标准解读

《DB31/T 600-2012 猪附红细胞体PCR检测方法》是一项地方标准，由上海市质量技术监督局发布，旨在规范猪附红细胞体（Mycoplasma suis）的PCR检测流程。该标准适用于动物疫病预防控制机构、兽医实验室以及相关科研单位对猪附红细胞体感染进行分子生物学诊断时使用。

标准中详细描述了从样本采集到最终结果分析的全过程。首先，在样本准备阶段，推荐采用血液作为检测材料，并且对于采血部位、采血量等都有具体要求，以确保所取得的样本能够准确反映猪只是否受到猪附红细胞体感染。接着是DNA提取步骤，通过特定试剂盒或手动操作完成，目的是获得高质量的基因组DNA用于后续实验。

在PCR反应体系构建方面，《DB31/T 600-2012》规定了包括引物设计、Taq酶选择、dNTPs浓度在内的多个关键参数设置建议，这些设置直接影响到扩增效率和特异性。此外，还给出了详细的热循环条件，如预变性温度及时长、退火温度及延伸时间等，这些都是保证实验成功的重要因素。

对于结果判读，《DB31/T 600-2012》提出了基于凝胶电泳图谱分析的方法，通过比较目标条带与阳性对照之间的位置关系来确定样品中是否存在猪附红细胞体DNA。同时，也强调了实验过程中应注意避免污染的重要性，比如使用专用移液器、设立阴性对照等措施，以提高检测准确性。

整个标准文件围绕如何科学有效地实施猪附红细胞体PCR检测展开，为从事相关工作的人员提供了明确的操作指南和技术支持。


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....

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  • 废止
  • 已被废除、停止使用，并不再更新
  • 2012-05-17 颁布
  • 2012-10-01 实施
©正版授权
DB31/T 600-2012猪附红细胞体PCR检测方法_第1页
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文档简介

ICS11220

B42.

备案号34154—2012

:

上海市地方标准

DB31/T600—2012

猪附红细胞体PCR检测方法

MethodofdetectingEperythrozoonsuisbyPCR

2012-05-17发布2012-10-01实施

上海市质量技术监督局发布

DB31/T600—2012

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由上海交通大学提出

。

本标准由上海市畜牧办公室归口

。

本标准由上海交通大学中华人民共和国上海出入境检验检疫局上海市动物疫病预防控制中心

、、、

上海市动物卫生监督所起草

。

本标准主要起草人杨志彪袁聪俐华修国夏永高崔立朱建国陈琦蒋静

:、、、、、、、。

Ⅰ

DB31/T600—2012

猪附红细胞体PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪附红细胞体检测方法

PCR。

本标准适用于猪附红细胞体的检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

实验室生物安全通用要求

GB19489

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件

。

31

.

附红细胞体Eperythrozoons

附红细胞体病的病原主要寄生于人和动物的红细胞表面血浆及骨髓以引起

(Eperythrozoonsis),、,

贫血黄疸和发热为主要特征是一种重要的人兽共患病病原

、,。

32

.

猪附红细胞体Eperythrozoonsuis

猪附红细胞体病的病原主要寄生于猪的红细胞表面血浆及骨髓以引起贫血黄疸和发热为主要

,、,、

特征并有隐性感染慢性迁延条件致病急性发病时致死率高的特征

,、、、。

4原理

以从血液样本中提取的基因组作为模板加入到扩增猪附红细胞体的反应混合液中

DNA,PCR,

进行扩增最后通过琼脂糖凝胶电泳检测产物与进行比较来确定扩增产物

PCR。PCR,DNAMarker,

的大小在此基础上判定样品的检测结果

,。

所用引物是根据猪附红细胞体保守序列设计

16SrRNA。

5试剂和材料

除另有规定所用试剂均为分析纯水为符合的灭菌双蒸水

,,GB/T6682。

51猪附红细胞体反应混合物

.PCR:

上下游引物各缓冲液含镁离子双蒸水加至引物序列如下扩

、1μL,10×PCR2.5μL(

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