2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

课前提问：1.动物细胞工程有哪些技术？2.动物细胞融合的原理及完成的标志？3.诱导动物细胞融合的方法？4.什么是杂交瘤细胞？5.杂交瘤细胞的特点？6.什么是单克隆抗体？A细胞B细胞A原生质体B原生质体正在融合的原生质体杂种细胞愈伤组织杂种植株去壁去壁融合再生出细胞壁脱分化再分化植物体细胞杂交技术马的细胞A天鹅的细胞B飞马？A细胞B细胞杂交细胞一动物细胞融合技术实例：1970年，人—鼠细胞荧光标记融合实验实验表明：细胞膜具有流动性一.动物细胞融合技术使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。1、概念：3、原理：细胞膜具有一定的流动性4、诱导方法物理法：电融合法化学法：聚乙二醇融合法一、动物细胞融合技术生物法：灭活病毒诱导法2、结果：融合后的细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息灭活病毒诱导细胞融合的原理是动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合4.意义：（1）研究遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物

新品种等重要手段（2）为制造单克隆抗体开辟了新途径5.应用：一、动物细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能第2章第2节人教版选择性必修3第2课时

动物细胞融合与单克隆抗体12

阐明动物细胞融合技术的概念，举例说出诱导动物细胞融合的方法。概述单克隆抗体的制备过程。学习目标使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。1、概念：3、原理：细胞膜具有一定的流动性4、诱导方法物理法：电融合法化学法：聚乙二醇融合法一、动物细胞融合技术生物法：灭活病毒诱导法2、结果：融合后的细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息二、单克隆抗体1.定义：体液免疫

抗体抗体2.抗体的分布：机体产生的，专门应对抗原的蛋白质。①血清（主要）②组织液及外分泌液（如乳汁中）早期获得抗体的方法动物体内特定抗原浆细胞抗体（血清）反复注射缺点：制备的抗体产量低，纯度低，特异性差。抗体不纯多种二、单克隆抗体及其应用单克隆抗体遗憾：体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖一个B淋巴细胞B淋巴细胞群克隆获得大量的单一抗体单一抗体二B淋巴细胞抗体产生能产生抗体，但不能大量增殖骨髓瘤细胞能大量增殖，但不能产生抗体二B淋巴细胞骨髓瘤细胞特点：既能大量增殖，

又能产生抗体杂交瘤细胞单克隆抗体的制备过程获得多种B淋巴细胞培养骨髓瘤细胞诱导融合注射特定抗原培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导融合单克隆抗体的制备过程目的：获得能产生特定抗体的B淋巴细胞1234诱导融合后会出现哪些不同细胞？多种B淋巴细胞二单克隆抗体及其应用用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。抗原1从小鼠脾脏中获取B淋巴细胞B细胞1B细胞2B细胞3B细胞4……等多种B细胞

培养骨髓瘤细胞诱导融合融合后会出现哪些不同细胞？B细胞1骨髓瘤细胞杂交瘤细胞1B细胞2B细胞3B细胞4骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞2杂交瘤细胞3杂交瘤细胞4B细胞B细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B细胞骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞融合的具有同种核的细胞未融合的细胞第一次筛选的目的：筛选出杂交瘤细胞方法：用特定的选择培养基知识拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞的原理①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。

③鼠骨髓瘤细胞中只有D途径，没有S途径，但能不断分裂增殖。筛选出杂交瘤细胞方法？B淋巴细胞及同型融合细胞：不能无限增殖，死亡骨髓瘤细胞及同型融合细胞：不能无限增殖，死亡杂交瘤细胞：能无限增殖，生长培养基中加入氨基蝶呤（HAT培养基）单克隆抗体的制备过程特定培养基

抗原抗体杂交获得多种B淋巴细胞第一次筛选：筛选杂交瘤细胞培养＋第二次筛选：筛选产生目的抗体的杂交瘤细胞培养骨髓瘤细胞诱导融合第二次筛选第一次筛选得到的杂交瘤细胞（多种）多孔板单克隆抗体的制备过程方法：克隆化培养和

抗体检测二单克隆抗体及其应用将第一次筛选后得到的杂交瘤细胞进行培养并稀释每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞。二单克隆抗体及其应用二单克隆抗体及其应用二单克隆抗体及其应用抗原1二单克隆抗体及其应用抗体检测呈阳性第二次筛选第一次筛选得到的杂交瘤细胞（多种）多孔板单克隆抗体的制备过程方法：克隆化培养和

抗体检测原理：抗体与抗原特异性结合目的：获得足够数量的能分

泌特定抗体的杂交瘤

细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞特点：既能迅速大量增殖又能产生特定的抗体单克隆抗体的制备过程特定培养基

抗原抗体杂交获得多种B淋巴细胞大量培养杂交瘤细胞第一次筛选：筛选杂交瘤细胞培养＋第二次筛选：筛选产生目的抗体的杂交瘤细胞培养骨髓瘤细胞诱导融合抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞单克隆抗体注射到小鼠腹腔内增殖腹水培养液单克隆抗体的制备过程体外培养注射抗原多种B淋巴细胞培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合诱导融合多种细胞杂交瘤细胞多轮次的克隆化培养和抗体检测抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞体外培养注射到腹腔单克隆抗体从培养液或小鼠腹水中获得大量的单克隆抗体第一次筛选第二次筛选单克隆抗体的制备过程动物细胞融合、动物细胞培养1.应用到的细胞工程技术:单克隆抗体的制备过程2.单克隆抗体的优点（1）能准确地识别抗原的细微差异（3）可以大量制备。（2）与特定抗原发生特异性结合三.单克隆抗体的应用在受精后不久，胎盘滋养层细胞就会分泌人绒毛膜促性腺激素（HCG），在孕妇的尿液中大量存在。而在非妊娠妇女尿液中几乎不含有。1.诊断试剂抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体二单克隆抗体及其应用抗体-药物偶联物（ADC）细胞凋亡①ADC被细胞吞噬②⑤ADC抗体药物接头实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。三.单克隆抗体的应用2.运载药物将细胞毒素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合思考

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讨论讨论1：ADC的抗体和药物各具有什么作用？抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；抗体-药物偶联物（ADC）三.单克隆抗体的应用2.运载药物药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞