DB22-T3316-2021-滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程-吉林省

ICS65.020DB22CCSB15吉林省地方标准DB22/T3316—2021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程CodeofpracticeforproductionofdiapauseTrichogrammadendrolimi吉林省市场监督管理厅发布DB22/T3316—2021前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：吉林农业大学。本文件主要起草人：张俊杰、杜文梅、阮长春、张雪。IDB22/T3316—2021滞育松毛虫赤眼蜂生产技术规程1范围本文件确立了滞育松毛虫赤眼蜂（TrichogrammadendrolimiIshii）生产的程序，规定了前期准备、赤眼蜂繁育、精选与储存等阶段的操作指示，描述了记录档案等追溯方法。本文件适用于利用柞蚕卵繁育的滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.13.23.3滞育诱导diapauseinduction赤眼蜂进入稳定滞育到解除滞育前的阶段。滞育解除diapausetermination图1滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产流程1DB22/T3316—20215.1厂房及规模按照150亿头滞育松毛虫赤眼蜂生产规模应包括：a)蜂种繁育室不低于20m；2b)暖茧车间不低于300m；2c)采卵室不低于50md)洗卵室不低于20m2；；2e)消毒及晾干室不低于25m；2f)接种室不低于10mg)暗室不低于50mh)发育室不低于50m2；2；2；2i)保鲜冷藏室不低于100m；j)物品保存库不低于20m2。5.2设备低温生化培养箱、药品保存箱、搅拌器、脱水机、烘干机、柞蚕卵色选机、空调、排风机、电暖气、加湿器、温湿度自控仪、电脑及打印机、发育盘架、手推运输车。5.3常用药品及材料5.3.125g/L～30g/L苯扎溴铵溶液（新洁尔灭消毒液）。5.3.2孔径为0.15mm的纱网。生产前1年的7月下旬至8月初，在自然条件下未放蜂玉米田采集玉米螟卵块，以半山区近水边为宜。采集的玉米螟卵块带回室内发育培养，将寄生变黑的卵块单独装入试管，羽化出蜂后引单头雌蜂，放入装有100粒米蛾卵的试管（10mm×70mm）转接寄生。发育条件为（25±1）℃、RH（75±5）%、光照16h、黑暗8h。鉴定纯化的松毛虫赤眼蜂，经3代～5代筛选繁殖，建立实验种群后保存使用：a)将纯化的松毛虫赤眼蜂蜂种在(25±1)℃、RH(75±5)%条件下，按蜂卵（柞蚕卵）比2:1接种24h后去除种蜂；b)接蜂后发育36h～46h到幼虫中期，置入12℃、RH(75±5)%的条件下，滞育诱导30d，赤眼蜂滞育；2DB22/T3316—2021c)将滞育持续期的赤眼蜂置入(3±1)℃、RH(75±5)%的条件下，进行滞育解除60d～90d；d)经10℃48h、15℃24h过渡后，按光照16h，(25±1)℃、RH(75±5)%；黑暗8h，(20±1)℃、RH(75±5)%，变温发育至出蜂。5.5柞蚕茧5.5.1备茧5.5.1.1备茧时期在生产前一年的11月～12月份开始按预定计划备茧。5.5.1.2茧质要求5.5.1.2.1健康雌茧率≥90%；5.5.1.2.2雄茧率≤7%；5.5.1.2.3死伤茧率≤3%；5.5.1.2.4割口茧率≤8%；5.5.1.2.5发育蛹和嫩蛹≤5%；5.5.1.2.6茧层率≥10%，无薄皮茧、瘪茧；5.5.1.2.7茧干燥，未在-3℃以下低温储存。5.5.1.3备茧数量按每繁150亿头松毛虫赤眼蜂用茧15000kg计算。5.5.2蚕茧保存5.5.2.1保存温度(3±1)℃、RH(60±5)%。5.5.2.2适当通风换气，保持空气含氧量。5.5.2.3防止接触有毒有害物质。在生产前1周，将所有繁蜂车间及繁蜂工具，进行集中消毒。消毒方法为如下：c)将繁蜂工具等置于繁蜂车间内，用毒消散或硫磺等熏蒸消毒。保持室温24℃以上，RH75%以上，时间24h。3DB22/T3316—2021b)接蜂时间：24h；c)发育条件：(25±1)℃、RH(75±5)%、光照16h、黑暗8h；d)复壮周期：30d。6.2.2扩繁以柞蚕卵为寄主，将蜂种扩繁2代～3代：a)接蜂比例：1：30（蜂种寄生柞蚕卵：新鲜卵）；b)接蜂时间：24h；c)接蜂条件：全黑暗，(25±1)℃、RH(75±5)%；d)发育条件:同6.2.1c)；e)将末1代蜂种发育至幼虫中后期置于(3±1)℃、RH(75±5)%条件下冷藏，冷藏时间≤15d。6.3寄主卵6.3.1暖茧发蛾暖茧室保持18℃～22℃，RH(70±5)%，20d～25d后柞蚕茧羽化出蛾。6.3.2收蛾在柞蚕蛾羽化期内，随时采收刚羽化（展翅前）雄蛾，避免交尾，次日清晨人工收雌蛾，用于当天繁蜂或储存在(3±1)℃的冷库中备用。6.3.4洗卵用搅拌器将卵与蛾腹内杂物搅拌分离，漂净杂物，然后反复用清水冲洗至卵粒无杂质。消毒后的新鲜卵用纱网袋装好，用脱水机进行初步脱水，然后用烘干机烘干，温度不超过25℃～28℃。蜂种卵与新鲜柞蚕卵按1:25～1:30比例进行接蜂。当蜂种羽化25%～30%时，将种蜂卵均匀撒在接蜂盘中，铺上孔径为2mm的纱网，再将新鲜卵平铺到纱网上，送入(25±1)℃、RH(75±5)%的暗室内产卵寄生，36h~48h后，去除蜂种，标明日期送入发育室发育。4DB22/T3316—2021接蜂后的寄生卵分批次送入(25±1)℃、RH(75±5)%，自然光照条件下的发育室，继续发育12h~24h，镜检至幼虫中后期。6.6滞育诱导将发育到幼虫中后期的松毛虫赤眼蜂，在10℃～12℃、RH(75±5)%的全暗条件下，平铺在卵盘内，卵厚3cm～4cm，每天翻动两次，诱导25d～30d后，赤眼蜂滞育。6.7滞育解除诱导滞育结束后即进入到滞育持续期，将滞育的赤眼蜂转入(3±1)℃、RH(75±5)%的黑暗条件下滞育解除，时间70d～90d。6.8变温发育滞育解除后的赤眼蜂采用分步渐变加温的方式进行发育：a)在(10±1)℃、RH(75±5)%全暗条件下加温48h；b)在（15±1）℃、RH(75±5)%全暗条件下加温24h；c)在日间25℃下16h、夜间20℃下8h，RH(75±5)%室内条件下发育至蛹后期。7精选与储存7.1精选将发育至蛹后期的赤眼蜂寄生卵，用绿卵色选机去除未寄生卵、劣质卵、绿卵及其它杂质。7.2储存将精选后的赤眼蜂转入(3±1)℃、RH(75±5)%的保鲜冷藏室储存备用，储存时间≤7d。建立滞育松毛虫赤眼蜂工厂化生产档案，对整个生产过程进行详实记录，保存2年以上，做到可b)每批次滞育赤眼蜂的生产日期；c)每批次滞育赤眼蜂的滞育率和解除滞育率；d)每批次滞育赤眼蜂的加温日期。5DB22/T3316—2021AA附录A（资料性）松毛虫赤眼蜂形态学鉴定方法A.1制作鉴定玻片将用浓度75%～95%酒精浸泡的雄性赤眼蜂标本按下列方法制作为玻片：a)在5%的KOH溶液中浸泡8h～15h，并用水清洗干净，置于载玻片上；b)在解剖镜下，用昆虫针挑取雄蜂的外生殖器，清除其他组织，盖好盖玻片；c)在显微镜下观察并