《肉牛繁育技术规程》征求意见稿

DB3405/T××××-2008PAGE2PAGE1安徽省市场监督管理局 发布2025-××-××实施20安徽省市场监督管理局 发布2025-××-××实施2025-××-××发布肉牛繁育技术规程Codeofpracticeforbeefcattlebreeding（草案）DB34/T-xxxx34安徽省地方标准ICS 65.020.30CCSB43 DB/2025PAGEI前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽农业大学提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽农业大学、安徽省畜禽遗传资源保护中心、凤阳县动物疫病预防与控制中心、旌德县动物疫病预防与控制中心、绩溪县动物疫病预防与控制中心、凤阳县大明农牧科技发展有限公司本文件主要起草人：宋宁、刘洪瑜、邱孝青、邵智骅、廖凤先、涂小璐、丁路江、席海龙、陈宏达、杜焕睿、万颖、龙小雪、解晋、赵勇、吴永刚。PAGE3肉牛繁育技术规程范围本文件规定了肉牛种公牛、繁殖母牛、发情鉴定、配种、胚胎移植、妊娠诊断等技术要求。本文件适用于肉牛保种与繁育场户种公牛选育、母牛发情配种、胚胎移植及妊娠鉴定技术操作。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4143-2022牛冷冻精液GB/T25881-2010牛胚胎GB/T26938-2023牛体内胚胎生产与移植技术规程NY/T1335-2022牛人工授精技术规程术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination用人工方法采取公牛的精液，并注入到发情母牛生殖道内，达到母牛受胎的一种技术。3.2同期发情estrussynchronization用激素或类激素药物处理，使一批母牛在预定的时间内集中发情。3.3超数排卵superovulation用外源性促性腺激素诱发动物卵巢的多个卵泡发育，并排出具有受精能力卵子的方法。3.4胚胎移植embryotransfer将供体牛体内或者体外获得的早期胚胎移植到生理周期同步的一头或数头受体牛体内，使之继续发育成正常个体的生物技术。种公牛4.1种公牛的外貌和生产性能，须符合品种标准，具有繁殖育种价值并作选留的公牛。4.2无传染病，体质健壮，发育良好，对环境适应性强，抗病力强。繁殖母牛5.1初配年龄宜在1.5岁以上，体重应为成年体重的70％以上。5.2健康，繁殖机能正常。发情鉴定6.1外观检查6.1.1发情前期母牛兴奋不安，眸叫，游走，食欲减退，追逐爬跨它牛，而它牛爬跨不予接受；阴门肿胀，松弛，充血，子宫颈口微张，有稀薄透明粘液流出，阴道壁潮红；卵巢变软，光滑略有增大。6.1.2发情中期母牛游走减少，它牛爬跨时站立不动，后肢张开，频频举尾，接受爬跨；子宫颈口红润开张，阴道壁充血，粘液显著增加，流出透明粘稠玻璃棒样粘液；一侧卵巢增大到0.5～1.0cm。6.1.3发情后期母牛转入安静，它牛爬跨时臀部避开，不接受爬跨；粘液量减少，混浊粘稠。子宫颈口紧闭，阴唇肿胀消退，重现皱褶，尾根紧贴阴门；卵泡增大到1.0～2.0cm，波动明显，泡壁变薄。6.2直肠检查6.2.1检查人员手臂消毒后，带上牛用一次性长臂塑料手套，涂抹润滑剂五指并拢呈楔形插入母牛直肠，掏出宿粪，顺次触摸子宫颈、子宫和卵巢，检查卵泡发育程度，判断发情程度及排卵时间。6.2.2卵泡发育一期（卵泡直径0.5～1.0cm)，感觉是一个软化点，波动不清楚，此期持续10h。6.2.3卵泡发育二期（卵泡直径1.0～2.0cm)，卵泡呈小球状，波动明显，此期持续10～12h。6.2.4卵泡发育三期（卵泡体积不再变大，但卵泡壁变薄），卵泡有一触即破之感，此期持续6～8h，是配种最适时间。6.2.5卵泡发育四期，卵泡破裂，排卵处形成凹陷，再经过6～8h，黄体开始形成，大多数牛在性欲消退后10～15h排卵，初产牛比经产牛排卵稍早。配种7.1与配公牛的选择在避免近亲交配的情况下，根据母牛的体型外貌缺点，采用同质选配或异质选配，选择等级高于或等于母牛等级的适宜公牛。7.2自然交配种公牛与发情母牛直接配种。7.3人工授精按照NY/T1335-2022执行。胚胎移植8.1供体牛的选择8.1.1符合本品种特征，系谱清晰，且年龄达到1.5岁以上。8.1.2生殖器官正常，生殖周期正常、发情症状明显，有两次发情记录且子宫恢复正常。8.1.3无卵巢囊肿、子宫内膜炎、难产、产后瘫痪及产后胎衣不下等繁殖疾病，无传染性疾病。8.1.4体况中上，体型外貌评级一级以上，健康无病。8.2受体牛的选择8.2.1乳房发育良好，性情温顺，经产牛3胎以下，应有两个以上连续的正常发情周期，泌乳性能、产犊性能良好，无连续两次人工授精未孕记录。牛体健康，子宫弹性、厚薄正常，卵巢发育正常。中等膘情。8.2.2当母牛群体数量比较大时，可以选择自然发情与供体发情时间相同或相近的母牛，一般两者发情时间前后相差不宜超过24h。8.2.3为提高胚胎移植的成功率，需对受体牛的生理周期进行正确评价，可采用外部表现、生殖道分泌物及直肠法进行鉴定。8.3同期发情同期发情处理之前进行直肠触摸，检查卵巢是否有周期性黄体。在同期发情和超数排卵激素处理时，初产牛使用低剂量，经产牛使用高剂量。8.3.1肌肉注射前列腺素（PG）法第一次注射：在任意一天注射PG20～30mg。第二次注射：在第一次注射后第11d，第二次注射后24～96h时观察发情。高温季节需调整PG注射时间或增加维生素E补充，避免热应激反应。8.3.2孕激素阴道栓塞（CIDR）法在任意一天放入CIDR，放置于子宫颈口周围，放CIDR日定为0d，在第7～9d注射PG，第9～11d取出CIDR，观察发情。8.4供体牛的超数排卵8.4.1促卵泡素（FSH）注射法在发情周期的第9～13d中的任何一天开始肌肉注射。FSH总量10～15mg，单次最大注射剂量2～3mg，连续注射4d，间隔12h递减给药。在第一次注射FSH后48h及60h，各肌肉注射一次PG。8.4.2FSH+CIDR联合法埋植CIDR的供体，在第5d（放CIDR日定为0d）开始肌肉注射FSH。FSH总量10～15mg，单次最大注射剂量2～3mg，连续注射4d，间隔12h递减给药。8.4.3人工授精按照NY/T1335-2022执行。8.5胚胎的收集8.5.1冲胚时间一般在第6～8d（发情时为0d）冲胚。此时的胚胎大多处于桑葚胚和早期囊胚阶段，位于母牛的子宫角上端，此时胚胎处于游离状态，可以通过非手术法将胚胎从子宫角冲出。8.5.2冲胚方法非手术法冲胚，主要借助于二路式冲胚器进行。冲胚液杜氏磷酸缓冲液需确保无细菌、真菌等微生物污染。玻璃器皿与金属器械需经高压蒸汽灭菌消毒。8.5.2.1牛入保定架，用2%利多卡因5～15mL在荐椎和第1尾椎之间实施硬膜外鞘麻醉。8.5.2.2清除母牛直肠粪便，并将外阴部冲洗干净。8.5.2.3用扩张棒扩张子宫颈，然后插入宫颈黏液器将黏液抽出。8.5.2.4将带内芯的冲胚管插入子宫角，当冲胚管到达子宫角弯处时，拔出内芯5cm左右，再把冲胚管往子宫角前端推进，当内芯再次到达子宫角弯处时，再向外适当拔出内芯，直到冲胚管到达子宫角前端为止。8.5.2.5先向冲胚管气囊充空气2～3mL，确定气囊位置合适后，再充适量空气固定冲胚管。8.5.2.6抽出冲胚管内芯，连接冲胚管和三通导管。8.5.2.7冲胚时，先钳住三通导管的输出管，用注射器将冲胚液从输入管注入子宫角，然后钳住输入管，轻缓地按摩子宫角，使冲胚液从输出管流入集胚杯中，反复几次，冲完一侧子宫角再冲另一侧，每个子宫角用500mL冲胚液。8.5.2.8两子宫角均冲完后，将气囊中的空气放出，冲胚管抽出至子宫体，灌注抗生素和前列腺素。8.6检胚从母牛生殖道冲出的冲胚液要保持在37℃，而后在20～30℃的无菌操作室内进行操作。记录供体牛采胚记录表，见附录A.1。集卵滤皿放在40～100倍体视显微镜下，逐格检查，检出的胚胎用培养液清洗3次，放入含有矿物油的培养液中35～37℃暂存，检胚完成后进行等级鉴定。A、B级胚胎用于移植或冷冻。胚胎的等级分类按照GB/T25881-2010执行。8.7胚胎的移植8.7.1胚胎的分装向胚胎移植细管分装胚胎时，先吸少量培养液于管一端，而后吸入一段空气，然后将含有少量培养液的胚胎吸入，随后再吸空气，最后再吸入一点培养液。为了防止胚胎丢失，还需在细管的尖端保留一段空间。8.7.2胚胎的保存常温保存采用商品或者自制的胚胎保存液，在常温（15～25℃）下保存胚胎4～8h准备移植。冷冻保存采用液氮罐保存胚胎。8.7.3移植采用非手术移植法进行胚胎的移植。记录受体牛胚胎移植记录表，见附录A.2。8.7.3.1将盛有胚胎的塑料细管装入胚胎移植器。8.7.3.2受体牛的保定、消毒和麻醉与供体相同。8.7.3.3移植前对受体牛进行直肠检査，黄体达到A级的母牛用于移植。8.7.3.4移植时，首先分开受体阴唇，将移植器插入阴道，为防止阴道污染移植器，在移植器外面套上经消毒的塑料薄膜，当移植器前端到达子宫颈外口时，将塑料薄膜撤回，按直肠把握输精的方法使移植器通过子宫颈，当移植器通过子宫颈、子宫体到达子宫角时，将胚胎注入。8.7.3.5由于受体大都处于发情后6～8d，子宫颈口封闭较紧，尤其青年受体，因此通过子宫颈口比发情输精时困难，移植者要谨防损伤子宫颈，初产母牛往往要首先使用子宫颈扩张棒进行扩张。8.7.3.6胚胎移植使用的设备、器械与试剂按照GB/T26938-2023执行。妊娠诊断9.1外部观察法母牛配种后在下一个情期不再发情，且性情温和，食欲大增，膘度增加，毛色越来越光亮，体重增加，腹围增大，则为怀孕。9.2B超检查法9.2.1准备工作9.2.1.1使用B超前，应先阅读使用说明书，确定每个按键的作用。9.2.1.2将探头与主机连接，开机调试，同时注意电量是否充足。9.2.1.3准备好工作记录本。9.2.1.4被测母牛处于自然站立姿势，将牛头固定牛颈枷内，保证牛不乱动。9.2.2检测流程9.2.2.1操作者手臂消毒后戴一次性长臂消毒手套蘸水或涂润滑剂，掏出直肠内宿粪。将子宫角和卵巢在盆腔的位置触摸清楚，初步判定子宫角或者卵巢的变化，确定B超探头的放置位置，利于B超探头探测。9.2.2.2将B超探头接触面蘸水、涂抹耦合剂或植物油，把中指平置于探头的凹陷处，五指并拢呈锥型，用食指、无名指、大拇指及小指夹住探头进入直肠，放在子宫角一侧（子宫角小弯或大弯处），进行扫描，得出图像，判定结果。9.2.3检后处理9.2.3.1记录好每头牛的怀孕情况，如果发现没有怀孕的牛可过2～3d再次进行检测。9.2.3.2B超仪使用后清洗消毒，放入仪器箱内进行保存。9.3直肠检查法与6.2直肠检查步骤相同，依据卵巢上黄体、子宫形态和质地、子宫动脉情况综合判断，参见表1。表1母牛怀孕各月份生殖器官变化情况表妊娠期卵巢子宫子宫动脉1孕角卵巢体积增大，黄角间沟仍