技术将生长激素基因导入绵羊体内，转基因绵羊生长速率比一般的绵羊提高30%，体型大50%，在基因操作过程中生长激素基因的受体细胞最好采用(

)

A.乳腺细胞

B.体细胞 C.受精卵

D.精巢

解析转基因羊全身所有的组织细胞均来自受精卵的有丝分裂，遗传物质都与受精卵相同，且受精卵体积较大，容易操作，也能保证发育成的个体的所有细胞都含有生长激素基因，C正确。C6.(2021·山东聊城期末)利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如下图所示，有关叙述正确的是(

)AA.过程①需使用反转录酶B.过程②利用PCR扩增CarE基因需使用解旋酶和耐高温的DNA聚合酶C.过程③可用NaCl溶液处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞D.过程④可利用抗原—抗体杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞解析过程①表示反转录，需要反转录酶的催化，A正确；过程②表示目的基因的获取，在利用PCR技术对获取的目的基因进行扩增的过程中，不需要使用解旋酶，解旋是通过高温解链实现的，B错误；过程③表示将目的基因导入受体细胞，若受体细胞为大肠杆菌细胞，则需要用CaCl2溶液处理，使之成为感受态细胞，C错误；过程④可利用PCR技术，鉴定目的基因是否已导入受体细胞，D错误。7.(2021·黑龙江哈尔滨期末)科学家在河南华溪蟹中找到了金属硫蛋白基因，并以质粒为载体，采用转基因方法培育出了汞吸收能力极强的转基因烟草。下列有关说法正确的是(

) A.培育转基因烟草时选用的受体细胞一定是受精卵 B.金属硫蛋白基因需要插入到质粒上再转移到受体细胞中 C.金属硫蛋白基因必须位于重组质粒的起始密码和终止密码之间才能进行表达 D.金属硫蛋白基因编码区的碱基对数目等于金属硫蛋白中氨基酸数目的3倍B解析由于植物细胞具有全能性，因此植物基因工程的受体细胞可以是受精卵或体细胞，A错误；金属硫蛋白基因需插入到质粒的T-­DNA上，再转移到受体细胞中，B正确；金属硫蛋白基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行表达，C错误；金属硫蛋白基因属于真核生物的基因，其编码区是不连续的，包括了外显子和内含子，故其编码区的碱基对的数目大于金属硫蛋白中氨基酸数目的3倍，D错误。知识点3

DNA片段的扩增及电泳鉴定8.(2021·北京海淀区模拟)在基因工程操作中，科研人员利用识别两种不同序列的限制酶(R1和R2)处理基因表达载体，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，结果如图所示。以下相关叙述错误的是(

)DA.该载体最可能为环状DNA分子B.两种限制酶在载体上各有一个酶切位点C.限制酶R1与R2的酶切位点最短相距约200bpD.限制酶切割时会导致作用位点的氢键和肽键断裂解析当仅用一种限制酶切割载体时，仅产生一种长度约为800bp的DNA片段，因此该载体最有可能为环状DNA分子，A正确；两种限制酶同时切割时则产生两种长度的DNA片段，所以两种限制酶在载体上各有一个酶切位点，B正确；两种限制酶同时切割时则产生长度约为600bp和200bp的两种DNA片段，所以两种限制酶的酶切位点最短相距约200bp，C正确；限制酶切割DNA分子，破坏的是作用位点的磷酸二酯键，D错误。9.(2021·天津静海一中期末)研究人员用图1中质粒和图2中含目的基因的片段构建重组质粒(图中标注了相关限制酶切割位点)，将重组质粒导入大肠杆菌后进行筛选及PCR鉴定。以下叙述不正确的是(

)CA.构建重组质粒的过程应选用BclⅠ和Hind

Ⅲ两种限制酶B.使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组C.能在添加四环素的培养基上生存一定是含有重组质粒的大肠杆菌D.利用PCR鉴定含目的基因的大肠杆菌时应选用引物甲和引物丙解析选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHⅠ可能使质粒中的两种标记基因都破坏，因此只能选BclⅠ和Hind

Ⅲ两种限制酶切割，A正确；使用DNA连接酶将酶切后的质粒和目的基因片段进行重组，B正确；能在添加四环素的培养基上生存的也可能是含有普通质粒的大肠杆菌，C错误；PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链，故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙，D正确。10.(2021·福建福州期末)图甲表示某环状DNA分子经限制性内切核酸酶(EcoRⅠ)完全酶切后的片段电泳结果。若改变条件使其酶切不充分就有可能获得如图乙所示的电泳结果(kb即千个碱基对)。下列叙述错误的是(

)DA.该DNA分子全长至少为7kb，该DNA分子中至少含有4个EcoRⅠ酶切位点B.反应时间越长，得到图甲结果的可能性越大C.限制性内切核酸酶主要来自原核生物，化学本质都是蛋白质D.适当增加EcoRⅠ浓度，更可能得到图乙的结果解析环状DNA分子经限制性内切核酸酶(EcoRⅠ)完全酶切后得到4.0kb、1.5kb、1.0kb和0.5kb四种长度的DNA片段，说明该DNA分子全长至少为7kb，环状DNA分子，可以被限制性核酸内切酶(EcoRⅠ)完全酶切后得到至少4个DNA片段，说明该DNA分子中至少含有4个EcoRⅠ酶切位点，A正确；反应时间越长，DNA被切割越彻底，得到图甲结果的可能性越大，B正确；限制性内切核酸酶主要来自原核生物，该酶的化学本质是蛋白质，C正确；适当增加EcoRⅠ浓度，可得到图甲的结果，D错误。11.(2021·北京通州区期末)如图表示基因工程中获取目的基因的示意图，下列叙述错误的是(

)CA.①过程的完成需要逆转录酶B.②过程需用限制性内切核酸酶C.目前获取目的基因的方法只有两种D.cDNA文库的构建需要提前了解目的基因的有关信息解析①为逆转录过程，完成该过程需要逆转录酶，A正确；②表示将DNA分子切割，因此需用限制性内切核酸酶，B正确；目前获取目的基因的方法有从cDNA文库中获取、从基因文库中获取、利用PCR技术扩增等，C错误；cDNA文库的构建需要首先获得相应的mRNA，需要提前了解能表达目的基因的细胞等有关信息，D正确。12.(2021·黑龙江大庆期末)科学家通过基因工程，将苏云金芽孢杆菌的Bt毒蛋白基因转入到普通棉株细胞内，并成功实现了表达，从而培育出了能抗棉铃虫的棉花植株——抗虫棉。其过程大致如图所示：(1)从苏云金芽孢杆菌中获取Bt毒蛋白基因，需要用到的工具是________，可采用________技术对Bt毒蛋白基因进行大量扩增。(2)基因表达载体的组成有Bt毒蛋白基因、启动子、终止子以及________等，启动子是________识别和结合的部位。(3)用Ti质粒作为载体，是因为Ti质粒上有________，它能将Bt毒蛋白基因整合到棉花细胞的________上。(4)将Bt毒蛋白基因导入棉花细胞内采用的方法是________。将基因表达载体转入农杆菌，首先必须用________处理农杆菌。(5)检测Bt毒蛋白基因在抗虫棉中是否成功表达，在分子水平上的检测方法是________________；要确定抗虫棉是否具有抗虫特性，还需要进行________水平的鉴定。答案(1)限制酶PCR

(2)标记基因RNA聚合酶

(3)T-­DNA染色体DNA

(4)农杆菌转化法Ca2＋

(5)抗原—抗体杂交个体生物学解析(1)获取Bt毒蛋白基因，需要用到限制酶，可采用PCR技术对Bt毒蛋白基因进行大量扩增。(2)一个基因表达载体的组成必须有启动子、终止子、目的基因、标记基因等；启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位。(3)Ti质粒上有T­-DNA，可用Ti质粒作为载体，它能将Bt毒蛋白基因整合到棉花细胞的染色体DNA上。(4)将Bt毒蛋白基因导入棉花细胞内常采用农杆菌转化法。将基因表达载体转入农杆菌，首先必须用Ca2＋处理农杆菌，使农杆菌处于感受态。(5)检测Bt毒蛋白基因在抗虫棉中是否成功表达，在分子水平上的检测方法是抗原—抗体杂交；要确定抗虫棉是否具有抗虫特性，还需要进行个体生物学水平的鉴定。13.(2021·山东曲阜师大附中期末)人类胰岛素基因位于第11号染色体上，长度8416bp，包含3个外显子和2个内含子，人类胰岛素的氨基酸序列已知。回答相关问题：(1)上图是利用PCR技术获取人胰岛素基因的方法，除了此方法外，还可以利用的方法是___________________________________________________