小麦粉及其制品中过氧化苯甲酰的测定 编制说明

1《小麦粉及其制品中过氧化苯甲酰的测定》编制说明准（项目计划编号：20233880-T-449）由河南省食品和盐业检验技术研究院（河南省粮油饲料产品质量监督检验中心）作为第一起草单位牵头起草，协作单位包括国家粮食和物资储备局科学研究院、西藏自治区粮食局粮油中心化验室、上海科茂粮油食品质量检测有限公司、山东省粮油检测中心、河南工业大学、广东省粮食科学无过氧化苯甲酰，作为一种关键的食品添加剂，具备抑制酶的活性以避免蛋白质的分解、以及促进小麦粉熟化等特性，从而提高小我国小麦粉产品监督检验作出了很大的贡献。但有大量行色谱标准方法存在着一些技术缺陷，影响了检测结果2作组召开第一次标准修订线上工作会议，讨论修改了标准修并进行了方法学验证（包括检测方法的线性范围、定量限、检出主要起草人为孙志远、王佳雅、丁云杰、路辉丽、高海军、谢刚、彭星星、尹成华、王雅楠、蒋朋丽、李敏、任凌云、刘晓斌、朱雪庆、何咏怡。其中尹成华、孙志远、王佳雅等负责标准调研、研究方案设计、组织实施、标准文本的编写等工作，丁云杰、高海军、谢刚等参与标准调研及研究方案的制定、标准文本的编写工作；路辉丽、彭星星、王雅楠等参与标准研究工作计划的制定、实施、标准文本的编写等工作，其他起草人主要负责标准涉及到标准方法的验证、标准文本审核与技3进行编制的，标准框架、结构和内容等方面均符合上述标准要求。本标准建立的方本标准在制定过程中遵循“科学性、适用性、规范发、条件优化、性能考察等工作，并本文件描述了甲酰的气相色谱法和液相色谱法。本文件适用于本标准气相色谱方法原理为将试样中的过氧化苯甲酰用硫代硫酸钠还原生成苯甲酸。试样中的苯甲酸经提取净化后，用气相色谱仪测其含量，再折算成过氧化苯本标准液相色谱方法原理为过氧化苯甲酰经甲醇提取，被碘化钾还原生成苯甲1增加了小麦粉制品的测定，并增加了对应的样品制备方23将气相色谱法作为第一法，液相色谱法作为第二法,取消4②气相色谱法增加了毛细管柱色谱条件,液相色谱法增加4本标准方法的检出限、定量限、正确度、精密度、回收率等方法学参数经过实验室内和实验室间验证，符合GB5009.295－更是日常检测试样中过氧化苯甲酰使用较多的方法。在使用温度的降低，试样中苯甲酸检测结果也会降低，不能反映样为保证过氧化苯甲酰添加的均匀性，同时保证质状态存在，而不是主要以分解产物苯甲酸形式存在，本溶解，配成相应浓度的溶液，测定添加时移取相应当量质量物123456过氧化苯5物50苯甲酸50作环境温度的降低而降低，而当添加物为苯甲酸时，方法的回收率随着温度的降低基本上保持不变，均在85%以上，说明原国标方法中铁粉与盐酸反应生成的氢对过氧化苯甲酰的还原能力不足，反应受环境温度影响较大；经查资料表明，用吸热反应,Kθ随温度的上升而增大，增加温度对正向反应有利；同时本反应较慢，增加温度也能增加反应速率，但国标的前处理中，反应时间为放置过夜，再增加时长会严重影响实验效率；这些进一步说明样品中过氧化苯甲酰的残留量会影响实验GB/T18415-2001第二篇气相色谱法(Ⅱ)虽然提取时间短，但是色谱分析所进样品测试液中脂溶性杂质太多，柱分离要求高，进样口、色谱柱极易受到污染，为了简化方法，减少不同萃取相之间的来回转换带来的损失，尽量采取一次萃取相的转换，同时达到反应、提取、净化的效果。因此，直接用水相试剂提取还原615硫代硫酸钠与过氧化苯甲酰已经反应完毕，表4不同反应提取时间对过氧化苯甲酰回收率影响5在小麦粉过氧化苯甲酰的添加量为60.0mg/kg时对不同振荡提取温度（0℃、10℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃)生成目标物苯甲酸的峰面积进行比动均在±1%范围内，可视为没有发生变化，但是当温度达到70℃时，目标物峰面积这是因为当硫代硫酸钠加热到一定温度时会发生分解反应，在这个过程中，硫代硫会降低硫代硫酸钠的浓度，影响过氧化苯甲酰生成苯甲酸。同时结果表明本方法不7受低温环境的影响，低温并不会减缓方法反应的速率。因此本试验反应提取温度不宜超过70℃,室温反应提取即可。温度/℃0―00-0.3-0.3分别收集不同基质的典型性样品空白图谱、样品加标图谱，以确定分析方法检8a小麦粉样品空白g湿面条样品空白9近无杂峰出现，加标样品图谱中苯甲酸峰型尖锐、对称性好，附近无杂峰出现，说信噪比S/N=10的添加浓度作为估算定量限。测定个以上进行验证，当目标分析物的检出概率不低于95%时定为检出限；对于平行样品，并进行数据统计分析，若在该浓度的测定结果的正确度和精密度均满足选取小麦粉空白基质样品，向其中添加过氧化苯甲酰，按照新方法对其中过氧小麦粉基质中新方法的估算检出限为0.25mg/kg，信噪比S/N=10时估算定量限为123456789的要求。由于目前国家取消了过氧化苯甲酰能作为食品添加粉及其制品中不得添加过氧化苯甲酰，若把前限过氧化苯甲酰作为面粉处理剂，在2007版食品添加剂卫生标准中规定限量为从此过氧化苯甲酰不得再作为食品添加剂使用。因此，本文选择高于前限量标准3量限，0.84mg/kg）已验证（详见表7），本文则另外选定过氧化苯甲酰添加含量分样品，测定其回收率，并以苯甲酸的峰面积作为纵坐标，以苯甲酸的质量浓度为横坐标，计算线性回归方程及相关系数，以验证测定范围内的准确性及质量浓度跟峰注：过氧化苯甲酰添加系列浓度点：5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg、50mg/kmg/kg可知，在四种常见小麦粉及其制品基质中不同含量浓度的过氧化苯甲酰（定量限以本文采用标准添加样品验证方法的正确度。在小麦粉、挂面、馒头、湿面条空123456小麦粉湿面条在国标文本草案平行测试结果误差要求(≤10%）的范围内，同时说明文本草案对实准偏差（%）123456小麦粉00000000面0000式和其相同，苯甲酸标准使用液目标物存在方式相同、浓度和其接近，因此，本文制的相应标准溶液，按相同处理方式和色谱条件测定的峰面积进行比对，苯甲酸标在实际工作中我们可能会遇到样品处理后不能及时上机检测的情况，为此，我们考察了不同浓度样品处理液和标准曲线前处理溶液在一定时间内的稳定情况，将不同浓度的小麦粉基质样品和标准曲线前处理液分成一式三份，密封于冰箱中冷藏保存，分别在0h、24h和48h进行测定，测含量测定值相对0h/////////////////////////低00中0高0h时内的变化范围为-4.9%~1.4%，浓度越高，其峰面积越大，在48小时内的变化范围的为0%~1.5%，表明样品提取液在48h冷藏条件下是稳定的，由于现行国标气相法受实验环境温度影响较大，也提醒我们对新修订文本气相来验证新修订文本在不同环境温度条件下的稳定性及其产生影响的原因，统计结果过氧化苯甲酰50苯甲酸50苯甲酰或者苯甲酸时，新修订文本方法的回收率随着温度的降低基本上保持不变，硫酸钠还原过氧化苯甲酰的能力不随温度发生变化，目标物的萃取效率也不受环境（w%）碘化钾水溶液，即可充分完成氧化反应。过高的碘化钾水溶液浓度，不但会严重减少色谱柱寿命，还会造成色谱峰对称因子的降低。查阅大量文献后，本起草），10g/LKI溶液a市售样品干扰峰（流动相：甲醇+乙酸铵=10:90）b样品峰与干扰峰分离（流动相：甲醇+乙b.标准曲线浓度的修改以小麦粉、挂面、馒头、湿面条为基质制作标准曲线，将苯甲酸标准溶液配制以苯甲酸的峰面积作为纵坐标，以苯甲酸的质量浓度为横坐标，进行线性回归方程小麦粉、挂面、馒头、湿面条由此得到回归曲线方程分别为y=2.9132x+0.0106、y=2.0681x+0.1114、y=2.2信噪比S/N=10的添加浓度作为估算定量限。测定添个以上进行验证，当目标分析物的检出概率不低于95%时定为检出限；对于平行样品，并进行数据统计分析，若在该浓度的测定结果的正确度和精密度均满足选取小麦粉空白基质样品，向其中添加过氧化苯甲酰，按照方法对过氧化苯甲1234567896123456果果果123456789123456表19小麦粉添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率和精表20小麦粉添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率和精表21挂面添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率表22挂面添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率表23馒头添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率表24馒头添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率表25湿面条添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率和精表26湿面条添加过氧化苯甲酰标准标准溶液加标回收率和精本方法目前已由5家实验室验证，见表27，实验室间联合验证统计表，见表28-标准偏差RSDr＜10%，说明本方法在各实验室的重复性良好；再现性相对标准偏差并且馒头和湿面条测定结果不但能反映小麦制品的测定值果)值差))--------- 32439本标准共选取上海科茂粮油食品质量检测有限公司、山东省粮油检测中心、郑州市产品质量检验检测中心、河南工业大学质量检测中心、广东省粮食科学研究所色谱法进行了实验室间验证。标准起草单位制备得到添加浓度分别为低、中和高三种浓度的添加小麦样品、发酵面制品样品（馒头）、生干面制品（挂面），共计检馒头和湿面条测定结果（干基）与小麦粉测定结果（干基）相比较计算回收率，回群值，结果见表29-表31，重复性的变异系数小于10%，再现性变异系数小于15%，（折水分%）（折水（折水分%）/////////心////////////心//////43/////////223332///////2//1心////1//