痰培养标本的采集时间及频率

呼吸道标本的采集、送检和接种处理一、痰培养标本的采集时间及频率是什么?1、在抗生素应用前采集痰标本。2、最好在清晨采集痰标本。多数患者在清晨痰较多，且含菌量也多，尤其是对平时痰量少的患者，清晨采痰相对容易。3、对于肺炎，如果能采集到比较理想的痰液时，建议一个检验周期(4天)内只送1次痰标本，不必连续送检，更不建议24小时内多次采集，除非痰液外观性状出现突然改变。4、怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。二、痰标本的采集方法有哪些？1、自然咳痰法：留取前刷牙，用清水漱口3次(或硼酸漱口)，以除去口腔内大部分杂菌，之后先深吸气，再用力咳出呼吸道深部的痰液吐至一次性无菌痰怀(痰培养适用)或专用蜡浸小纸盒(抗酸杆菌涂片适用)内，盖好盖子。如果患者痰液较深，或者黏稠难于咳出时，可采用3%～5%的Nacl溶液(气道刺激高反应的患者如哮喘，不宜使用)、氯化铵溶液、N-乙酰-L-半胱氨酸溶液进行雾化吸入，以帮助排痰，最佳痰液采集量为2～10m1，最低不能少于1ml。2、特殊取痰法：由临床医生采集，根据方法的不同，主要有：纤支镜抽吸法：纤维支气管镜检查可直接从肺部感染病灶获取支气管分泌物，操作较为安全。用支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但也不能完全避免咽喉部正常菌群污染，防污染保护套下采集的样本具有较大价值，常用的采集方法有：采集支气管肺泡灌洗(BAL)、经支气管镜直接吸引或用防污染样本毛刷采集!在欧美已将该方法采抜的标本作为替代金标准力法(肺穿抽吸或活检)用呼吸道感染的诊断中经人气道吸引分泌物(ETA)：经人气道吸引是目前临床对不能自然咳痰的患者较为常用的力法。但由于气管插管等侵入性操作，原有的天然屏障防御机制受到损害，以及长期平卧后气道分泌物的坠积损伤气管局部黏膜造成黏膜的自洁能力丧失，环境微生物。口腔菌群常下行定植下气管中而不再保持无菌状态，所以此方法采集的标本同样会受到定植菌群的污染，也应该在培养前先做合格性筛查。经气管穿刺吸引物(transtrachealaspiration，TTA)：由于采集到的下呼吸道标本不受上呼吸道下常菌群的污染，曾较广泛推荐应用于下呼吸道细菌性感染的病原学诊断，尤其适合于厌氧菌培养。但此方法属于侵入性方法，患者比较痛苦，不易接受。经胸壁针刺吸引物(transthoracicneedleaspiration,TNA):对于感染性疾病，法方法只用于诊断一些原因不明的肺炎(尤其在儿童)和免疫缺陷患者的肺炎，或贴近胸壁的肿块病灶的标本采集；胃内采痰法：清晨空腹时，将胃管插入胃内，用注射器抽取胃液。适用于无自觉症状的肺结核患者尤其是婴幼儿(由于婴幼儿不会咳嗽，常将痰液存入胃中)，由于胃内痰液中的大多数细菌被胃酸杀死，而结核杆菌可抵抗胃酸，该样本比较适合作结核分枝杆菌培养。小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿因压舌刺激咳嗽可喷出痰液黏在拭子上，从而获得标本。或者先令患儿父母平坐于无扶手椅子上，将患儿头向左俯卧平放于父母的双腿上，医护人员用右手轻轻拍打患儿背部，左手打开痰杯盖子，持握痰杯的同时用手指轻轻按压其咽喉部天突穴处，刺激其咳嗽，由于俯卧，患儿无法将痰液吞下，只能从口中吐出，此时用痰杯顺手接住即可完成采样。三、为什么痰标本采集前应进行口腔清洁因为人体喉以上呼吸道黏膜表面及唾液中含有大量正常菌群；口腔卫生状态差者，以及老年、重症或住院患者的上呼吸道定植菌更多，致使途经口咽部咳出的痰常受到正常菌群和定植菌的污染，影响结果的判定，所以为了减少污染，采集痰液前需进行口腔清洁。四、痰标本的运送、保存、验收和筛选(1)痰标本运送和保存时应注意什么？1、标本采集后需尽快(小于2小叫)送至实验室，运送延误可导致肺炎双球菌、流感嗜血杆菌等苛养菌由于不适应外界环境和自溶现象而死亡;2、延迟送检或待处理标本应置于10--20“C室温保存，既可防止苛养菌死亡，也能避免杂菌快速生长，保存时间不得超过24小时；3、对可疑烈性呼吸道传染病(如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等)的患者检验标本，在采集、运送或保存过程中必须注意生物安全防护。(2)如何验收筛选痰标本‘?1、申请单填写应完整，条码清晰，标识唯一。容器内标本与申请单相符，采集时同在规定范围内。如果超过24小时应拒收。对侵入性操作获取的标本，须与医生协商处理办法，并作记录。2、标本容器必须符合规定，密闭无溢漏。否则拒收。3、黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、加厚，呈现团块状的标本为合格标本；而无色、白色、有黑色小点，不清晰，呈现泡沫状，有明显食物渣滓、纸屑灰尘、泥土的为不合格标本，应拒收。4、显微镜筛查，脓细胞＜10/HP或复层鳞状上皮＞25/LP的标本为不合格标本，应退回。5、所采集的标本类型与申请项不符合(如要求痰液的厌氧培养，未采用穿刺法取痰，未用注射器等厌氧装置运送；要求做痰培养却使用未灭菌的抗酸杆菌专用痰盒，等等)，应拒收。6、同一患者同时送检多份痰液，或同一天送检多份申请项目相同的痰液，只选做其中质量较好的一份，其余痰液全部退回。7、以培养为申请项目的痰液，当标本量少于1ml时，应拒收。8、拒收与退回标本应详细填写拒收记录和反馈单(或者在信息系统上填写反馈并提交)。下呼吸道感染标本中哪些不适合做厌氧培养哪些标本可以用于厌氧培养?为什么?1、易被口咽部分泌物污染的标本如咳痰、导痰、经口腔或鼻腔吸引的痰液、经人工气道吸引的分泌物和直接经纤支镜吸引的下呼吸道标本由于受到正常菌群中大量厌氧菌的污染，均不可用于厌氧培养。2、防污染毛刷刷出物(PSB)、经气管穿刺吸引物(TTA)、经胸壁针刺吸引物(TNA)、开胸肺活检(0LB)组织标本，由于避免了上呼吸道正常菌群的污染和避免与氧气接触，可用于厌氧培养。下呼吸道感染合格标本的特点有哪些？一般认为，来自下呼吸道的合格标本应该是含脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受唾液污染严重的不合格标本则来自颊黏膜的鳞状上皮细胞较多。如何进行痰标本的合格性筛查?痰标本留取后应先涂湿片，在不染色的状态下即可进行。将接种针前端5mm处折弯，曲成直角做成接种钩，挑取黄豆大小痰块，在载玻片上涂布开，使成(2×2)cm2大小的涂膜或者直接加(2×2)Cm2的盖玻片，轻压使痰块展开，放在显微镜下观察。根据《全国临床检验操作规程》提供的标准，鳞状上皮细胞＜10/LP，且白细胞＞25/LP者为合格痰标本。但经过实际观察对于自然咳痰采集的痰标本，白细胞≥25/HP(相当于≥100/LP)的痰标本与下呼吸道感染具有较高的一致性，可将一些具有渗出的非感染性的肺部疾患排除在外。而如果鳞状上皮细胞≥25/LP，说明标本可能仅仅是唾液或者被严重污染，应拒收。对于既有脓性成分，又有唾液成分的混合性痰标本如何处理?先进行洗净，分离出脓性成分，再进行镜下筛选。如果脓性成分满足筛选条件，痰标本仍可使用；否则应弃去。接种培养痰标本的预处理、涂片、染色、镜检，消化与接种培养下呼吸道细菌学检验的标本进行细胞学和细菌学和显微镜检查的目的是什么？1、下呼吸道标本涂片进行细胞学检查的主要目的是对送检标本进行质量评价，确认其是否应该进入下一步检验流程；其次，可初步判断标本性质属于感染性还是肺感染性[例如单纯(6)为什么痰培养标本要进行均质化的预处理？如何处理?答：一般情况下病原菌感染肺部，其部位在下呼吸道深部，炎性渗出物为了将炎症局限，病原菌被包裹在其中，由于肺属于与外界环境单向相通的脏器，渗出的病理产物不易及时排出，感染灶中炎症渗出物反复包裹，层层叠叠，病原菌往往位于包裹物的最里层，位于脓细胞胞质中。若直接接种于培养基上，包裹物中有价值的细菌很难突破包裹在培养基上生长，而痰的均质化有助于包裹物内部细菌的暴露，可提高感染菌的阳性检出率。方法：痰均质化法以胰酶均质化为多见。其方法为：在盛装痰标本的容器中加入等量用无菌P7.6的磷酸盐缓冲液(PBS)配制的l%的胰蛋白酶溶液，放置35℃培养箱内消化90分钟即能使痰液均质化，而对细菌培养无影响。另外，可使用无菌生理盐水代替灭菌PBS，但消化效能较低，需要延长消化时间至120分钟。此外，还可用玻璃组织研磨器。(7)痰标本培养是否可用肉汤增菌或高选择性培养基?为什么?答：不主张采用肉汤増菌或高选择性培养基等极端的方法。因为肉汤増菌后与感染不相关的细菌也一同增殖，很多时候与感染不相关的污染菌生长速度大于H标细菌，导致目标细菌由于竞争抑制而无法分离。再则，增菌后标本的原始状态发生改变，最终导致培养结果无法代表患者体内的真实状态，使痰培养失去应有的诊断价值。而高选择性培养基则又是另一个极端。由于导致肺部感染的细菌多种多样，目的菌常常未知，进行痰培养时，我们的分离目的并不明确，采用高选择性培养基将会因为培养基的选择性过强而抑制真正有价值的微生物，导致严重的漏诊。因而高选择性培养基在痰培养中不常使用。除非是有目的性地选择分离某些特定的微生，例如嗜肺军团菌。(8)痰标本分离培养基的选择、接种及培养结果分析(菌落观察)如何进行?答：1、一般细菌培养应同时划区接种：血平板：适用于分离肺炎链球菌和其他细菌。加抗生素的巧克力平板：适用于分离嗜血杆菌。麦康凯/中国蓝平板：适用于分离革兰阴性杆菌；CHROMagar或含抗毒素的SDA：适合于分离曲毒菌、毛霉菌或者罕见感染的酵母样真菌，如隐球菌。2、分离培养：血平板和巧克力平板置于5%CO2环境，麦康凯平板中国蓝平板置大气环境，于35℃孵育；而CHROMagar或含氯霉素的SDA置28℃，高湿度（＞70%）环境下培养。3、与涂片镜检结果相结合，挑取菌落形态与涂片中胞内菌或位于包裹物中的细菌形态一致的可疑菌落进行细菌鉴定和药敏试验——注意：对于菌落数较少，或者菌落体积较小的细菌，需要首先进行传代纯培养。4、综合细菌在不同培养基上的生长情况，快速定位和判断细菌大致的种类，并根据情况决定选用哪一种培养基上的菌落进行下一步试验。如此，既可大大节省时间，又能少走弯路，避免一些低级错误的产生。值得注意的是，痰及下呼吸道分泌物标本易受到上呼吸道正常菌群的污染，临床微生物学实验室通常可从送检的呼吸道标本中分离出多种细菌，但分离细菌是否就是下呼吸道感染的病原菌，这对临床诊断与治疗至关重要。实验室人员必须重视这个问题，做到每个环节有理有据，环环相扣，形成严密的证据链条，以保证我们出具的痰培养结果的可靠性。在实际工作中，由于痰液中细菌生长速度不一，如肺炎链球菌、卡他莫拉菌可能被快速生长的细菌(包括正常菌群)所掩盖，如不仔细观察就会造成漏诊。这就要求实验室人员必须具备一定的菌落形态积累，能准确辨认受到抑制的不太典型的菌落。(9)痰培养结果如何报告更科学?答：由于检验结果报告的时效性，下呼吸道标本细菌学检验结果分为初步和最终结果报告。1、初步报告：主要是涂片报