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SZDB/ZSZDB/Z206-2016H7N9亚型禽流感病毒抗体血凝抑制试验检测方法ProtocolofHaemagglutinationInhibitionTestforDetectionofAvianInfluenzaVirusAntibodySubtypeH7N92016-11-15发布2016-12-01实施深圳市市场监督管理局发布I 1 1 1 1 1 2 28微量血凝（HA）试验测定抗原效价 2 3 5 61标准通过HA-HI试验，用已知的H7N9亚型禽流感病毒来检查被检血清中的相应的H7N9亚型禽流感病毒抗2d)冰箱（2℃~8℃,-20℃,-80℃);5.2.1试剂级别5.2.3其它试剂）（）；离心5min，直接取上层血清进行检测或保存。非鸡禽类血清，应进行红细胞吸附试验以去除非特异性凝集。具体方法为：向0.5mL血清中加入25μL鸡红细胞泥（配制方法附录A），轻轻震荡混匀，室温（20℃~25℃)静置30min，1000g离心5min，吸取上清用于检测或保存。不能立即检测，可于2℃~8℃冰箱中暂时存放不超过三天；-20℃保存不超过三个月；-80℃以8微量血凝（HA）试验测定抗原效价和回测3}}}}}}}}123456789123456789 25}25}25}2525} 25}2525}2525}2525}室温（20℃~25℃),反应40mine)置室温（20℃~25℃)反应40min后观察结果。每孔补加25μLPBS，再加1%鸡红细胞悬液，25μL/孔，室温（20℃~25℃)反应40min；c)判定血凝结果与预期结果是否相符合。2HAU、1HAU孔红细胞应出现完全凝集，0.5HAU孔4}}1234567892525}2525} 25}2525}2525}2525} 2525} 25}2525}室温（20℃~25℃)反应30min室温（20℃~25℃)反应40minb)取被检血清25μL于第1列孔中，混匀后吸取25μL加入第2列孔，依）；e)置室温（20℃~25℃)反应30min；g)室温（20℃~25℃)反应40min。a)将V型反应板置于45°倾斜的白色判读板上，30s后开始判读，b)检查各个对照。抗原对照孔出现红细胞完全凝集，且阴性血清HI效价不大于22，阳性血清HI效c)以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI效价。HI效价大于或等于25为阳性，HI5A.10.01mol/LPBS(pH7.2～7.4)氯化钠（NaCl）经121℃,15min高压灭菌，保存于室温或4℃冰箱中备用。8.0g20.5g去离子

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