组胚课件绪论（新）学习资料

IntroductionofHistology&Embrology绪论福建医科大学人体解剖学与组织胚胎学系陈勇2一、组织学的内容和意义研究水平：组织、细胞、亚细胞和分子组织学（histology）：研究机体微细结构及其相关功能的科学

细胞细胞外基质组织上皮组织结缔组织肌组织神经组织器官和系统人体31.促进了生理学的进步学习组织学的意义3.促进人类对自身的深入了解2.是病理学的基础4二、组织学的发展简史和当代组织学1.光镜的发明与细胞、组织概念的提出16世纪末荷兰人发明→1665年胡克命名“细胞”→1801年比沙提出“组织”概念2.细胞学说的提出和组织学的建立：发明：1932年卢斯卡、科诺尔，使分辨率提高到0.2nm超薄切片术（50－80nm）超微结构（ultrastructure）：即细胞膜、细胞器、染色体等亚细胞结构3.电镜的发明和超微结构的发现：4.当代组织学：新仪器、新技术（免疫组化和原位杂交）使组织学研究进入分子水平5光镜电镜6三、组织学的学习方法1.审视角度组织水平：层次顺序、特征性结构和细胞细胞水平：主要细胞的分布、结构特点（含重要细胞的超微结构）及功能2.形态和结构相统一结构是功能的基础，功能是结构的必然表现3.培养观察能力：重视实习课和图像观察4.培养空间思维能力：将二维图形还原为三维构像7四、组织学的研究技术光镜技术：石蜡切片术电镜技术：透射电镜和扫描电镜组织化学术：免疫组化和原位杂交放射自显影术图像分析术细胞培养和组织工程8石蜡切片术（paraffinsectioning）：取材、固定、脱水、包埋、切片（5～10µm厚）、染色、封片9石蜡切片术（paraffinsectioning）：取材、固定、脱水、包埋、切片（5～10µm厚）、染色、封片苏木精（Hematoxylin）伊红（Eosin）碱性染料使细胞核内的染色质和胞质内的核糖体着紫蓝色酸性染料使胞质和细胞外基质中的成分着红色苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE染色法）嗜碱性嗜酸性10HE染色，垂体远侧部11涂片：用于液态组织，如血液，精液12铺片(Wholemount):用于很薄的组织，如肠系膜。13磨片：用于骨、牙等硬组织14透射电镜（transmissionelectronmicroscope）：观察细胞内部结构扫描电镜（scanningelectronmicroscope)：观察组织或细胞表面的立体结构15浆细胞透射电镜图16扫描电镜图，血细胞17组织化学术（histochemistry）为应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学的原理和技术，与组织学技术结合而产生，在组织切片显示某种物质的存在和分布状态分类：一般组织化学术免疫组织化学术原位杂交术18一般组织化学术：组织中的某种结构成分与所加试剂发生化学反应、并呈现某种颜色，在显微镜下可观察到糖类：PAS（过碘酸希夫）反应，显示多糖和糖蛋白，呈紫红色糖多醛品红硫酸复合物（希夫试剂，无色）过典酸紫红色反应产物19图9PAS反应，小肠上皮杯状细胞的黏原颗粒20免疫组织化学（immunohistochemistry）（1）定义：根据抗原、抗体特异性结合原理，检测组织切片中的肽和蛋白质（2）原理：用标记的抗体与组织中的抗原结合，标记物可于显微镜下观察。标记物有荧光素（荧光显微镜观察）、辣根过氧化物酶（光镜或电镜观察）、胶体金（多用于电镜观察）21图10免疫组织化学原理模式图22图11免疫组织化学（荧光素标记）毛细血管内皮细胞呈vWF阳性23图12免疫组织化学（辣根过氧化物酶标记）胰岛B细胞呈胰岛素阳性24图13免疫组织化学电镜图示上皮细胞膜MAM－6蛋白（A胶体金标记B辣根过氧化物酶标记）25原位杂交术（insituhybridization）（1）定义：即核酸分子杂交组织化学术，检测基因（DNA片段）的有无、基因的表达活性（mRNA）（2）原理：用带标记物的已知碱基顺序的核酸探针与细胞内待测核酸按碱基配对原则进行特异性原位结合（杂交），并通过对标记物的显示而获知待测核酸的有无及相对量（3）常用标记物有放射性核素和地高辛26图14原位杂交主动脉平滑肌细胞呈弹性蛋白mRNA阳性27放射自显影术（autoradiography）概念：通过活细胞对某种放射性物质的特异性摄入，以显示该物质在组织和细胞内的分布、含量和代谢过程，以反映细胞的功能状态应用举例①用3H标记的胸腺嘧啶核苷研究DNA合成和细胞增殖状态②用125I观察甲状腺滤泡内碘化部位28图15放射自显影示幽门部胃小凹底的干细胞

（3H标记的胸腺嘧啶核苷标记）29图像分析术（imageanalysis）又称形态计量术（morphometry）：应用数学和统计学原理对组织切片提供的平面图像进行分析，从而获得立体的组织细胞内有形成分的数量、体积、表面积等参数，从量的角度显示结构与功能的关系体视学（stereology）：根据连续的组织切片应用计算机进行三维重建，以获得微细结构的立体模型30图16计算机三维重建示肝小叶血管31细胞培养术（cellculture）（1）定义：把从机体取得的细胞在体外模拟体内的条件下进行培养；培养组织块或器官则称组织培养术或器官培养术（2）用途：用于研究细胞、组织的代谢、增殖、分化、形态和功能变化，各种理化因子对活细胞的影响（3）培养条件：营养、生长因子、pH值、渗透压、O2和CO2浓度、温度，控制污染（4）用相差显微镜观察32图17体外培养的HeLa细胞相差显微镜图33图18体外培养的平滑肌细胞（免疫组织化学染色显示肌动蛋白）34组织工程（tissueengineering）：用细胞培养术在体外模拟构建机体组织或器官的技术正在构建的有皮肤、软骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以组织工程皮肤较为成功，已成为商品用于治疗烧伤、皮肤静脉性溃疡等疾病35研究包括四个方面：①种子细胞，即增殖旺盛的细胞，多为干细胞②细胞外基质，可用生物材料（如牛胶原）和人工合成高分子材