《植物组织培养》课件 模块四－4 花卉的组织培养

任务一器官培养（一）茎段培养任务二器官培养（二）植物的再生培养任务三培养物的不良表现及改进措施任务四花卉的组织培养任务五水果作物的组织培养任务六植物液体培养常见植物组配方法与易发问题处理项目四常见植物组培方法与易发问题的处理任务四花卉的组织培养掌握百合生物学特性和快速繁殖方法；掌握兰科植物组培的大致过程；掌握胡蝶兰花梗组培的方法。123大花蕙兰的继代增殖示意图任务导入第一节百合的组织培养第二节兰花的组织培养技术第三节蝴蝶兰的培养

全世界已发现百合约89余种，主要分布地区是中国、日本、北美和欧洲等温带地区。北美百合协会将百合园艺品种划分为10个种系，观赏栽培的主要是4个种系，即亚洲百合杂种系；茶香百合杂种系；东方百合杂种系；麝香百合杂种系。株形端正，花色清白给人以清纯、高雅的印象，是切花中的佳品。第一节百合的组织培养第一节百合的组织培养第一节百合的组织培养

我国近年来，昆明、上海、深圳的百合切花生产发展较快，已形成三大生产基地。目前国内切花栽培的百合大多是亚洲型，主要从荷兰、日本引进，经过几年的栽培试验，已筛选出一批适合我国生产的品种。第一节百合的组织培养一、形态特性和生物学习性

百合是百合科百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，直径5~8cm，白色或黄白色，茎高30~90cm，直立，叶多而散生，披针形，光滑。花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清香。花被先端外卷，花被筒深处淡绿色。百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以有利于鳞茎发育膨大。二、繁殖方法1.分球百合老鳞茎(母球)生长过程中，于茎轴上逐渐形成小鳞茎，称"茎生小球"，经一年栽培，可分生1~3个甚至7~9个小球，适当深栽及摘除花蕾，均有助于子球发生，小鳞茎待明春播于苗床，大者1年，小者培养2~3年可当种球。2.鳞片扦插取成熟健壮的老鳞茎，阴干数日后剥下鳞片，斜插于湿润木屑或颗粒泥炭中，温度以20~25℃为适，一般8~9月插，经2~4个月生根发叶，并在鳞片基部生长出小磷片，基质含水量在60％~80％，前期高水分，后期低水分，过分湿润易腐烂。为防止病菌感染，应尽量除去外层鳞片，1片鳞片可获50～60个子球，自鳞片扦插、生根、发芽至植株开花，一般需2~3年。三、百合的组织培养

百合的组织培养繁殖自20世纪70年代后期开始，日本人以叶片为外植体诱导出大花卷丹的小植株，我国于80年代初由兰洲百合的花药、花丝等培育出完整小植株。80年代以后，培养出去病毒的百合种苗和通过胚培养获得远缘杂交的新品种。1.花器的组织培养(1)取材和灭菌采取开花前数日的花蕾。花蕾的表面用酒精灭菌，再在酒精灯上灼烧数秒钟，以后放在无菌培养皿内剥开花蕾，花丝，子房，花柱等分别切取3～5mm长，接种到培养基上。也可用花瓣和萼片培养。

(2)培养基及培养条件采用MS，KC等培养基，蔗糖浓度以7.0％为适，这样发芽和子球形成率可达90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保温20℃。

培养条件

花柱、花梗、茎段等用MS+IAAl+BA0.2培养基，叶片用MS+NAAI+BA0.1；分化植株时，MS+NAA2+IBA0.4+Kt0.05，培养基内均加蔗糖3％和琼脂0．7％，pH值5.8—6.5。

(3)生长情况花器部位从百合花器不同部位的培养来看，以花丝的部位为好，成活率很高，发芽较多，再是子房和花柱部分。可从各部位发芽，形成子球，通常是经过两个途径，一个是从切中处形成愈伤组织，以后再发芽；再是从切口直接产生芽。麝香百合花器培养得到的植株，生长约6个月即可开花，未发现不正常现象，只是母株的花较大，且全株无病毒症状。

百合鳞片等培养，对于扩大培养材料来源，加快繁殖速度和培养得到无病毒苗等皆有重要意义。2.鳞片组织培养

初代培养：

由于其鳞茎材料都生长在土中，受土壤微生物的影响，所以污染率相当高。为此外植体消毒要严加注意，可应用几种消毒剂并用的方法。取0．5cm2鳞片小块接人MS+2，4-D1+IAAI+Kt0．5诱导培养基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光强1200Lx条件下培养。

接种后2周，即有98％左右的鳞片切块在近轴面或边缘上有淡黄色的不定芽原基呈环状突起，多数每块上有2~4个，这些不定芽原基继续生长4周后，可形成中间抽出绿色的白色小鳞茎，在小鳞茎基部发生一些粗壮的根。将幼苗切成1.5~2cm长的片断，接种到诱导愈伤组织的培养基上。3周后叶子的基部、叶脉、叶缘上均可诱导出一团团淡黄色的愈伤组织。初代培养

继代培养（分化培养）可用MS+NAA2+IBA0．4+Kt0.05培养基。将愈伤组织转移到分化培养基上，10周后，愈伤组织逐渐膨大，分化出许多大小不等的鳞茎，并在小鳞茎的基部长出许多粗壮的根。有少数的小鳞茎中间可长出绿芽。将小鳞茎分离出以后，留下的愈伤组织转移到相同的新鲜分化培养基上，一段时间后仍能分化出小鳞茎。

试管苗移栽时首先应把根部的培养基清洗干净。移栽前，放在4~10℃低温条件下锻炼2～3周，这样移栽后的幼苗生长更加健壮。移栽幼苗最好用消毒的腐殖土或泥炭土加蛭石的混合基质，育苗盘必须清洗消毒。同时，移栽后注意湿度管理，相对湿度控制在80％~90％。同时要防止烈日曝晒，后期幼苗不宜浇水过多，并及时喷洒药剂预防病虫危害。继代培养（分化培养）

百合切花栽培中首先要解决的技术问题是：避免因球根的休眠而导致发芽率不高及盲花。由于同一圃场生产的球根，其休眠状态各种各样，尤其休眠深的球根，仅靠贮藏无法打破休眠。

需要人工打破休眠

四、打破休眠的方法1.冷藏

13～15℃预冷，3～5℃冷藏6-7周。2.温水浸泡开始于48℃的温水中，每隔2～3min提起再泡入，反复2～3次，然后在45℃温水中浸泡1h。严格掌握水温。3.激素处理采用1000xGA溶液浸泡，为避免发根阻碍，可先将球根倒置浸泡一半，而后恢复正常位置予以静置。四、打破休眠的方法第二节兰花的组织培养技术

兰花系兰科植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。

法国Morel(1952年)等以大丽花茎尖进行培养试验，得到了无病毒植株。后来他观察到虎头兰的茎尖在无菌培养基上能形成扁圆形的小球体，这些小球体与种胚发育成的原球体非常相似，故称为原球茎。原球茎增殖很快，并可形成幼苗。这一方法和技术很快在兰花生产上得到了广泛的应用，成为“兰花工业”。

兰花培养成功的关键，首先是形成无性繁殖系原球茎。国兰原球茎的增殖国兰原球茎发芽图

兰科植物可以培养的部位主要是顶芽和侧芽，个别可从叶片培养得植株。

1.新芽的茎尖茎尖是细胞分裂最旺盛的部分，也是培养成功率最高的部位。

2.花梗当兰花开花约一个月后，剪取其花梗顶端及若干个花梗腋芽。一、培养部位1.芽的准备和灭菌取2～6cm大小切取下来，流水冲洗，并把最外面的1～2片苞叶去掉，再用10％次氯酸钠或漂白粉溶液(10g漂白粉溶解于140ml水中，充分搅拌匀后，静置约20min，取上清液)中浸10～15min。剥离和切割。容易产生褐变的，在切割时应将芽放在无菌水中操作，这样会比在空气中褐变的机会少些。以消除病毒为目的时要尽量小些，可以小到0.1mm：若以繁殖为目的，培养物可在2～5mm左右。二、茎尖的选取、灭菌和接种2.接种

茎尖接种以固体培养基为好，但因属而异，如蕙兰属在液体培养基培养形成原球茎后则用固体培养基进行继代培养，而卡德兰属和石斛属这一类易变褐枯死的属，以在液体培养基为好。2.接种3.继代培养接种后1～2个月培养的茎尖即可形成原球茎球状体，以后即发芽生根长叶。应在其发芽前把它切成小块进行转移，让它继续不断地形成原球茎球状体。这样连续的进行继代培养，短时间可以得到大量的原球茎球状体。4.培养基对于许多兰花来说，MS培养基最好。另外KnudsonC(KC)培养基也不错。

5.试管苗的移栽苗有3～4叶大小，根2～3条时可移植。(1)从试管内取的苗用水将琼脂冲洗掉，冲洗不彻底会发生霉菌腐烂。(2)经水冲洗的苗放在旧报上，吸干水分阴晾1h再定植。(3)管理上，50％的弱光，温度20～25℃，保持一定的湿度，不能完全密闭，也要注意通风。根在开始生长后可1周浇一次1000倍的复合肥料。第三节蝴蝶兰的培养(1)将芽除去叶后，用水冲洗，10％的漂白粉灭菌15min。除去叶原基后，用5％的漂白粉灭菌l0min，以后用无菌水冲洗3~5次。(2)切取茎尖和各叶基部的腋芽，约2~3mm大小，接种到培养基中。(3)培养基采用VW培养基，添加15％CM进行液体培养，或进行固体培养。1.茎尖的培养茎尖图示(4)培养条件为温度25℃，光照强度2000Lx，照明16～24h。液体培养基用60r／min的速度进行振荡培养，培养7～10d再转移到新的培养基，培养1个月后转移到固体培养基。在这种条件下培养1个月即可形成原球茎球状体，以后再进行继代培养，不断繁殖原球茎球状体。1.茎尖的培养(1)采芽将带腋芽的花梗进行冲洗，用10％的漂白粉溶液表面灭菌20min，除去腋芽的苞叶，再在5％的漂白粉溶液中表面灭菌3min，无菌水冲洗净。

(2)不带花梗组织，仅取腋芽，接种到培养基上。2.花梗腋芽的培养蝴蝶兰图示(3)培养基和培养条件：诱芽培养基：MS+BA3诱导原球茎：MS+BA5+NAA0.5增殖：MS+BA3+NAA0.2+炭1