疑似毒品中氯胺酮检验

GB/TXXXXX—XXXX

疑似毒品中氯胺酮检验

1范围

本文件规定了氯胺酮的气相色谱-质谱（GC-MS）、液相色谱-质谱（LC-MS）、液相色谱（LC）定

性检验方法和气相色谱（GC）、液相色谱（LC）定量检验方法。

本文件适用于疑似毒品中氯胺酮的定性分析和定量分析。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27418测量不确定度评定和表示

GA/T122毒物分析名词术语

3术语和定义

GA/T122界定的术语和定义适用于本文件。

4原理

对疑似毒品中的氯胺酮（氯胺酮基本信息参见附录A）进行提取。采用气相色谱-质谱法检测，以

保留时间、质谱特征离子和离子丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱-质谱法检测，以保留时间、

质谱特征离子对和离子对丰度比作为定性判断依据；采用液相色谱法检测，以保留时间作为定性判断依

据；采用气相色谱法检测，以色谱峰面积作为定量依据，用外标单点法进行定量分析；采用液相色谱法

检测，以色谱峰面积作为定量依据，用外标标准曲线法进行定量分析。

5试剂、仪器和材料

5.1试剂

5.1.1GC、GC-MS分析用试剂

除非另有说明，在分析中使用的试剂均为分析纯。

5.1.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.1.2正己烷（C6H14）：色谱纯。

5.1.1.3碳酸钠（Na2CO3）。

5.1.1.4无水硫酸钠（Na2SO4）。

5.1.1.520%碳酸钠水溶液：称取碳酸钠20g，用去离子水溶解并定容至100mL，混匀，即可使用。

5.1.1.6标准溶液：

a）标准物质储备液：氯胺酮标准物质储备液；

2

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b）标准工作溶液按实验需求分为以下五类：

——气相定性用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成

0.1mg/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期3个月。也可根据实际情

况配制实验中所用其他浓度的定性用标准工作溶液；

——气相定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成

0.005mg/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期1个月；

——气相外标单点法定量用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，

配制成0.1mg/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期3个月；

5.1.2LC、LC-MS分析用试剂

实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试剂均为色谱纯。

5.1.2.1甲醇。

5.1.2.2甲酸。

5.1.2.3乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2.4三乙胺（C6H15N）：色谱纯。

5.1.2.5浓磷酸（H3PO4）：色谱纯，含量≥85%。

5.1.2.60.2%甲酸水溶液（以配制1000mL为例）：量取2mL甲酸，加入水稀释并定容至1000mL，混

匀后0.22μm水系滤膜过滤，超声波清洗器超声，静置后即可使用。

5.1.2.7磷酸-三乙胺缓冲液（以配制1000mL为例）：量取4.12mL浓磷酸，加入200mL水稀释；量取

5.56mL三乙胺，滴入上述磷酸溶液中；用水稀释并定容至1000mL，混匀后0.22μm水系滤膜

过滤，超声波清洗器超声，静置后即可使用。

5.1.2.8标准溶液：

a）标准物质储备液：氯胺酮标准物质储备液；

b）标准工作溶液按实验需求分为以下四类：

——液质定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成

1ng/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期7天；也可根据实际情况配

制实验中所用其他浓度的定性用标准工作溶液；

——液相定性用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成

0.1mg/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期3个月。也可根据实际情

况配制实验中所用其他浓度的定性用标准工作溶液；

——液相定性质控标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇稀释，配制成

0.002mg/mL的氯胺酮标准工作溶液。0℃~4℃冷藏保存，有效期1个月；

——外标标准曲线法定量用标准工作溶液：移取氯胺酮标准物质储备液适量，用甲醇配制

成浓度为0.01mg/mL~0.5mg/mL范围的标准工作溶液，至少配制5个浓度；

5.2仪器和材料

5.2.1GC、GC-MS分析用仪器和材料

GC、GC-MS用仪器和材料包括：

a）气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）；

b）气相色谱-质谱仪：配有电子轰击源（EI）；

c）离心机；

d）电子天平：定性检验实际分度值d小于或等于0.1mg，定量检验实际分度值d小于或等于0.01mg；

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e）涡旋振荡器；

f）移液器或移液管；

g）容量瓶；

h）具盖离心管；

i）有机系滤膜：0.22µm。

5.2.2LC、LC-MS分析用仪器和材料

LC、LC-MS用材料设备包括：

a）液相色谱仪（LC）：配有二极管阵列（DAD）或紫外检测器（UV）；

b）液相色谱-质谱仪（LC-MS）：配电喷雾离子源；

c）离心机；

d）电子天平：实际分度值d小于或等于0.01mg；

e）涡旋振荡器；

f）移液器或移液管；

g）容量瓶；

h）具盖离心管；

i）有机系和水系滤膜：0.22µm；

j）超声波清洗器。

6定性分析

6.1GC-MS定性分析

6.1.1样品制备

6.1.1.1固体样品制备

样品经均质化后，根据实际需求，称取10mg~100mg于具盖离心管中，加入10mL甲醇，密封并振

荡10min，以不低于4000r/min离心5min，取上清液作为样品溶液，供GC-MS。

6.1.1.2液体样品制备

样品经均质化后，吸取10μL~200μL于具盖离心管中，加入1mL20%碳酸钠水溶液和2mL正己烷，振

荡5min，5000r/min离心5min分层。吸取上层有机相1mL，加入适量无水硫酸钠干燥，过滤膜后，滤液作

为样品溶液，供GC-MS分析。

6.1.2气相色谱-质谱仪参考条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

方法一

a）色谱柱类型：DB-5MS石英玻璃毛细柱（5%苯基+95%聚二甲基硅氧烷）或其他等效柱；

b）色谱柱参数：30m×0.25mm×0.25μm；

c）色谱柱温程：初始温度60ºC，以15ºC/min升温至280ºC，保持15min；

d）进样口温度：280℃；

e）分流比：20:1；

f）载气：高纯氦气(He)；

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g）柱流量（恒流）：1.0mL/min；

h）离子源：EI；

i）传输线温度：250ºC；

j）离子源温度：230ºC；

k）倍增器电压：参考调谐状况；

l）采集方式：全扫描(Scan)；

m）质量范围：40amu～500amu；

n）溶剂切割：3min。

方法二

a）色谱柱：DB-5MS毛细管柱（5%苯基和95%甲基聚硅氧烷）或DB-35MS毛细管柱（35%苯基

和65%甲基聚硅氧烷）或其他等效柱；

b）色谱柱参数：30m×0.25mm×0.25μm；

c）色谱柱温程：初始温度140℃，以20ºC/min升温至300ºC，保持4min；

d）进样口温度：280℃；

e）分流比为40:1

f）载气：高纯氦气（He）；

g）柱流量（恒流）：1.0mL/min；

h）离子源：EI；

i）四级杆温度：150℃；

j）离子源温度：230℃；

k）倍增器电压：参考调谐状况；

l）采集方式：全扫描(Scan)；

m）质量范围：40amu～500amu；

n）溶剂切割：3min。

6.2LC-MS、LC定性分析

6.2.1样品制备

6.2.1.1固体样品制备

样品经均质化后，称取5mg~50mg于具盖离心管中，加入10mL甲醇，密封并振荡5min，以不低于

4000r/min离心5min，取上清液，过滤膜后作为样品溶液，供LC分析。以初始流动相稀释合适倍数，供

LC-MS分析。

6.2.1.2液体样品制备

样品经均质化后，根据实际需求，吸取10μL~200μL于具盖离心管中，加入2mL甲醇，超声溶解，

涡旋混匀，过滤膜后作为样品溶液，供LC分析。以初始流动相稀释合适倍数，供LC-MS分析。

6.2.2仪器分析

6.2.2.1液相色谱-质谱仪参考条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a）色谱柱：poroshell120C18（3.0×50mm，2.7μm）或其他等效柱；

b）流动相：A：0.2%甲酸水溶液，B：甲醇；

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c）流速：0.3mL/min；

d）梯度程序：见表1；

表1梯度洗脱程序

时间

AB

min

020%80%

326%74%

760%40%

1077%23%

10.0195%5%

10.595%5%

e）进样体积：2µL

f）离子源：电喷雾离子源；

g）扫描方式：正离子模式；

h）毛细管电压：4000V；

i）干燥气：10mL/min；

j）干燥气温度：350℃；

k）雾化气：25psi；

l）后处理时间（平衡时间）：3.5min；

m）后处理流速：0.4mL/min。

6.2.2.2液相色谱参考条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a）色谱柱：C18色谱柱（150×4.6mm，5μm）或其他等效柱；

b）柱温：35℃；

c）流动相：A：乙腈，B：磷酸-三乙胺缓冲溶液；

d）流速：1.0mL/min；

e）进样体积：5μL；

f）检测波长：210nm；

g）洗脱程序：根据样品情况选择等度洗脱或梯度洗脱；

等度洗脱（适用于纯度较高的晶体样品）：16%A+84%B，分析时间8min；

梯度洗脱（适用于成分较为复杂的样品）：洗脱程序参考表2。

表2梯度洗脱程序

时间

AB

min

0.016%84%

7.016%84%

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7.280%20%

9.080%20%

9.216%84%

12.016%84%

7定量分析

7.1GC外标单点法

7.1.1含量范围预分析

固体样品经均质化后，根据实际需求，称取10mg~100mg样品置于具盖离心管中，加入10mL甲

醇，密封并振荡5min，以不低于4000r/min离心5min，上清液过滤膜后作为样品溶液，供GC分析。

或根据实际需要，将上清液用甲醇稀释，稀释液作为样品溶液，供GC分析。采用外标单点法定量用标

准工作溶液作为定量参照。

按照公式（1）计算样品中目标物的预分析含量。

C02AV1V+V

=3100%…………（1）

AVm

02

式中：

w—样品中氯胺酮的含量（质量分数，%）；

C0—标准工作液中氯胺酮的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

A—样品溶液中氯胺酮的色谱峰面积值；

V1—样品溶液初次定容体积，单位为毫升（mL）；

V3—将V2稀释时加入甲醇的体积，单位为毫升（mL）；

A0—标准工作液中氯胺酮的色谱峰面积值；

V2—从V1中移取样品溶液的体积，单位为毫升（mL）；

m—用于测定的样品的称量质量，单位为毫克（mg）。

7.1.2准确定量

7.1.2.1称量重量的计算

根据预分析中氯胺酮含量测定结果，选择合适的定容体积、稀释倍数（样品提取操作参数选择参见

附录B），并按照公式（2）计算出样品称量质量（m），使样品溶液中目标物的浓度在所用标准工作溶液

浓度的（100±30）%范围内。

CVD

m0………（2）

式中：

m—准确定量时样品的称量质量，单位为毫克（mg）；

C0—标准工作液中氯胺酮的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

V—初次定容体积，单位为毫升（mL）；

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D—稀释倍数；

w—样品中氯胺酮的预分析含量（质量分数，%）。

7.1.2.2样品提取

根据7.1.2.1计算结果，平行称取样品2份于具盖离心管中（当需要对定量结果进行不确定度评定时，

至少平行称取6份）。根据预分析含量范围，加入相应初次定容体积的甲醇，密封并振荡5min，以不低于

4000r/min离心5min，取上清液作为样品溶液，供GC分析；当样品溶液需要稀释时，按照稀释倍数进行

稀释定容，稀释液作为样品溶液，供GC分析。

7.1.2.3气相色谱仪参考条件

以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整：

a）色谱柱型号：DB-5石英玻璃毛细柱（5%苯基+95%聚二甲基硅氧烷，30m×0.25mm×0.25μm）或

其他等效柱；

b）色谱柱温程：初始温度100ºC，以15ºC/min升温至280ºC，保持3min；

c）进样口温度：280℃；

d）分流比：20:1；

e）载气：高纯氮气(N2)；

f）柱流速（恒流）：1mL/min；

g）检测器温度：300℃；

h）燃烧气：氢气（H2）；

i）燃烧气流速：按仪器默认值；

j）助燃气：空气；

k）助燃气流速：按仪器默认值。

7.1.2.4进样

分别吸取样品空白（甲醇）、样品溶液、标准溶液空白（甲醇）和外标单点法定量用标准工作溶液，

按7.1.2.3条件进样分析。当称取2份样品时，每份样品进样2~3针。

7.1.2.5含量计算

按照公式（1）计算样品中氯胺酮含量。

7.2LC外标标准曲线法

7.2.1标准工作曲线绘制

采用5.1.2.8中配制的外标标准曲线法定量用标准工作溶液及标准溶液空白（甲醇）绘制线性范围为

0.01mg/mL～0.5mg/mL的氯胺酮标准工作曲线，以氯胺酮系列标准工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积

为纵坐标，得到标准曲线回归方程，其线性相关系数r应大于0.998。

7.2.2样品制备

7.2.2.1固体样品制备

样品经均质化后，称取25mg（精确至0.01mg）于具盖离心管中，加入10mL甲醇，超声溶解，涡

旋混匀。取适量样品溶液，按样品溶液:甲醇=1:4（V/V）的比例进行稀释，混匀、滤膜过滤，滤液作为

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样品溶液，供LC分析。

7.2.2.2液体样品制备

样品经均质化后，吸取25μL于具盖离心管中，称量其质量（精确至0.01mg），加入10mL甲醇，

超声溶解，涡旋混匀。取适量样品溶液，按样品溶液:甲醇=1:4（V/V）的比例进行稀释，混匀、滤膜过

滤，滤液作为样品溶液，供LC分析。如果样品中目标物浓度过低，可吸取500μL样品，称量其质量（精

确至0.01mg），并加入9.5mL甲醇溶解，其他处理过程相同。

7.2.3液相色谱仪参考条件

同6.2.2.2。

7.2.4进样

分别吸取样品空白（甲醇）、样品溶液，按7.2.3方法条件进样分析，每份样品平行进样2~3针。

7.2.5含量计算

7.2.5.1外标曲线法含量计算

以外标标准曲线法定量用标准工作溶液中目标物的峰面积值为纵坐标、外标标准曲线法定量用标

准工作溶液中目标物的浓度为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据样品溶液中目标物的峰面积值，

按公式（3）计算出样品中目标物的百分含量。

(Yb)50

100%……（3）

am

式中：

ω—样品中目标物的百分含量，用百分比（%）表示；

Y—样品溶液中目标物峰面积值的平均值；

b—线性方程的截距；

50—样品溶解稀释体积；单位为毫升（mL）；

a—线性方程的斜率;

m—样品的称量重量，单位为毫克（mg）。

7.3盐型化合物含量计算

当样品中氯胺酮含量以盐型表示时，按式（4）计算：

M盐

盐=……（4）

M

式中：

ω盐——样品中目标物盐型的质量百分含量，用百分比（%）表示；

ω—样品中目标物的百分含量，用百分比（%）表示；

M——目标物原体的相对分子质量；

M盐——目标物盐型的相对分子质量，按含1分子碱的化学式计。

8结果评价

8.1定性结果评价

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8.1.1GC-MS、LC定性结果评价

阳性结果评价：将样品与氯胺酮标准物质的色谱图和质谱图进行比对，同时满足如下两个条件时，

判定为样品中检出目标物。

a）在相同条件下进行GC-MS测定时，样品溶液中目标物与浓度接近的定性用标准工作溶液中的

目标物相比，色谱峰保留时间一致（相对误差在±1%之内）、质谱特征离子（不少于三个）一

致，且各离子丰度比相对偏差不超过表3规定的范围，样品空白无干扰。氯胺酮气相色谱图、

质谱图及特征离子参见附录C和附录D。

b）在相同条件下进行LC测定时，样品溶液中目标物与浓度接近的定性用标准工作溶液中的目标

物相比，色谱峰保留时间一致（相对误差在±2%之内）。

表3离子丰度比的最大允许偏差范围

离子丰度比＞50%＞20%～50%＞10%～20%≤10%

最大允许相对偏差±10%±15%±20%±50%

阴性结果评价：将样品与氯胺酮标准物质的色谱图和质谱图进行比对，满足如下条件之一时，判定

为样品中未检出目标物。

a）在相同条件下进行GC-MS测定时，扣除背景后，10.0mg/mL样品溶液中未出现与定性质控标

准工作溶液中目标物一致的特征离子，标准溶液空白无干扰，可判断样品中未检出目标物。

b）在相同条件下进行LC测定时，10.0mg/mL样品溶液中未出现与定性质控标准工作溶液中目标

物保留时间一致的色谱峰，标准溶液空白无干扰，可判断样品中未检出目标物。

8.1.2LC-MS定性结果评价

阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，样品溶液中目标物与浓度接近的定性用标准工作溶

液中的目标物相比，色谱峰保留时间相对误差在±2.5%以内，定性离子对（至少两对）与标准物质工作

溶液一致，且离子对丰度比相对偏差不超过表4规定的范围，样品空白无干扰，则可判断检材样品中检

出目标物。氯胺酮液相色谱图、MRM色谱图参见附录E。

表4离子丰度比的最大允许偏差范围

离子对丰度比＞50%＞20%~50%＞10%~20%≤10%

最大允许相对偏差±20%±25%±30%±50%

阴性结果评价：扣除背景后，样品溶液中未检出目标物特征离子对，定性质控标准工作溶液中检出

目标物特征离子对，标准溶液空白无干扰，则可判断样品中未检出目标物。

8.2定量结果评价

8.2.1相对相差检验

平行称取或移取2份样品时，测定数据按照公式（5）计算相对相差（RD）。

-

RD=12100%…………………（5）

式中：

RD—相对相差，用百分比（%）表示；

ω1、ω2—两份样品平行定量测定的含量数值；

—两份样品平行定量测定的含量平均值；

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当RD小于等于10%时，数据有效；当RD大于10%时，需要重新检验。

8.2.2异常值检验

平行称取或移取6份样品时，测定数据按照公式（6）进行Grubbs可疑值判别。

i0-

G=i…………（6）

s

式中：

ωi—可疑值；

ω0—6个（5个）数据的平均值；

s—6个（5个）数据的单次测定标准差；

Gi—Grubbs统计值。

当测定次数n=6时，G6（95）=1.822；当测定次数n=5时，G5（95）=1.672。

Gi小于Gn（95）时，数据有效，Gi大于等于Gn（95）时，应剔除该数据，但只能剔除1个数据，否则本次

测定无效，需要重新检验。

8.2.3含量结果计算

平行称取或移取2份样品时，以2份样品含量测定的平均值作为定量结果；

平行称取或移取6份样品时，以6份（5份）样品含量测定的平均值作为定量结果。

8.2.3结果表述

阳性结果应表述为：从样品中检出氯胺酮成分，其中氯胺酮含量为……。含量用百分比表示。

阴性结果表述为：从样品中未检出氯胺酮成分。

8.4测量不确定度的评定与表述

如需提供测量不确定度，测定结果的不确定度评定与表述按GB/T27418执行。

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附录A

（资料性）

氯胺酮基本信息

氯胺酮的相关信息见表A.1。

表A.1氯胺酮相关信息

中文名称英文名称化学式结构式CAS号

Cl

O

氯胺酮ketamineC13H16ClNO6740-88-1

NH

CH3

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附录B

（资料性）

外标法样品提取操作参数

外标单点法样品提取操作参数选择见表B.1。

表B.1外标单点法样品提取操作参数

初次定容体积标准溶液浓度

预分析含量稀释倍数

mLmg/mL

50%～100%20210.1

30%～50%20110.1

10%～30%10110.1

5%～10%30--0.1

2%～5%20--0.1

1%～2%10--0.1

0.1%～1%10--0.01

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附录C

（资料性）

氯胺酮气相色谱、气相色谱-质谱相关谱图

氯胺酮、羟亚胺的色谱图及质谱图见图C.1~C.3。

(x1,000,000)

7.5

7.0

6.5

5.316

6.0

5.5

5.0

4.54.650

4.0

3.5

3.0

2.5

2.0

1.5

1.0

0.5

2.03.04.05.06.07.08.09.010.011.0

说明：

1——羟亚胺（4.650min）；

2——氯胺酮（5.316,min）。

图C.1氯胺酮和羟亚胺气相色谱-质谱总离子流图

180

100

Cl

O

50

NH

209

152

30138

145166

27102115174

42125132237

515563677589194

0

2030405060708090100110120130140150160170180190200210220230240250

(mainlib)Cyclohexanone,2-(2-chlorophenyl)-2-(methylamino)-,(?-

图C.2氯胺酮参考EI质谱图

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(x10,000)

1.00

152

0.75

0.50

154

0.25138

102180

42557589125174196

0.00237

50100150200250

图C.3羟亚胺参考EI质谱图

15

GB/TXXXXX—XXXX

附录D

（资料性）