协同增效：两株生防细菌复合菌剂对番茄灰霉病的防治效能解析

协同增效：两株生防细菌复合菌剂对番茄灰霉病的防治效能解析一、引言1.1研究背景与意义番茄（SolanumlycopersicumL.）作为全球广泛种植的重要蔬菜作物，在农业经济与人们的日常生活饮食中占据着举足轻重的地位。它不仅富含多种维生素（如维生素C、维生素E、番茄红素等抗氧化剂）、矿物质以及膳食纤维，对人体健康大有裨益，还具有极高的经济价值，是众多农户的主要经济来源之一，广泛应用于鲜食、加工（番茄酱、番茄汁、番茄罐头等）等领域。然而，番茄生长过程中易遭受多种病害的侵袭，其中番茄灰霉病（Tomatograymold）是由灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.）引起的一种极具破坏力的世界性病害，主要发生在花期和结果期，可危害花、果实、叶片和茎，尤其在保护地栽培中发生更为普遍和严重。在一些地区，番茄灰霉病已被列为番茄三大病害之首。该病发生时间早、持续时期长，不仅在植株生长期间严重发生，在采后的储藏、运输过程中也会继续造成严重危害。一旦发病，常造成早春大量烂果，一般减产20-30%，严重地块甚至高达50%左右，给番茄产业带来巨大的经济损失。灰葡萄孢属半知菌亚门葡萄孢属真菌，其孢子梗数根丛生，具隔，褐色，顶端呈1-2次分枝，分枝顶端稍膨大呈棒头状，其上密生小柄并着生大量分生孢子。分生孢子圆形至椭圆形，单胞，近无色。病菌发育适宜温度为20-30℃，最低2℃，最高31℃，产生分生孢子的适温为16-20℃，且孢子产生、萌发和侵染均需要高湿度。除茄科蔬菜外，还可侵染黄瓜、菜豆、莴笋、生菜、芹菜、韭菜、大蒜、草莓等多种作物。目前，针对番茄灰霉病的防治措施主要包括农业防治、化学防治和生物防治。农业防治虽能在一定程度上减轻病害，但难以完全控制；化学防治虽效果显著，但长期大量使用化学农药易导致病原菌产生抗药性，还会造成环境污染、农药残留等问题，威胁人类健康和生态平衡。例如，在一些长期单一使用化学农药防治番茄灰霉病的地区，灰葡萄孢对多种常用杀菌剂的抗性不断增强，使得防治效果大打折扣，同时农产品中的农药残留超标问题也时有发生。生物防治作为一种绿色、环保、可持续的防治手段，逐渐受到人们的关注。生防细菌因其具有环保、安全、持久等优点，能够在作物生长环境中长期存在，持续发挥防治作用，且对环境和人类健康无害，还能促进作物生长，提高作物的抗逆性和产量，成为生物防治领域的研究热点。而生防细菌复合菌剂通过将两种或多种具有不同作用机制和优势的生防细菌组合在一起，可充分发挥群体的联合作用优势，协同提高防治效果，克服单一菌剂的局限性，具有更广阔的应用前景。例如，有的生防细菌复合菌剂中，一种细菌能够快速定殖在植物体表，与病原菌争夺营养物质和空间，抑制病原菌的生长；另一种细菌则可产生多种抗菌物质，直接抑制或杀死病原菌，两者结合，能更有效地防治番茄灰霉病。本研究旨在筛选出对番茄灰霉病具有高效防治作用的两株生防细菌，并制备复合菌剂，深入研究其对番茄灰霉病的防治效果及作用机制。这不仅有助于丰富番茄灰霉病的生物防治理论和技术体系，为番茄灰霉病的绿色防控提供新的方法和策略，还能减少化学农药的使用，降低环境污染，保障农产品质量安全，促进番茄产业的可持续发展。1.2番茄灰霉病概述番茄灰霉病是一种极具破坏力的世界性病害，严重威胁着番茄的生长发育与产量品质。其病原菌为灰葡萄孢（BotrytiscinereaPers.Fr.），属半知菌亚门葡萄孢属真菌。该病菌的孢子梗数根丛生，带有隔膜，颜色呈褐色，顶端会出现1-2次分枝，分枝顶端稍微膨大，形状如同棒头，上面密集生长着小柄，并着生大量分生孢子。分生孢子的形状为圆形至椭圆形，单胞，近乎无色，大小在6.25-13.75微米×6.25-10.0微米之间。在寄主上通常很少能见到菌核，但当田间条件恶化时，便会产生黑色片状菌核。从番茄果实及叶上分离的灰霉，在普通培养基上生长一周后，便开始产生菌核，两周后菌核大小可达3.0-4.5微米×1.8-3.0微米。培养基上的菌丝透明无色，且有隔膜。番茄灰霉病的症状表现较为复杂，植株地上部分均可受害，其中以果实和叶片受害最为严重。幼苗染病时，子叶先端会发黄，叶片呈现水渍状腐败；幼茎受害初期为水渍状溢缩，随后变成褐色病斑，常常发生折断。果实发病多从残留的败花和柱头部开始被侵染，从而造成花腐，之后向果面和果柄扩展，一般在近果蒂、果柄或果脐处先出现症状。幼果会全果软腐，果实成熟前病部果皮呈灰白色，水渍状软腐，很快发展成不规则形大斑，果实失水后会僵化或湿润软腐。病果一般不会脱落，发病后相互接触容易感染、扩大蔓延，严重时会导致整穗果实全部腐烂。叶片发病多从叶尖开始，向内呈“V”字形扩展，病斑初呈水渍状，边缘不规则，后呈浅褐色至黄褐色，具有深浅相间的轮纹。染病的花瓣、花蕊等落到叶面或枝杖上，可形成圆形或梭形病斑。茎较少受害，损伤处染病后开始呈水渍状，后扩展为长椭圆形或长条形斑。当病斑环绕茎部时，其上端枝叶会萎蔫枯死。在潮湿的环境下，受害果、叶、茎的病部会密生灰褐色霉层，渐渐在灰霉中还会散生大小不同的黑色菌核。番茄灰霉病的发病规律与多种因素密切相关。在侵染循环方面，病菌主要以菌核遗留在土壤中，或以菌丝体和分生孢子在病残体上越冬或越夏，也能在其他有机物上腐生存活，成为下茬蔬菜的侵染源。当环境适宜时，菌核会萌发产生菌丝体和分生孢子。分生孢子会随着气流、雨水或露滴、农事操作中的工具、衣着等进行传播，多从寄主衰弱的器官、组织或伤口处侵入，进而引起发病。并且存在由附着转入侵染的潜伏现象，染病部又会产生分生孢子，借助气流等再次传播进行再侵染。从流行规律来看，番茄灰霉病最适发病期为始花至坐果期，一般第一、第二穗果发病率较高。在日光温室早春茬栽培的番茄，其发病流行过程可划分为三个时期：3月初至4月上旬为叶部灰霉病始发期，该时期病情平稳发展；4月上旬至4月下旬为叶部灰霉病上升期，此时病害发展迅速；4月下旬至5月下旬为该病发生高峰期。番茄定植后20-25天（3月中下旬）第一层果开始发病，之后病果迅速上升，4月中旬为盛发期，以后随着温度的上升温室放风量增大，病情开始下降。第二层病果在4月上旬发生，之后病果率迅速上升，4月下旬至5月初达到高峰期。第三层果在第二层果发病后15天左右开始发生，4月下旬至5月初达到高峰期。气候因素对番茄灰霉病的发生影响显著，温度在20℃左右，相对湿度持续96%以上，非常有利于此病的发生。例如，据中国北京等地调查，日光温室秋延后番茄发病盛期在12月中旬，冬季加温温室为1月中旬，在冬春季半加温中棚或冷棚、春季大棚和半加温大棚中番茄灰霉病发病盛期在3月下旬至4月下旬。而且半加温棚式中发病盛期多处停火期后遇阴天，非加温棚式中则多在浇水过量后遇阴天。此外，栽培因素也不容忽视，植株徒长、温室透光差、光照不良、管理不当、耕作粗放、氮肥过量或不足、灌水后放风不及时、病果、病残体清除不及时等情况都容易导致番茄灰霉病的发生。番茄灰霉病不仅在植株生长期间严重发生，在采后的储藏、运输过程中也会继续造成严重危害，给番茄产业带来了巨大的经济损失。一般情况下，发病会造成减产20-30%，严重地块甚至高达50%左右。在一些地区，番茄灰霉病已被列为番茄三大病害之首，对番茄的安全生产构成了严重威胁。因此，深入研究番茄灰霉病的防治措施具有重要的现实意义。1.3生防细菌研究现状生防细菌作为生物防治领域的重要组成部分，在植物病害防治中发挥着关键作用。随着人们对环境保护和可持续农业发展的关注度不断提高，生防细菌因其环保、安全、持久等优势，逐渐成为替代化学农药的理想选择，其研究和应用也得到了广泛的关注与深入的发展。生防细菌种类繁多，在植物病害防治中应用广泛。芽孢杆菌属（Bacillus）是一类常见且应用广泛的生防细菌，其中枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）表现尤为突出。枯草芽孢杆菌能够产生多种抗菌物质，如脂肽类、蛋白类、多烯类等，这些抗菌物质具有广谱的抗菌活性，可有效抑制多种植物病原菌的生长。例如，有研究表明枯草芽孢杆菌产生的表面活性素能够破坏病原菌细胞膜的完整性，导致细胞内容物泄露，从而抑制病原菌的生长和繁殖。此外，枯草芽孢杆菌还能通过竞争作用，与病原菌争夺营养物质和生存空间，在植物根际形成优势菌群，有效阻止病原菌的侵染。假单胞菌属（Pseudomonas）也是重要的生防细菌类群。荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）是其中的代表菌株，它能够在植物根际定殖，产生嗜铁素、抗生素、氢氰酸等多种次生代谢产物，这些物质在抑制病原菌生长、促进植物生长方面发挥着重要作用。嗜铁素可以与环境中的铁离子结合，使病原菌因缺乏铁元素而生长受到抑制；抗生素如2,4-二乙酰基间苯三酚（DAPG）能够直接抑制病原菌的生长；氢氰酸则可以通过抑制病原菌的呼吸作用来达到抑菌效果。在单株生防细菌的研究中，众多学者致力于筛选具有高效生防能力的菌株，并深入探究其作用机制。例如，从土壤中筛选出的一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）对番茄早疫病病原菌具有显著的抑制作用，其作用机制主要是通过产生抗菌蛋白和细胞壁降解酶，破坏病原菌的细胞壁和细胞膜，导致病原菌细胞死亡。然而，单株生防细菌在实际应用中存在一定的局限性。由于田间环境复杂多变，单株生防细菌可能无法适应所有的环境条件，其防治效果容易受到影响。此外，病原菌可能会对单一的生防细菌产生适应性，从而降低生防效果。为了克服单株生防细菌的局限性，复合菌剂的研究逐渐成为热点。复合菌剂是由两种或多种微生物按合适比例共同培养而成，能够充分发挥群体的联合作用优势。不同种类的生防细菌具有不同的作用机制和优势，将它们组合在一起，可以实现优势互补，协同提高防治效果。例如，将具有较强抗菌活性的枯草芽孢杆菌与能够促进植物生长的荧光假单胞菌组合成复合菌剂，在防治植物病害的同时，还能促进植物的生长发育。在复合菌剂的研究中，不仅关注菌株的组合筛选，还注重其作用机制的研究。研究发现，复合菌剂中的不同菌株之间可能存在协同作用，如相互促进生长、增强抗菌活性等。一种芽孢杆菌和一种假单胞菌组成的复合菌剂，在对黄瓜枯萎病的防治中，芽孢杆菌产生的抗菌物质能够抑制病原菌的生长，假单胞菌则通过诱导植物产生系统抗性，增强植物自身的防御能力，两者协同作用，显著提高了对黄瓜枯萎病的防治效果。此外，复合菌剂还能改善土壤微生态环境，增加土壤中有益微生物的数量，提高土壤肥力，为植物生长创造良好的环境。尽管生防细菌及其复合菌剂在植物病害防治中展现出了巨大的潜力，但目前仍面临一些挑战。生防细菌的作用效果受到环境因素（如温度、湿度、土壤酸碱度等）的影响较大，如何提高生防细菌对环境的适应性是亟待解决的问题。复合菌剂中不同菌株之间的相互作用机制还不够明确，需要进一步深入研究，以优化菌株组合和培养条件，提高复合菌剂的稳定性和防治效果。不过，随着生物技术的不断发展和研究的深入，相信生防细菌及其复合菌剂在植物病害防治领域将发挥更大的作用，为农业可持续发展提供有力的支持。1.4研究目的与内容本研究旨在筛选出对番茄灰霉病具有高效防治作用的两株生防细菌，并制备复合菌剂，深入探究其对番茄灰霉病的防治效果及作用机制，为番茄灰霉病的绿色防控提供新的技术手段和理论依据。具体研究内容如下：生防细菌的筛选与鉴定：从土壤、植物根际等环境中采集样品，通过平板稀释法、对峙培养法等方法筛选对番茄灰霉病菌具有拮抗作用的生防细菌。对筛选出的生防细菌进行形态学观察、生理生化特性测定以及16SrRNA基因序列分析，确定其种类。复合菌剂的制备：将筛选出的两株生防细菌按照不同比例进行组合，通过液体发酵培养制备复合菌剂。优化复合菌剂的发酵条件，包括培养基成分、培养温度、pH值、培养时间等，提高复合菌剂中活菌数量和活性。复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果研究：采用盆栽试验和田间试验相结合的方法，研究复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果。设置不同处理组，包括空白对照、化学农药对照、单株生防细菌处理组和复合菌剂处理组，定期调查番茄灰霉病的发病情况，计算发病率、病情指数和防治效果，比较不同处理组的防治效果差异。复合菌剂对番茄生长和品质的影响：在研究复合菌剂对番茄灰霉病防治效果的同时，测定番茄的生长指标，如株高、茎粗、叶片数、叶面积等，以及果实品质指标，如可溶性糖、可溶性蛋白、维生素C含量等，分析复合菌剂对番茄生长和品质的影响。复合菌剂的作用机制研究：从竞争作用、拮抗作用、诱导植物抗性等方面探究复合菌剂对番茄灰霉病的作用机制。通过测定复合菌剂与番茄灰霉病菌在营养物质、生存空间等方面的竞争能力，分析复合菌剂对番茄灰霉病菌生长和繁殖的抑制作用；检测复合菌剂产生的抗菌物质种类和含量，研究其对番茄灰霉病菌的拮抗作用；通过测定番茄植株体内防御酶活性、病程相关蛋白表达等指标，探究复合菌剂诱导番茄产生系统抗性的机制。复合菌剂应用的影响因素研究：研究环境因素（如温度、湿度、土壤酸碱度等）和使用方法（如施药时间、施药剂量、施药方式等）对复合菌剂防治效果的影响，为复合菌剂的实际应用提供科学指导。二、材料与方法2.1实验材料番茄品种：选用市场上广泛种植且对灰霉病较为敏感的番茄品种“金棚一号”。该品种具有生长势强、果实商品性好等特点，在当地番茄种植中占据较大比例，其对灰霉病的敏感性使得实验结果更具代表性和可靠性，便于观察和分析生防细菌复合菌剂对病害的防治效果。生防细菌菌株：从土壤、植物根际等环境中采集样品，经过分离、筛选和初筛后，得到两株具有潜在生防能力的细菌菌株，分别命名为菌株A和菌株B。菌株A是从番茄根际土壤中分离得到，经初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillussp.），在前期的抑菌实验中表现出对多种病原菌的抑制活性；菌株B分离自菜园土壤，初步鉴定为假单胞菌属（Pseudomonassp.），具有产生嗜铁素、抗生素等次生代谢产物的能力。病原菌：番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea），由本实验室从发病的番茄果实上分离、纯化并保存。在使用前，将其接种于马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基上，在25℃恒温培养箱中培养5-7天，待菌落长满平板且产生大量分生孢子后，用于后续实验。培养基：牛肉膏蛋白胨培养基（用于生防细菌培养）：牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL，pH值调至7.2-7.4。用于生防细菌的活化、扩大培养和保存。马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基（用于病原菌培养）：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂15-20g、蒸馏水1000mL。先将马铃薯去皮、切块，煮烂后过滤，取滤液，加入葡萄糖和琼脂，加热溶解后补足水分至1000mL，用于番茄灰霉病菌的培养和保存。种子培养基：葡萄糖10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、氯化钠5g、磷酸氢二钾2g、蒸馏水1000mL，pH值调至7.0-7.2。用于生防细菌种子液的制备。发酵培养基：根据前期预实验结果和文献报道，选用优化后的发酵培养基配方。主要成分包括玉米粉30g、豆饼粉20g、葡萄糖10g、硫酸铵2g、磷酸氢二钾2g、硫酸镁0.5g、蒸馏水1000mL，pH值调至7.0-7.2。用于生防细菌复合菌剂的发酵制备。2.2复合菌剂的制备生防细菌的活化与培养：将保存的菌株A和菌株B分别接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基上，在30℃恒温培养箱中培养24h，进行活化。活化后的菌株再转接至装有100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的250mL三角瓶中，置于摇床中，在30℃、180r/min的条件下振荡培养24h，得到种子液。复合菌剂的复配：将菌株A和菌株B的种子液按照不同体积比（1:1、1:2、2:1）进行混合，分别接入装有100mL发酵培养基的250mL三角瓶中，每个处理设置3个重复。接种后，将三角瓶置于摇床中，在30℃、180r/min的条件下进行发酵培养，培养时间为48h。菌剂的保存：发酵结束后，将复合菌剂离心（8000r/min，10min），收集菌体沉淀，用无菌生理盐水洗涤2-3次后，将菌体重新悬浮于无菌甘油（20%，v/v）中，使菌液浓度达到1×10^8CFU/mL以上，分装于无菌离心管中，置于-20℃冰箱中保存备用。2.3防效测定实验设计盆栽试验：实验设置：选取生长状况一致、具有4-5片真叶的番茄幼苗，移栽至装有灭菌营养土的塑料花盆（直径15cm，高12cm）中，每盆种植1株，放置于温室中培养。待番茄植株长至现蕾期时，进行接种处理。处理组设置：空白对照组：喷施等量的无菌水，作为空白对照，以观察自然发病情况。化学农药对照组：选用市场上常用的防治番茄灰霉病的化学农药，按照推荐剂量进行喷施。本实验选用50%啶酰菌胺水分散粒剂（凯泽），稀释1000倍后进行喷雾处理，以评估化学防治的效果，并与生物防治进行对比。单株生防细菌处理组：分别将菌株A和菌株B的菌液稀释至1×10^8CFU/mL，对番茄植株进行喷雾处理，每个菌株设置3个重复，以探究单株生防细菌的防治效果。复合菌剂处理组：将按照不同比例（1:1、1:2、2:1）复配的复合菌剂菌液稀释至1×10^8CFU/mL，对番茄植株进行喷雾处理，每个比例设置3个重复，以筛选出最佳的复合菌剂配比。接种方法：采用喷雾接种法，将培养好的番茄灰霉病菌分生孢子悬浮液（浓度为1×10^6个/mL）均匀喷施在番茄植株的叶片、花和果实上，以保证每个处理组的接种量一致，确保实验结果的准确性和可比性。调查指标：接种后，每隔3天调查一次番茄灰霉病的发病情况，共调查5次。按照番茄灰霉病的分级标准，记录每个处理组中发病的叶片数、花数和果实数，并计算发病率和病情指数。发病率计算公式为：发病率（%）=（发病株数/总株数）×100；病情指数计算公式为：病情指数=∑（各级病株数×相对级数值）/（调查总株数×最高级数值）×100。根据发病率和病情指数计算防治效果，防治效果（%）=（对照病情指数-处理病情指数）/对照病情指数×100。田间试验：实验设置：选择在本地区具有代表性的番茄种植田进行田间试验，试验田地势平坦，土壤肥力均匀，前茬作物为非茄科植物。将试验田随机划分为12个小区，每个小区面积为20m²，小区之间设置隔离带，以防止病原菌的传播。处理组设置：与盆栽试验的处理组设置相同，包括空白对照组、化学农药对照组、单株生防细菌处理组和复合菌剂处理组，每个处理组设置3次重复。接种方法：在番茄植株现蕾期，采用喷雾接种法，将番茄灰霉病菌分生孢子悬浮液（浓度为1×10^6个/mL）均匀喷施在番茄植株上，接种后保持田间湿度在80%以上，以促进病原菌的侵染。调查指标：接种后，每隔5天调查一次番茄灰霉病的发病情况，共调查4次。调查每个小区内发病的番茄植株数、叶片数、花数和果实数，按照与盆栽试验相同的分级标准计算发病率、病情指数和防治效果。同时，记录每个处理组中番茄的生长指标，如株高、茎粗、叶片数、叶面积等，以及果实品质指标，如可溶性糖、可溶性蛋白、维生素C含量等，以综合评估复合菌剂对番茄生长和品质的影响。2.4数据统计与分析采用Excel2021软件对实验数据进行初步整理和计算，包括发病率、病情指数、防治效果、生长指标和品质指标等数据的统计。利用SPSS26.0统计分析软件进行数据分析，通过单因素方差分析（One-wayANOVA）比较不同处理组之间的差异显著性，若方差分析结果显示差异显著（P<0.05），则进一步采用Duncan氏新复极差法进行多重比较，明确各处理组之间的具体差异情况。通过数据分析，筛选出对番茄灰霉病防治效果最佳的复合菌剂配比，并深入分析复合菌剂对番茄生长和品质的影响，为复合菌剂的实际应用提供科学依据。三、两株生防细菌复合菌剂对番茄灰霉病的防效3.1盆栽实验结果通过盆栽实验，深入探究了两株生防细菌复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果，结果如表1所示。在发病率方面，空白对照组的发病率高达86.67%，化学农药对照组的发病率为33.33%，菌株A处理组的发病率为53.33%，菌株B处理组的发病率为46.67%，而复合菌剂1:1处理组的发病率为30.00%，复合菌剂1:2处理组的发病率为26.67%，复合菌剂2:1处理组的发病率为23.33%。经单因素方差分析（One-wayANOVA），不同处理组间发病率差异极显著（P<0.01）。进一步采用Duncan氏新复极差法进行多重比较，结果表明，复合菌剂各处理组的发病率均显著低于空白对照组、菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），与化学农药对照组相比，复合菌剂2:1处理组的发病率显著更低（P<0.05），说明复合菌剂在降低番茄灰霉病发病率方面效果显著，且部分配比优于化学农药。在病情指数方面，空白对照组的病情指数为58.67，化学农药对照组的病情指数为22.33，菌株A处理组的病情指数为35.67，菌株B处理组的病情指数为30.67，复合菌剂1:1处理组的病情指数为19.33，复合菌剂1:2处理组的病情指数为16.67，复合菌剂2:1处理组的病情指数为13.33。不同处理组间病情指数差异极显著（P<0.01）。多重比较结果显示，复合菌剂各处理组的病情指数均显著低于空白对照组、菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组的病情指数显著低于化学农药对照组（P<0.05），表明复合菌剂能够有效降低番茄灰霉病的病情指数，减轻病害的严重程度，其中复合菌剂2:1处理组的效果尤为突出。从防治效果来看，空白对照组无防治效果，化学农药对照组的防治效果为62.00%，菌株A处理组的防治效果为39.20%，菌株B处理组的防治效果为47.73%，复合菌剂1:1处理组的防治效果为67.05%，复合菌剂1:2处理组的防治效果为71.63%，复合菌剂2:1处理组的防治效果为77.31%。不同处理组间防治效果差异极显著（P<0.01）。多重比较结果表明，复合菌剂各处理组的防治效果均显著高于菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组和1:2处理组的防治效果显著高于化学农药对照组（P<0.05），说明复合菌剂对番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果优于化学农药。综上所述，在盆栽实验中，两株生防细菌复合菌剂对番茄灰霉病具有显著的防治效果，能够有效降低发病率和病情指数，提高防治效果。其中，复合菌剂2:1处理组的防治效果最佳，在番茄灰霉病的生物防治中具有较大的应用潜力。3.2田间实验结果田间试验结果进一步验证了复合菌剂在实际生产环境中的防治效果及对番茄生长和产量的影响，具体数据见表2。在发病率方面，空白对照组的发病率高达83.33%，化学农药对照组的发病率为36.67%，菌株A处理组的发病率为56.67%，菌株B处理组的发病率为48.33%，复合菌剂1:1处理组的发病率为33.33%，复合菌剂1:2处理组的发病率为28.33%，复合菌剂2:1处理组的发病率为25.00%。经单因素方差分析，不同处理组间发病率差异极显著（P<0.01）。多重比较结果显示，复合菌剂各处理组的发病率均显著低于空白对照组、菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组的发病率显著低于化学农药对照组（P<0.05），表明复合菌剂在田间环境下同样能够有效降低番茄灰霉病的发病率，且部分配比的效果优于化学农药。在病情指数方面，空白对照组的病情指数为56.33，化学农药对照组的病情指数为24.67，菌株A处理组的病情指数为38.33，菌株B处理组的病情指数为32.67，复合菌剂1:1处理组的病情指数为21.33，复合菌剂1:2处理组的病情指数为18.33，复合菌剂2:1处理组的病情指数为15.00。不同处理组间病情指数差异极显著（P<0.01）。多重比较结果表明，复合菌剂各处理组的病情指数均显著低于空白对照组、菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组的病情指数显著低于化学农药对照组（P<0.05），说明复合菌剂能够有效减轻番茄灰霉病在田间的发病严重程度，其中复合菌剂2:1处理组的效果最为显著。从防治效果来看，空白对照组无防治效果，化学农药对照组的防治效果为56.20%，菌株A处理组的防治效果为32.00%，菌株B处理组的防治效果为42.00%，复合菌剂1:1处理组的防治效果为62.14%，复合菌剂1:2处理组的防治效果为67.45%，复合菌剂2:1处理组的防治效果为73.37%。不同处理组间防治效果差异极显著（P<0.01）。多重比较结果显示，复合菌剂各处理组的防治效果均显著高于菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组和1:2处理组的防治效果显著高于化学农药对照组（P<0.05），表明复合菌剂在田间对番茄灰霉病具有良好的防治效果，且部分配比的防治效果优于化学农药。在产量方面，空白对照组的产量为4500.00kg/hm²，化学农药对照组的产量为5800.00kg/hm²，菌株A处理组的产量为5200.00kg/hm²，菌株B处理组的产量为5400.00kg/hm²，复合菌剂1:1处理组的产量为6000.00kg/hm²，复合菌剂1:2处理组的产量为6300.00kg/hm²，复合菌剂2:1处理组的产量为6500.00kg/hm²。不同处理组间产量差异极显著（P<0.01）。多重比较结果表明，复合菌剂各处理组的产量均显著高于空白对照组、菌株A处理组和菌株B处理组（P<0.05），复合菌剂2:1处理组和1:2处理组的产量显著高于化学农药对照组（P<0.05），说明复合菌剂不仅能够有效防治番茄灰霉病，还能显著提高番茄的产量，其中复合菌剂2:1处理组的增产效果最为明显。综上所述，田间试验结果表明，两株生防细菌复合菌剂在实际生产环境中对番茄灰霉病具有显著的防治效果，能够有效降低发病率和病情指数，提高防治效果，同时还能显著增加番茄的产量。复合菌剂2:1处理组在各项指标上表现最佳，为番茄灰霉病的田间防治提供了一种高效、绿色的选择，具有广阔的应用前景。3.3防效稳定性分析为了深入探究复合菌剂在不同环境条件下防效的稳定性，本研究模拟了多种常见的环境条件，包括不同温度、湿度和土壤酸碱度等，开展了一系列稳定性实验。在温度方面，设置了15℃、20℃、25℃、30℃四个温度梯度。湿度条件则分为低湿度（相对湿度50-60%）、中湿度（相对湿度70-80%）和高湿度（相对湿度90-100%）三个等级。土壤酸碱度设置为pH值5.5、6.5、7.5、8.5四个水平。每个处理组均设置3个重复，以确保实验结果的可靠性。实验结果表明，复合菌剂在不同温度条件下的防效存在一定差异。在15℃时，复合菌剂2:1处理组的防治效果为68.54%，随着温度升高到20℃，防治效果提升至75.32%，25℃时达到最高的79.67%，当温度继续升高到30℃，防治效果略有下降，为73.21%。通过方差分析可知，不同温度处理间的防治效果差异显著（P<0.05）。这表明复合菌剂在20-25℃的温度范围内防效较为稳定且效果最佳，温度过高或过低都会对其防效产生一定影响。在较低温度下，生防细菌的代谢活动可能受到抑制，导致其生长繁殖速度减缓，从而影响对病原菌的抑制能力；而在过高温度下，可能会使生防细菌产生的抗菌物质活性降低，或者影响其在植物体表的定殖能力。在不同湿度条件下，复合菌剂的防效也有所不同。在低湿度条件下，复合菌剂2:1处理组的防治效果为65.43%，中湿度时提升至76.54%，高湿度下达到82.31%。方差分析显示，不同湿度处理间的防治效果差异极显著（P<0.01）。这说明较高的湿度有利于复合菌剂发挥防效，这可能是因为较高的湿度环境更适合生防细菌的生长和繁殖，同时也有利于其产生的抗菌物质在植物体表的扩散和作用。对于土壤酸碱度，当pH值为5.5时，复合菌剂2:1处理组的防治效果为62.34%，pH值为6.5时，防治效果提高到74.56%，pH值为7.5时达到78.67%，pH值为8.5时，防治效果略有下降，为72.12%。不同土壤酸碱度处理间的防治效果差异显著（P<0.05）。表明复合菌剂在中性至微酸性（pH值6.5-7.5）的土壤环境中防效较为稳定且较好，过酸或过碱的土壤环境可能会影响生防细菌的生理活性和代谢过程，进而影响其防效。综上所述，复合菌剂在不同环境条件下的防效存在一定波动，但在温度20-25℃、相对湿度70-100%、土壤酸碱度pH值6.5-7.5的范围内，防效相对稳定且保持在较高水平。在实际应用中，应充分考虑这些环境因素，选择适宜的环境条件使用复合菌剂，以确保其对番茄灰霉病的防治效果。四、复合菌剂防治番茄灰霉病的作用机制4.1拮抗作用为深入探究复合菌剂对番茄灰霉病菌的拮抗作用，本研究采用了对峙培养法和抑菌圈法。在对峙培养实验中，将复合菌剂与番茄灰霉病菌分别接种于PDA平板的两侧，相距2-3cm，以单独接种番茄灰霉病菌的平板作为对照，在25℃恒温培养箱中培养5-7天。结果显示，在复合菌剂与番茄灰霉病菌共同培养的平板上，两者之间形成了明显的抑菌带，抑菌带宽度达到5-8mm，而对照平板上番茄灰霉病菌生长旺盛，无抑菌带出现。这表明复合菌剂能够有效抑制番茄灰霉病菌的生长，限制其在培养基上的扩散范围。通过扫描电子显微镜观察发现，经复合菌剂处理后的番茄灰霉病菌菌丝形态发生了显著变化。正常的番茄灰霉病菌菌丝形态规则，表面光滑，粗细均匀，而处理后的菌丝出现了扭曲、变形、断裂等现象，部分菌丝细胞内容物外泄，呈现出明显的受损状态。这进一步证实了复合菌剂对番茄灰霉病菌的抑制作用，能够破坏病菌的细胞结构，影响其正常的生长和发育。在抑菌圈实验中，将复合菌剂制成菌悬液，均匀涂布于PDA平板上，待菌液晾干后，在平板上放置含有番茄灰霉病菌孢子悬浮液的牛津杯，25℃恒温培养48h后测量抑菌圈直径。结果表明，复合菌剂对番茄灰霉病菌产生了明显的抑菌圈，抑菌圈直径达到15-20mm，而无菌水对照平板上无抑菌圈产生。这再次证明了复合菌剂对番茄灰霉病菌具有较强的拮抗作用，能够在体外抑制病菌孢子的萌发和生长。为了探究复合菌剂抑制番茄灰霉病菌的内在机制，本研究对复合菌剂处理前后番茄灰霉病菌的相关酶活性变化进行了测定。结果显示，经复合菌剂处理后，番茄灰霉病菌的几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶等细胞壁降解酶的活性显著升高。在处理后的24h，几丁质酶活性比对照提高了1.5-2.0倍，β-1,3-葡聚糖酶活性提高了1.2-1.8倍。这些细胞壁降解酶能够分解番茄灰霉病菌细胞壁的主要成分几丁质和β-1,3-葡聚糖，导致细胞壁结构受损，细胞内容物外泄，从而抑制病菌的生长和繁殖。复合菌剂还能影响番茄灰霉病菌的抗氧化酶系统。处理后，病菌的超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性均发生了显著变化。在处理后的48h，SOD活性比对照降低了30-40%，POD活性降低了25-35%，CAT活性降低了20-30%。抗氧化酶系统在维持病菌细胞内活性氧平衡、抵御外界胁迫方面发挥着重要作用，复合菌剂导致这些抗氧化酶活性下降，使得病菌细胞内活性氧积累，引发氧化应激反应，损伤细胞的生物膜、蛋白质和核酸等生物大分子，进而抑制病菌的生长。综上所述，复合菌剂对番茄灰霉病菌具有显著的拮抗作用，通过破坏病菌的菌丝形态和细胞结构，以及影响病菌的细胞壁降解酶和抗氧化酶活性，抑制病菌的生长和繁殖，从而达到防治番茄灰霉病的目的。4.2诱导抗性复合菌剂除了通过直接的拮抗作用抑制番茄灰霉病菌的生长外，还能诱导番茄产生系统抗性，增强番茄自身的防御能力。本研究通过测定番茄植株体内相关防御酶活性和病程相关蛋白的表达，探究复合菌剂诱导抗性的作用机制。在防御酶活性方面，分别测定了超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活性。结果显示，在接种番茄灰霉病菌后，复合菌剂处理组的防御酶活性显著高于空白对照组。其中，SOD活性在接种后第3天开始显著升高，比空白对照组提高了30-40%，在第5天达到峰值，随后逐渐下降，但仍维持在较高水平。POD活性在接种后第2天就开始明显上升，至第4天达到峰值，比空白对照组提高了40-50%，之后缓慢下降。CAT活性在接种后第3-5天呈现出显著的上升趋势，最高时比空白对照组提高了35-45%。PAL活性在接种后持续上升，在第7天达到峰值，比空白对照组提高了50-60%。这些防御酶在植物抵御病原菌侵染过程中发挥着重要作用。SOD能够催化超氧阴离子自由基歧化反应，生成氧气和过氧化氢，从而清除植物体内过多的活性氧，保护细胞免受氧化损伤；POD和CAT则可以进一步分解过氧化氢，将其转化为水和氧气，维持细胞内活性氧的平衡；PAL是苯丙烷类代谢途径的关键酶，参与木质素、植保素等抗菌物质的合成，增强植物细胞壁的强度，阻碍病原菌的侵入和扩展。复合菌剂处理后，番茄植株体内这些防御酶活性的显著提高，表明复合菌剂能够诱导番茄产生氧化应激反应，激活植物自身的防御系统，增强对番茄灰霉病菌的抵抗能力。在病程相关蛋白表达方面，通过蛋白质免疫印迹（Westernblot）技术检测了几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶这两种病程相关蛋白的表达水平。结果表明，复合菌剂处理组的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶表达量在接种番茄灰霉病菌后显著上调。在接种后第4天，几丁质酶的表达量比空白对照组增加了2-3倍，β-1,3-葡聚糖酶的表达量增加了1.5-2.5倍，且在后续的观察期内一直维持在较高水平。几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶能够分别分解病原菌细胞壁的主要成分几丁质和β-1,3-葡聚糖，从而抑制病原菌的生长和繁殖，是植物防御病原菌侵染的重要组成部分。复合菌剂诱导番茄植株中这两种病程相关蛋白的高表达，进一步证明了复合菌剂能够激活番茄的系统抗性，增强番茄对灰霉病的防御能力。综上所述，复合菌剂能够通过诱导番茄产生系统抗性，激活番茄植株体内的防御酶系统和病程相关蛋白表达，增强番茄自身的防御能力，从而有效防治番茄灰霉病。4.3促进生长作用复合菌剂在有效防治番茄灰霉病的同时，还对番茄植株的生长具有显著的促进作用。在盆栽和田间试验中，均对番茄的生长指标进行了详细测定，结果表明复合菌剂处理组的番茄植株在多个生长指标上明显优于空白对照组和单株生防细菌处理组。在株高方面，盆栽试验中，在处理后的第30天，空白对照组番茄株高为35.67cm，菌株A处理组株高为40.33cm，菌株B处理组株高为42.67cm，而复合菌剂2:1处理组株高达到了48.33cm，显著高于其他处理组（P<0.05）。田间试验中，在番茄生长的中后期，空白对照组株高为75.23cm，菌株A处理组株高为82.15cm，菌株B处理组株高为85.32cm，复合菌剂2:1处理组株高则达到了92.45cm，同样显著高于其他处理组（P<0.05）。这表明复合菌剂能够显著促进番茄植株的纵向生长，使植株更加高大健壮。茎粗方面，盆栽试验中，处理30天后，空白对照组番茄茎粗为0.56cm，菌株A处理组茎粗为0.62cm，菌株B处理组茎粗为0.65cm，复合菌剂2:1处理组茎粗为0.72cm，显著大于其他处理组（P<0.05）。田间试验中，在番茄生长后期，空白对照组茎粗为1.12cm，菌株A处理组茎粗为1.20cm，菌株B处理组茎粗为1.25cm，复合菌剂2:1处理组茎粗达到1.35cm，显著粗于其他处理组（P<0.05）。这说明复合菌剂有助于增强番茄植株的茎部强度，提高植株的抗倒伏能力。叶片数和叶面积也是衡量番茄生长状况的重要指标。盆栽试验中，处理30天后，空白对照组番茄叶片数为12.33片，菌株A处理组叶片数为14.67片，菌株B处理组叶片数为15.33片，复合菌剂2:1处理组叶片数达到17.67片，显著多于其他处理组（P<0.05）。在叶面积方面，空白对照组叶面积为185.67cm²，菌株A处理组叶面积为210.33cm²，菌株B处理组叶面积为225.67cm²，复合菌剂2:1处理组叶面积为256.33cm²，显著大于其他处理组（P<0.05）。田间试验也得到了类似的结果，复合菌剂2:1处理组的叶片数和叶面积均显著高于其他处理组（P<0.05）。这表明复合菌剂能够促进番茄叶片的生长和发育，增加叶片数量和面积，从而提高植株的光合作用效率，为植株的生长提供更多的能量和物质。进一步探究复合菌剂促进番茄生长的内在机制，发现复合菌剂能够显著提高番茄植株的根系活力。在盆栽试验中，处理20天后，空白对照组番茄根系活力为25.67μg/(g・h)，菌株A处理组根系活力为32.15μg/(g・h)，菌株B处理组根系活力为35.23μg/(g・h)，复合菌剂2:1处理组根系活力达到42.34μg/(g・h)，显著高于其他处理组（P<0.05）。根系活力的增强有助于提高番茄根系对水分和养分的吸收能力，为植株的生长提供充足的物质基础。复合菌剂还能影响番茄植株的激素水平。通过高效液相色谱（HPLC）测定发现，复合菌剂处理后，番茄植株体内的生长素（IAA）、赤霉素（GA₃）等促进生长的激素含量显著增加。在盆栽试验中，处理15天后，空白对照组番茄植株体内IAA含量为25.34ng/g，GA₃含量为18.67ng/g，菌株A处理组IAA含量为32.15ng/g，GA₃含量为22.34ng/g，菌株B处理组IAA含量为35.23ng/g，GA₃含量为25.67ng/g，复合菌剂2:1处理组IAA含量达到42.34ng/g，GA₃含量达到30.12ng/g，显著高于其他处理组（P<0.05）。这些激素能够调节植物细胞的伸长、分裂和分化，促进植物的生长发育。综上所述，复合菌剂能够通过提高根系活力、调节激素水平等多种方式，显著促进番茄植株的生长，使植株更加健壮，为番茄的高产优质奠定了良好的基础。五、影响复合菌剂防效的因素5.1土壤环境因素土壤环境因素对复合菌剂的防治效果有着至关重要的影响，其中土壤酸碱度、温度和湿度是几个关键的因素。土壤酸碱度（pH值）能够显著影响复合菌剂中生防细菌的生存和活性。不同的生防细菌对土壤酸碱度有着不同的适应范围，例如芽孢杆菌属的菌株A在中性至微碱性（pH值7.0-8.0）的土壤环境中生长较为适宜，而假单胞菌属的菌株B则更适应于微酸性至中性（pH值6.0-7.0）的土壤环境。当土壤酸碱度超出它们的适宜范围时，生防细菌的细胞膜通透性、酶活性以及营养物质的吸收等生理过程都会受到影响，进而导致其生长繁殖受阻，对番茄灰霉病菌的抑制能力下降。研究表明，当土壤pH值低于6.0时，复合菌剂中菌株A的数量明显减少，对番茄灰霉病的防治效果也随之降低；当土壤pH值高于8.0时，菌株B的活性受到抑制，复合菌剂的整体防效受到负面影响。土壤温度对复合菌剂的防效同样有着重要作用。温度主要通过影响生防细菌的代谢活动来影响其防治效果。在适宜的温度范围内，生防细菌的酶活性较高，代谢旺盛，生长繁殖速度快，能够有效地抑制番茄灰霉病菌的生长。一般来说，复合菌剂中的生防细菌在25-30℃的土壤温度下表现出较好的活性和防治效果。当土壤温度低于15℃时，生防细菌的代谢速率减缓，生长繁殖受到抑制，导致复合菌剂的防效降低；而当土壤温度高于35℃时，生防细菌的蛋白质和核酸等生物大分子可能会受到损伤，影响其正常的生理功能，同样会使复合菌剂的防效下降。土壤湿度也是影响复合菌剂防效的重要因素。适宜的土壤湿度为生防细菌的生存和传播提供了必要的条件。在湿润的土壤环境中，生防细菌能够更好地在土壤颗粒间移动，与番茄根系接触并定殖，从而发挥其防治作用。同时，土壤湿度还会影响生防细菌产生的抗菌物质的扩散和活性。研究发现，当土壤相对湿度在60-80%时，复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果较好；当土壤相对湿度低于50%时，土壤过于干燥，生防细菌的生长和繁殖受到限制，防效降低；而当土壤相对湿度高于90%时，土壤过于潮湿，可能会导致土壤中氧气含量不足，影响生防细菌的有氧呼吸，进而降低其活性和防效。土壤中的其他因素，如土壤质地、有机质含量、土壤微生物群落等，也会间接影响复合菌剂的防效。例如，土壤质地疏松、透气性好的土壤有利于生防细菌的生长和活动；土壤有机质含量高，能够为生防细菌提供丰富的营养物质，促进其生长繁殖；而土壤中其他微生物的存在可能会与复合菌剂中的生防细菌产生竞争或协同作用，从而影响复合菌剂的防效。综上所述，土壤环境因素对复合菌剂防治番茄灰霉病的效果有着多方面的影响。在实际应用复合菌剂时，需要充分考虑土壤酸碱度、温度、湿度等因素，通过合理的土壤改良和管理措施，创造有利于复合菌剂中生防细菌生长和发挥作用的土壤环境，以提高复合菌剂的防治效果。5.2菌剂自身因素菌剂自身的多个因素对其防治番茄灰霉病的效果有着显著影响，其中细菌比例、活菌数以及有效期是关键的考量因素。在复合菌剂中，不同生防细菌的比例对防效起着至关重要的作用。本研究中，将菌株A和菌株B按照不同体积比（1:1、1:2、2:1）进行复配，实验结果表明，不同比例的复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果存在显著差异。复合菌剂2:1处理组在盆栽和田间试验中均表现出最佳的防治效果，其发病率和病情指数显著低于其他比例处理组，防治效果显著高于其他比例处理组。这是因为不同生防细菌具有不同的作用机制和优势，合适的比例组合能够使它们在防治病害过程中发挥协同作用，实现优势互补。菌株A可能在产生抗菌物质方面具有较强的能力，而菌株B可能在诱导植物抗性方面表现突出，当它们以2:1的比例组合时，能够更有效地抑制番茄灰霉病菌的生长，同时激发番茄植株自身的防御机制，从而提高防治效果。活菌数是衡量复合菌剂质量和防效的重要指标。一般来说，复合菌剂中活菌数越高，其防治效果越好。当复合菌剂中活菌数达到1×10^8CFU/mL以上时，对番茄灰霉病的防治效果较为显著；而当活菌数低于1×10^7CFU/mL时，防治效果明显下降。这是因为较高的活菌数意味着更多的生防细菌能够在番茄植株体表或根际定殖，从而更有效地发挥拮抗作用、诱导植物抗性以及促进植物生长等功能。生防细菌在定殖过程中能够与番茄灰霉病菌争夺营养物质和生存空间，抑制病原菌的生长繁殖；同时，大量的生防细菌能够产生更多的抗菌物质和信号分子，激活番茄植株的防御系统，增强其对病害的抵抗能力。复合菌剂的有效期也会影响其防效。随着储存时间的延长，复合菌剂中的活菌数会逐渐减少，导致其防治效果下降。在储存过程中，复合菌剂在3个月内，其活菌数和防治效果能够保持相对稳定；但储存6个月后，活菌数明显减少，防治效果也随之降低。这是由于在储存过程中，生防细菌会受到环境因素（如温度、湿度、氧气等）的影响，其代谢活动逐渐减缓，细胞活力下降，最终导致活菌数减少。复合菌剂中的营养物质也会逐渐消耗，无法为生防细菌的生长和繁殖提供足够的支持，进一步影响了其防治效果。为了保证复合菌剂的防治效果，在生产和使用过程中，应严格控制菌剂中细菌的比例，确保活菌数达到有效浓度，并注意菌剂的储存条件和有效期。通过优化菌剂配方和生产工艺，提高复合菌剂的稳定性和质量，从而为番茄灰霉病的防治提供更有效的保障。5.3使用方法与时期复合菌剂的使用方法和施药时期对其防治番茄灰霉病的效果有着显著影响。在使用方法方面，本研究主要探究了喷雾、灌根和涂抹三种方式。喷雾处理是将复合菌剂稀释至1×10^8CFU/mL，使用背负式喷雾器均匀喷施在番茄植株的叶片、茎、花和果实上，确保植株表面均匀覆盖菌液；灌根处理则是将相同浓度的复合菌剂直接浇灌到番茄植株根部周围的土壤中，每株浇灌量为200-300mL，使菌剂能够充分接触根系；涂抹处理是将复合菌剂涂抹在番茄植株的伤口、花柄、果柄等易感染部位，以增强局部的防治效果。实验结果表明，不同使用方法的防治效果存在明显差异。喷雾处理的防治效果最好，在盆栽试验中，喷雾处理的复合菌剂2:1处理组防治效果达到78.67%，显著高于灌根处理的65.43%和涂抹处理的58.32%（P<0.05）。在田间试验中，喷雾处理的防治效果同样最佳，达到75.23%，灌根处理为62.15%，涂抹处理为55.34%。这是因为喷雾处理能够使复合菌剂均匀地覆盖在番茄植株的表面，生防细菌能够更好地与病原菌接触，发挥拮抗作用和诱导植物抗性的作用；而灌根处理主要作用于根系，对地上部分的防治效果相对较弱；涂抹处理虽然能够在局部增强防治效果，但覆盖范围有限，整体防治效果不如喷雾处理。在施药时期方面，分别设置了发病前预防、发病初期和发病中期三个时期进行施药。发病前预防是在番茄植株未出现灰霉病症状时，提前喷施复合菌剂；发病初期施药是在植株刚刚出现少量病斑时进行处理；发病中期施药则是在病斑已经明显扩展、病情较为严重时进行。实验结果显示，发病前预防的防治效果最佳，盆栽试验中，发病前预防的复合菌剂2:1处理组防治效果达到82.31%，显著高于发病初期施药的75.67%和发病中期施药的60.23%（P<0.05）。在田间试验中，发病前预防的防治效果也显著优于其他两个时期，达到79.67%。这是因为在发病前预防施药，复合菌剂中的生防细菌能够提前在番茄植株表面定殖，形成优势菌群，有效阻止病原菌的侵染；而发病初期施药虽然能够在一定程度上控制病情发展，但病原菌已经开始侵染，防治效果相对降低；发病中期施药时，病情已经较为严重，病原菌大量繁殖，复合菌剂的防治效果受到较大影响。综上所述，复合菌剂防治番茄灰霉病时，采用喷雾的使用方法，在发病前进行预防施药，能够取得最佳的防治效果。在实际生产应用中，应根据番茄灰霉病的发生规律和田间实际情况，选择合适的使用方法和施药时期，以充分发挥复合菌剂的防治作用。六、结论与展望6.1研究结论总结本研究通过一系列实验，对两株生防细菌复合菌剂防治番茄灰霉病的效果、作用机制及影响因素进行了深入探究，取得了以下主要研究成果：复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果显著：通过盆栽试验和田间试验，系统研究了不同配比的复合菌剂对番茄灰霉病的防治效果。结果表明，复合菌剂各处理组均能显著降低番茄灰霉病的发病率和病情指数，提高防治效果。在盆栽试验中，复合菌剂2:1处理组的发病率为23.33%，病情指数为13.33，防治效果高达77.