DB62T 2692-2021 羊传染性胸膜肺炎防治技术规范

DB62/T2692—2021羊传染性胸膜肺炎防治技术规范2021-09-04实施2021-09-04实施I本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件代替DB62/T2692—2016《羊传染性胸膜肺炎防治技术规范》,与DB62/T2692—2016相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a)更改了规范性引用文件；b)更改了术语和定义；c)更新了病料采集、染色镜检、病原分离、间接血凝试验方法；d)增加了生化试验、间接酶联免疫吸附试验、核酸检测、结果判定、免疫接种、药物预防、附录e)删除动物回归试验、附录A。本文件由甘肃省农业农村厅提出并监督实施。本文件由甘肃省畜牧业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：甘肃省动物疫病预防控制中心、甘肃农业职业技术学院、甘肃省农民教育培训工作总站、庆城县动物疫病预防控制中心、永登县红城镇农业农村综合服务中心、庆城县驿马镇兽医站。本文件主要起草人：车小蛟、郑红飞、张小宁、张慧君、郭赌、全妮、张娇、赵鹏。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：——2016年首次发布为DB62/T2692—2016;——本次为第一次修订。本文件由甘肃省动物疫病预防控制中心解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至《羊传染性胸膜肺炎防治技术规范》地方标准编制组(地址：甘肃省兰州市城关区红柳滩路41号，邮编：730046,联系人：车小蛟，E-mail:279005698@,联系方式,以供今后修订时参考。仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T39915动物饲养场防疫准则NY/T1167畜禽场环境质量及卫生控制规范NY/T1168畜禽粪便无害化处理技术规范NY5027无公害食品畜禽饮用水水质NY/T5030无公害农产品兽药使用准则NY5032无公害食品畜禽饲料和饲料添加剂使用准则NY5149无公害食品肉羊饲养兽医防疫准则NY/T5151无公害食品肉羊饲养管理准则3术语和定义4.1流行病学工2种只感染山羊，3岁以下的山羊最易感染；而绵羊肺炎支原体可感染山羊和绵羊。易感羊群发病率可达80%～100%,病死率可达40%左右。发病急，体温高达41℃~42℃,精神沉郁，食欲废绝；数小时后出现肺炎症状，呼吸困难，咳嗽，12h～24h,有的突然倒地死亡；病死羊鼻孔中流34.4.4生化试验按照NY/T1468-2007的2.4.2内容操作，培养基制作按附录A规定的方法操作。4.5血清学试验4.5.1间接血凝试验具体操作方法按照NY/T1468-2007的3.1内容操作。4.5.3生长抑制试验按附录B规定的方法操作。4.5.4代谢抑制试验4.5.5直接免疫荧光抗体试验按附录D4.5.3生长抑制试验按附录B规定的方法操作。4.5.4代谢抑制试验4.5.5直接免疫荧光抗体试验按附录D规定的方法操作。4.6核酸检测4.6.1样品DNA的提取O4.6.2PCR试验按附录E规定的方法操作。4.7结果判定4.7.1符合4.1、4.2和4.3的，判定为疑似羊传染性胸膜肺炎。4.7.2符合4.1、4.24.3的，同时符合4.4.2或4.5.1或4.5.2或4.5.3或4.5.4或4.5.5或4.6.2的，确诊为羊传染性胸膜肺炎。5.1加强饲养管理增强羊群的抵抗力。饮水要求按照NY5027的规定执行；饲料应符合NY5032的要求，根据羊的生长阶段配制饲料，供给富含蛋白质、矿物质、维生素的饲料；饲养管理按照GB/T39915和NY/T5151的规定执行；环境控制应符合NY/T388、NY/T1167的规定。5.2严格羊群检疫4建立基础母羊群，坚持自繁自养，羊群密度要适。加强检疫工作，防止引入或迁入5.3.1每年9月份，对健康羊群进行预防接种。5.3.2山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，预防由Mmc引起的传染性胸膜肺炎，成年山羊每只5mL,6月龄以下羔羊每只3mL,颈背侧皮下或肌内注射，免疫期12个月。5.3.3绵羊肺炎支原体灭活疫苗，预防绵羊、山羊由Movi引起的传染性胸膜肺炎，成年绵羊或山羊每只3mL,6月龄以下羔羊每只2mL,颈侧皮下或肌内注射，免疫期12个月。5.3.4山羊支原体肺炎灭活疫苗，可同时预羊颈部皮下注射3mL,免疫期10个月。5.3.5对身体瘦弱、体温升高或有慢性疾病的羊不宜注射；对产后母羊、羔羊和从异地引进的羊应及时补免。在冬春时节、气候骤变时，可选用中草药进行预防，按附录F规定的方法操作。或定期肌内注射广谱抗菌素如恩诺沙星、壮观霉素等，使用方法按照药品发现疫情及时上报，对发病羊群按NY5149的规定进行隔离、封锁，并做好消毒工作。对病死羊、5(规范性)培养基A.1改良Hartley氏消化汤培养基(液体培养基)胰蛋白胨8g,灭菌Hartley氏消化汤600mL,灭菌0.5%水解乳蛋白Hank,s液1000mL,0.4%酚红20mL,混匀，加青霉素至200IU/mL,用3.5%NaHCO3调节pH至7.6,用单板式滤器过滤除菌后，加入无菌灭能的猪血清400mL,分装于10mL玻璃瓶中，放入37℃普通温箱做杂菌检验，待无菌生长便可使用。A.2改良Hartley氏琼脂培养基(固体培养基)改良Hartley氏消化汤培养基中加入琼脂，使其含量达1.3%～1.5%,经121kPa高压灭菌30min即成。A.3选择性培养基增菌培养基内加80:1的1%醋酸铊和青霉素200IU/mL;制作平板时加1%琼脂。OT6(规范性)生长抑制试验B.1.1液体培养基：配制方法件附录A.1;B.1.2不同支原体阳性血清：丝状支原体丝状亚种、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊肺炎亚种、绵羊肺炎支原体和精氨酸支原体；B.1.3滤纸。B.2操作步骤将鉴定菌株24h培养液摇匀，取0.25mL滴于平板上，用L型玻棒将其均匀涂抹于培养平板表面后，用分别浸取了4倍稀释的不同支原体阳性血清、直径7mm的定性滤纸片分别贴附于平板表面，每块平板贴3片～4片，37℃培养24h～48h。观察并记录抑菌圈大小。每株待检菌株作3次，求平均值。B.3结果判定抑菌圈直径2mm或以上者判为阳性。7(规范性)C.1.1选择性培养基：配制方法见附录A.3;入阳性血清1mL,充分混匀后取1mL移入第2管，照此类推至第8管。再向每管中加入上述培养基1mL,123456789阳性血清稀释倍数22一一阳性血清11111111111工8(规范性)D.1试剂D.1.2标准抗羊传染性胸膜肺炎的D.2.1荧光显微镜。将稀释至工作浓度的荧光抗体，滴加在待检标本面上，室温恒湿染色30min,取PBS轻洗琼脂表面9(规范性)E.1操作步骤对所有样品同时用丝状支原体簇通用引物和绵羊肺炎支原体特异引物进行检测，每次检测均设相丝状支原体簇通用引物用来检测Mccp和Mmc,退火温度为62℃,目的条带为548bp。MmR5'-TTGAGATTAGCTCCCCTTCACAG-3'绵羊肺炎支原体特异引物用来检测Movi,退火温度为55℃,目的条带为361bp。LmF5’-TGAACGGAATATGTTLmR5’-GACTTCATCCTGCACTCTGT-3'PCR产物4℃保存。E.2结果判定PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳，在对照成立的前提下，被检样品出现548bp(或361bp)一条带，判定为阳性。(规范性)中药验方F.1中药验方1黄芩150g、前胡150g、麦冬150g、白芍150g、黄柏150g、板蓝根200g、紫菀150g、神曲250g、栀子150g、柴胡150g、杏仁150g、山楂250g、连翘150g、荆芥150g、化橘红150g、麦芽250g、金银花150g、